玫瑰花中黃酮提取及其抗氧化活性的研究

王 斌

玫瑰花中黃酮提取及其抗氧化活性的研究

王 斌

（桐城師范高等專科學(xué)校 小學(xué)教育系，安徽 桐城 231403）

以玫瑰花蕾為原料，利用乙醇為溶劑提取玫瑰花中的黃酮物質(zhì)，通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)探索最佳提取條件．結(jié)果表明：提取玫瑰花中黃酮類物質(zhì)的最佳條件為乙醇濃度65%，料液比為1∶20，80℃恒溫提取2．5h．同時(shí)利用抗氧化能力檢測(cè)試劑盒（FRAP法）檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，玫瑰花中提取的黃酮物質(zhì)具有明顯的抗氧化作用．

黃酮；玫瑰花；抗氧化活性

隨著人們對(duì)綠色食品的追求和環(huán)保意識(shí)的提高，現(xiàn)代的植物學(xué)研究越來(lái)越深受人們的重視．眾多實(shí)驗(yàn)表明，黃酮類物質(zhì)具有廣泛活性包括抗氧化活性，抗衰老，抗腫瘤，抗菌等作用［1］，其對(duì)藥品的開發(fā)也有著極其重要的作用［2］．

玫瑰是薔薇科薔薇屬落葉灌木（Rosa rugosa），玫瑰花中的槲皮素等黃酮類化合物含量非常豐富，而槲皮素等具有很好的抗氧化作用，應(yīng)用前景廣泛．

1 材料與方法

1．1 實(shí)驗(yàn)用品

1．1．1 材料

玫瑰花蕾，購(gòu)于中國(guó)藥材市場(chǎng)網(wǎng)，產(chǎn)地河南汝南．

1．1．2 試劑

蘆丁（純度≥98%），無(wú)水乙醇、亞硝酸鈉、檸檬酸、硝酸鋁、氫氧化鈉、除特殊說(shuō)明外均用蒸餾水作為溶劑．

1．1．3 儀器設(shè)備

電子天平FA2004N（上海精科）、分光光度計(jì)UV－2200型（上海奧析）、FZ102微型植物試樣粉碎機(jī)（黃驊新興）、恒溫水浴鍋HHS（上海精科）、循環(huán)水真空泵SH2DⅢ（予華儀器）、FRAP試劑盒（南京建成）、布氏漏斗、鐵架臺(tái)、蛇形冷凝管、圓底蒸餾瓶、燒杯、溫度計(jì)、量筒、容量瓶、試劑瓶、玻璃棒、夾子、洗耳球等．

1．2 實(shí)驗(yàn)方法

1．2．1 樣品的預(yù)處理

玫瑰花蕾去掉花萼，用粉碎機(jī)粉碎，按1∶20料液比、65%乙醇為溶劑，在70℃條件下恒溫水域回流提取2．5h，然后抽濾得到濾液備用．

1．2．2 總黃酮的測(cè)定方法

蘆丁對(duì)照品0．020g，65%乙醇溶解，定容100mL，制備成0．2mg／mL標(biāo)準(zhǔn)溶液．稱取0、2．0、4．0、6．0、8．0、10．0mL對(duì)照溶液，置于50mL容量瓶中，用65%乙醇定容至25mL，各加5%NaNO21．4mL，5min后，加入10%的Al（NO3）31．4mL，6min后再加1mol／L的氫氧化鈉20mL，用65%的乙醇定容至刻度線，10min后，波長(zhǎng)510nm處測(cè)吸光度值［3－4］．結(jié)果見圖1．

1．2．3 提取單因素試驗(yàn)

