腹瀉型腸易激綜合征肝郁脾虛病證結合動物模型研究進展

舒圓月，肖小芹，鄧桂明，，陳鎮，楊立平，歐陽林旗，賀艷萍，向彪，何海

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腹瀉型腸易激綜合征肝郁脾虛病證結合動物模型研究進展

舒圓月1，肖小芹1，鄧桂明1，2，陳鎮2，楊立平3，歐陽林旗2，賀艷萍1，向彪1，何海1

1.湖南中醫藥大學，湖南長沙 410208；2.湖南中醫藥大學第一附屬醫院，湖南長沙 410007； 3.湖南省腫瘤醫院，湖南長沙 410013

目前中醫臨床治療腹瀉型腸易激綜合征（IBS-D）以辨病辨證相結合為主，因此，建立IBS-D肝郁脾虛病證結合動物模型作為中西醫結合的中醫藥創新理論日益受到關注，并逐漸成為中醫實驗動物模型發展的新方向。本文對IBS-D肝郁脾虛病證結合動物模型的近年研究現狀進行綜述，探討建立IBS-D肝郁脾虛動物模型的方法與研究思路，為中醫藥治療IBS-D的作用機理研究和新藥開發提供參考。

腹瀉型腸易激綜合征；肝郁脾虛型；病證結合；動物模型；綜述

腸易激綜合征（irritable bowel syndrome，IBS）是以腹痛或腹部不適，大便習慣改變，并伴有一系列胃腸道癥狀及精神癥狀而腸道缺乏明顯病理性改變為特征的功能紊亂性疾病，主要分為腹瀉型（IBS-D）、便秘型（IBS-C）、混合型或不確定型（IBS-M/IBS-A），其中以IBS-D最為常見[1]。IBS-D屬中醫學“腹痛”“泄瀉”等范疇，肝郁脾虛型、脾胃虛弱型、脾腎陽虛型、寒熱互結型、陰虛腸燥型為本病主要證候，其中以肝郁脾虛型最為常見[2]。本病主要病理原因有胃腸動力異常、精神因素、內臟痛覺高敏、腸道感染及菌群失調等，其中胃腸動力異常和內臟痛覺高敏性被認為是IBS主要的病理生理學基礎[3]。

病證結合不僅是中醫臨床的重要診療模式，也是中西醫結合的中醫藥理論創新[4]。目前，IBS-D肝郁脾虛病證結合動物模型的構建思路大致為根據現代醫學理論復制疾病模型，在疾病模型的基礎上根據中醫理論復制證候模型。茲就近年IBS-D肝郁脾虛病證結合模型相關文獻綜述如下。

1 造模方法及特點

趙迎盼等[5]采用新生母子分離2周＋慢性束縛3周＋番瀉葉灌胃1周法成功復制IBS-D肝郁脾虛型病證癥結合大鼠模型，該作者查閱并統計了涉及IBS-D的動物實驗研究，采用番瀉葉灌胃造成腹瀉的文獻約占50%，而其余研究多采用慢性束縛及其他應激方法，并且得出結論：病證結合模型更能模擬IBS-D患者臨床癥狀及發病機制。

張北華[6]通過對幾種造模方法進行動物實驗對比研究表明：采用母子分離8周＋慢性束縛應激3周＋番瀉葉灌胃1周可成功建立肝郁脾虛型病證結合大鼠模型；采用慢性束縛聯合母子分離法造模優于單一因素法；該研究所建立的肝郁脾虛型大鼠模型具有內臟高敏感性、腸道通透性增加、抑郁和免疫功能異常等多種特征。筆者認為，該研究母子分離時間較長（8周）可能導致影響因素增加，子鼠3周齡斷奶情況下可脫離母鼠獨立攝食水，無需同與母鼠同籠，故可綜合其他造模方法進行改善。

王微等[7]采用母子分離2周＋慢性束縛應激3周造模，研究表明，病證結合動物模型用于中藥藥效評價優于現代醫學疾病模型和單純中醫證候模型；新生母子分離法疊加慢性束縛刺激法，可建立較為穩定的肝郁脾虛型病證結合大鼠模型。筆者認為，在此基礎上疊加番瀉葉灌胃能產生腹瀉癥狀，可更好地建立IBS-D肝郁脾虛病證結合模型。

