膜蛋白新機制參與的體誘導鮑曼不動桿菌耐碳青霉烯類抗生素〔1〕

李小玉，楊建林

(贛州市第五人民醫(yī)院，江西 贛州 341000)

膜蛋白新機制參與的體誘導鮑曼不動桿菌耐碳青霉烯類抗生素〔1〕

李小玉，楊建林

(贛州市第五人民醫(yī)院，江西 贛州 341000)

目的：通過研究膜蛋白改變與碳青霉烯類抗生素耐藥，闡述膜蛋白參與的耐藥機制，更好地為臨床選擇抗生素提供合理建議，同時為新藥開發(fā)提供參考。方法：采用瓊脂紙片擴散法(K-B法)及瓊脂稀釋法從76 株廣泛耐藥鮑曼不動桿菌中篩選出8 株僅對多黏菌素敏感、1 株全敏感臨床株。采用PAβN外排泵抑制試驗檢測其外排泵表型。結果：外排泵抑制劑(PAβN)抑制試驗顯示受試8 株菌中4 株亞胺培南最低抑制濃度(MIC)值下降≤1/4，而美羅培南MIC值下降至1/4及以下。耐藥菌株和敏感菌株差異膜蛋白組學鑒定出肌肉(Car)，外膜蛋白(OmpA)和推測分子量為41 ku外排泵膜蛋白。結論：本次試驗中膜孔蛋白CarO表達缺失可能參與鮑曼不動桿菌對碳青霉烯抗生素耐藥，外排泵過度表達可能參與細菌對美羅培南的耐藥。

膜蛋白改變；碳青霉烯類；抗生素；耐藥機制

鮑曼尼氏不動桿菌(Ab)為一特別容易產生抗藥性傾向的菌種，再加上抗生素的廣泛使用，更易演變成多重抗藥性的菌種，近年來急速躍升為院內感染最重要的致病菌之一。鮑曼不動桿菌的抗藥性分類，依據研究報告指出多重抗藥性是指對三種以上不同種類(class)的抗生素具抗藥性；泛抗藥性(eXDR)是指對所有的抗生素除了1～2種不同class以外其他的抗生素都產生抗藥性，而全抗藥性(PDR)則是指對所有測試的抗生素都具抗藥性[1]。由于A.baumannii對多種抗生素容易產生抗藥性，近來發(fā)表的論文更指出對目前臨床上具有全抗藥性的鮑曼不動桿菌的菌株已有逐年增加的趨勢[2]。采用瓊脂

〔1〕本課題為贛州市指導性科技計劃任務項目(項目編號：GZ2015ZSF333)

紙片擴散法(K-B法)及瓊脂稀釋法從76 株廣泛耐藥鮑曼不動桿菌中篩選出8 株僅對多黏菌素敏感者進行分析，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

2014年12月—2016年2月收集76 株廣泛耐藥鮑曼不動桿菌中篩選出8 株僅對多黏菌素敏感、1株全敏感臨床株。

1.2 試驗方法 用瓊脂紙片擴散法及瓊脂稀釋法從76株廣泛耐藥鮑曼不動桿菌中篩選出8株僅對多黏菌素敏感、1株全敏感臨床株。采用PAβN外排泵抑制試驗檢測其外排泵表型。重點篩選泛耐藥鮑曼不動桿菌蛋白質組中表達上調或下調及缺失的蛋白質斑點。經脫色、酶解后得到肽段混合物用全自動化光觸發(fā)光猝天(LTQ)多級一維線性離子阱液質聯(lián)用儀工作站分析。

2 結 果

2.1 藥敏試驗結果

8 株鮑曼不動桿菌對美羅培南和亞胺培南均耐藥。對亞胺培南、美羅培南的最低抑制濃度(MIC)值分別達8->128 mg/L、16->128 mg/L，對其他12 種抗生素均耐藥，僅多粘菌素敏感。

2.2 外排泵表型篩查結果

8 株鮑曼不動桿菌泵抑制劑協(xié)同試驗結果顯示亞胺培南MIC值下降均≤4倍，美羅培南的MIC值下降≥4 倍者有4 株，見表1。

表1 泵抑制劑PAβN對8 株耐碳青霉烯類鮑曼不動桿菌抑制結果 mg/L

3 討 論

關于感染不動桿菌屬(Acinetobacter spp.)時產生的毒性，特點包括：第一，由鼠李糖(L-rhamnose)，D-葡萄糖(D-glucose)，葡萄糖醛酸(D-glucuronic acid)，和D-甘露糖(D-mannose)形成的多醣體莢膜，可能提供了菌株表面更多的親水性；第二，出現線毛和莢膜多醣體，具有黏附在人類上皮細胞的特性；第三，產生酵素破壞組織的脂質；第四，出現脂質A和細胞壁的黏多糖成分等潛在毒性角色；第五，黏液會在混合感染時增強它的毒性，有研究指出黏液與對抗嗜中性球的細胞毒性相關，且會抑制嗜中性球移形進入老鼠的腹膜液；第六，細菌在人體中獲得成長所必須的鐵離子的能力也是一個重要的毒性決定因子，且某些Acinetobacter spp.已顯示能產生嗜鐵載體(如aerobactin)和與鐵反應的外膜接受蛋白[3]。細菌抗藥性可由偵測其表現型和基因型的方法進行，一般臨床微生物實驗室最常用的方法有兩種：定性型的抗生素紙生擴散測試，測量抑制環(huán)的大小；另一個是定量型的肉湯或培養(yǎng)基稀釋方法，測量抗生素的最低抑菌濃度[4]。而基因型的測試是偵測細菌是否具有抗藥機制，如抗藥基因，或藥物作用目標的基因突變。大多數實驗室所采用表現型的測試方法及感受性的判斷是依據臨床檢驗室標準研究所(CLSI)所設定的準則，來決定受測試菌株對不同抗生素的敏感性，包含感受性、中間性及抗藥性等。其目的是用來判斷要使用何種抗生素才能達到最佳的治療效果[5-6]。臨床上最常使用的方法為抗生素紙錠擴散法及最低抑制濃度試驗，在診斷實驗室中，對于確認微生物對于抗生素的抗藥性非常重要，也能用來監(jiān)測新的抗生素的活性[7-8]。本組資料顯示，8 株鮑曼不動桿菌對美羅培南和亞胺培南均耐藥。對亞胺培南、美羅培南的MIC值分別達8->128 mg/L、16->128 mg/L，對其他12 種抗生素均耐藥，僅對多黏菌素敏感。另外，8 株鮑曼不動桿菌泵抑制劑協(xié)同試驗結果顯示亞胺培南MIC值下降均≤4倍，美羅培南的MIC值下降≥4 倍者有4 株。

總之，本次試驗中膜孔蛋白CarO表達缺失可能參與鮑曼不動桿菌對碳青霉烯抗生素耐藥，外排泵過度表達可能參與細菌對美羅培南的耐藥。

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(本文編輯：張榮梅)

謝建生(1984— )，男，江西省贛州市人，主管藥師，主要從事醫(yī)院藥學工作。

1671-8631(2017)05-0366-03

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2016-08-30