1．2．3．1 溫度變化時(shí)黃酮的提取

稱取2g玫瑰花粉末在料液比為1∶20，65%乙醇條件下，60℃、70℃、80℃、90℃分別提取2．5h．

圖1 提取的總黃酮含量標(biāo)準(zhǔn)曲線

1．2．3．2 料液比變化時(shí)黃酮的提取

稱取2g玫瑰花粉末在溫度為80℃，65%乙醇條件下，按料液比1∶10、1∶20、1∶30、1∶40提取2．5h．

1．2．3．3 時(shí)間變化時(shí)黃酮的提取

稱取2g玫瑰花粉末在溫度為80℃，料液比為1∶20，65%乙醇條件下，分別改變提取時(shí)間2h、2．5h、3h、3．5h提取黃酮類物質(zhì)．

1．2．3．4 提取液濃度變化時(shí)黃酮的提取

稱取2g玫瑰花粉末在料液比為1∶20，溫度為80℃的條件下，分別改變提取乙醇濃度55%、60%、65%、70%，提取2．5h，考察其對(duì)總黃酮的影響．

1．2．4 正交試驗(yàn)

單因素下，選擇乙醇濃度、溫度、時(shí)間、料液比進(jìn)行4因素3水平正交試驗(yàn)，確定最佳提取條件．正交試驗(yàn)因素水平見表1．

1．2．5 玫瑰花中黃酮的抗氧化活性測(cè)定

利用抗氧化能力檢測(cè)試劑盒（FRAP）法來(lái)檢測(cè)玫瑰花中黃酮物質(zhì)的抗氧化活性．

玫瑰花黃酮液的配制：準(zhǔn)確稱取已制備的玫瑰花黃酮提取物，在75℃下加熱用蒸餾水溶解，配制成玫瑰花提取物質(zhì)量濃度為10mg／mL的溶液．然后將溶液分別用蒸餾水稀釋成質(zhì)量濃度為0．5、1、2、4、5、8mg／mL的測(cè)定液備用．

測(cè)定方法：Fe3＋還原試劑盒法

總抗氧化能力＝（測(cè)定管OD—對(duì)照管OD）?反應(yīng)體積?樣品稀釋倍數(shù)／（0．01?30?取樣量）

表1 正交試驗(yàn)因素

2 結(jié)果與討論

2．1 單因素考察

2．1．1 溫度對(duì)提取的影響

精確稱取玫瑰花粉2g，以料液比為1∶20、65%乙醇溶液提取2．5h，趁熱抽濾，將濾液用50mL容量瓶定容到刻度線，搖勻，取2mL溶液于50mL容量瓶中．

由圖2可見在料液比、時(shí)間和乙醇濃度不變的情況下，黃酮的提取含量隨溫度增加而不斷增加，超過(guò)80℃時(shí)，黃酮提取含量開始減少．因此在溫度為80℃時(shí)，其它因素不變的情況下，提取的黃酮含量最多．

圖2 不同溫度下黃酮含量提取

圖3 不同料液比黃酮含量提取

2．1．2 料液比對(duì)提取的影響

精確稱取玫瑰花粉2g，溫度為80℃、65%乙醇溶液提取2．5h，趁熱抽濾，將濾液用50mL容量瓶定容到刻度線，搖勻，取2mL溶液于50mL容量瓶中．

由圖3可見在溫度、乙醇濃度、時(shí)間三因素不變情況下，提取黃酮的含量隨料液比逐漸增加而不斷增加，料液比為1∶20后黃酮的提取量開始減少，因此在料液比為1∶20時(shí)提取黃酮的含量最多．

2．1．3 加熱時(shí)間對(duì)提取的影響

精確稱取玫瑰花粉2g，以料液比為1∶20、65%乙醇溶液、溫度為80℃按不同時(shí)間提取，趁熱抽濾，將濾液用50mL容量瓶定容到刻度線，搖勻，取2mL溶液于50mL容量瓶中．

由圖4可見，在溫度、料液比、乙醇濃度不變的情況下改變提取黃酮的時(shí)間，提取黃酮的含量是隨著加熱時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸升高，在加熱時(shí)間為2．5小時(shí)左右，黃酮的提取量為最佳．

圖4 不同加熱時(shí)間黃酮含量提取

圖5 不同乙醇濃度黃酮含量提取

2．1．4 溶劑的濃度對(duì)提取的影響

精確稱取玫瑰花粉2g，以料液比為1∶20，溫度為80℃提取2．5h，趁熱抽濾，將濾液用50mL容量瓶定容到刻度線，搖勻，取2mL溶液于50mL容量瓶中．

由圖5可見在溫度、料液比、時(shí)間不變的情況下，隨著乙醇濃度的增加黃酮的提取量不斷增加，乙醇濃度65%為最佳提取濃度．

2．2 正交試驗(yàn)

在單因素的基礎(chǔ)上，選擇乙醇濃度、料液比、溫度、提取時(shí)間4種因素3水平進(jìn)行正交試驗(yàn)，結(jié)果見表2．

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果

由表2可見，乙醇濃度為65%，料液比為1∶20，溫度為80℃條件下，恒溫2．5h所提取的黃酮含量最多．

表3 方差分析

由表3中方差分析可見，在溫度、料液比、時(shí)間、乙醇濃度四因素中，料液比對(duì)黃酮的提取最具有顯著性影響．

2．3 總抗氧化能力的測(cè)定

利用抗氧化能力檢測(cè)試劑盒對(duì)提取的黃酮進(jìn)行抗氧化能力測(cè)定，結(jié)果見表4及圖6．

表4 提取黃酮的總抗氧化能力

圖6 玫瑰花中黃酮提取物的抗氧化能力

從表4和圖6中可以看出，玫瑰花中黃酮的提取物抗氧化能力較強(qiáng)，并具有明顯的量效關(guān)系．

3 結(jié)論

從單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果中可以得出，玫瑰花中提取黃酮類物質(zhì)的最佳條件為：乙醇濃度為65%，料液比為1∶20，在溫度為80℃條件下恒溫2．5h所提取的黃酮的含量是最多的．利用抗氧化能力檢測(cè)試劑盒（FRAP法）檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，玫瑰花中提取的黃酮物質(zhì)具有很明顯的抗氧化作用．

［1］ 龔曉武，李炳奇，劉丹丹，等．紅景天黃酮提取及其抗氧化活性研究［J］．西北林學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，26（3）：136－138．

［2］ 邱賀媛，章宋潔．薄荷葉中黃酮類物質(zhì)提取及其抗氧化活性研究［J］．安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38（34）：19335－19337，19340．

［3］ 謝 瓊，張益娜，李 敏，等．紫外分光光度法測(cè)定玫瑰花和玫瑰花渣中的總黃酮含量［J］．農(nóng)產(chǎn)品加工，2007（4）：19－21．

［4］ 張春蘭，葉 林，吳曉軍，等．薔薇果黃酮類物質(zhì)對(duì)油脂的抗氧化作用［J］．中國(guó)油脂，2010（1）：44－46．

Extraction and Antioxidant Activity of Flavonoids from Rose

WANG Bin
（Department of Primary Education，Tongcheng Teachers College，Tongcheng 231403，China）

The rose bud as raw material，the ethanol as solvent to extract flavonoids from rose，by single factor ex?periment and orthogonal experiment，it explored the optimal extraction conditions of flavonoids．The results showed that the optimum conditions for extraction of flavonoids from rose were ethanol concentration 65%，material to liq?uid ratio of 1∶20，extraction temperature of 2．5h at constant temperature of 80 degrees．Furthermore，with the help of FRAP，it finds that the flavonoids from rose is of obvious antioxidation．

flavonoids；rose；antioxidant activity

S685．12

A

2095－4476（2017）05－0029－04

（責(zé)任編輯：徐 杰）

2016－12－08；

2017－01－10

王 斌（1981—），男，安徽桐城人，桐城師范高等專科學(xué)校小學(xué)教育系講師．