李燕舞等[8]研究發現，采用母子分離2周和乙酸灌腸刺激2周均可建立IBS-D內臟高敏大鼠模型，并將二者進行對比得出結論：母子分離模型能更好地模擬IBS-D腹痛及排便異常癥狀。王輝等[9]采用乙醚麻醉后乙酸灌腸合并束縛1周造模成功。筆者認為，該方法雖可以使大鼠產生腹瀉癥狀，但造模時間短，因素單一，易損傷腸道黏膜，不符合IBS-D的病程長、多因素致病以及無器質性病變等特點。

房財富等[10]采用母子分離2周＋慢性束縛3周＋番瀉葉灌胃1周方法造模，成功建立了IBS-D肝郁脾虛病證結合模型，結果表明，該模型具有內臟高敏、腸道功能障礙、腹瀉、抑郁等多種特征，且該模型腸道組織形態無異常病變，能較好地模擬慢性功能性腸病的主要特點。

鄧桂球等[11]采用番瀉葉水煎液灌胃同時結合束縛2周的方法造模。筆者認為，該方法缺少早期生活應激事件，在IBS-D模型內臟高敏這一基本特點上有所欠缺，應該適當改進。

Coutinho S V等[12]通過母子分離合并其他應激方法來模擬IBS-D的癥狀或中醫肝郁脾虛的癥狀，取得穩定的造模結果，且多因素大鼠模型總體模擬效果優于單因素大鼠模型。母子分離持續時間對比研究表明，每日15 min簡短分離會降低仔鼠成年HPA軸對應激的反應能力，而每日＞3 h分離時間則出現相反結果，并且出現內臟高敏感反應；實驗動物性別對造模影響的研究表明，盡管大多數實驗為避免性激素影響大多采用雄性鼠仔進行實驗，但母子分離雄鼠的腸道敏感性增高不及雌鼠明顯，這與臨床上IBS-D多發于女性患者的情況相一致。

綜上，采用母子分離＋束縛＋番瀉葉灌胃方法能較好的建立IBS-D肝郁脾虛動物模型，具體方法為對新生2 d雌性子鼠與母鼠進行分離，每日3 h，持續2周，3周齡斷奶并從母鼠中分離，棄母鼠不用，給予常規喂養至8周齡后，篩選體質量＞200 g的大鼠采用束縛瓶對大鼠肩部和腹部進行束縛，使其固定不動，3 h/d，連續3周。束縛應激期從第3周開始給予番瀉葉煎劑灌胃，連續1周。IBS-D動物模型評價標準應在內臟高敏的基礎上，具備行為學表現（少動易怒、抑郁、毛色晦黯、體質量下降或增長過緩、食量減少等）、腸道功能障礙、腹瀉以及結腸病理組織形態無器質性病變等特點。

2 造模研究思路

IBS-D的發病絕非單一因素所致，為多因素相互交織、相互作用引起，更非某一單方面機制所能詮釋，并且其臨床癥狀也相對復雜和多樣，因此采用多因素復合造模方法更能貼近IBS-D病理生理過程。研究表明，病證結合動物模型用于中藥藥效評價要優于西醫疾病模型和單純中醫證候模型，它體現了中西醫兩種醫學的互補融合，更有說服力[13]。IBS-D無器質性病變，診斷主要依據臨床癥狀和體征，而動物沒有語言表達，因此實驗研究中的動物模型的建立方法應該從病因、癥狀、病程上兼具本病的特點。

80%IBS-D患者中，應激可造成IBS-D癥狀發作或加重，生理心理應激刺激對IBS-D產生直接致病作用，在IBS-D的病理生理學和臨床表現中具有重要作用[14]。IBS-D是在腦-腸軸參與下，涉及感覺、動力、情感、認知和行為等多因素的疾病，腸易激綜合征動物模型依據刺激靶點的不同，主要分為中樞和外周兩種[15]，而母子分離法是一種典型的腦腸軸動物模型，涵蓋了上述多種因素的IBS-D較為理想的動物模型，早期的生活應激事件，如童年忽視、失去父母和受虐待等能夠影響結腸動力和引起內臟痛覺過敏，使成年后發生IBS的危險性增加[16-17]。大鼠母子分離法符合人類生命早期母子分離的特征，通過IBS-D患者早期生活應激事件，可模擬IBS-D的某些病因，產生內臟高敏狀態，甚至出現腸道屏障功能改變、腸道菌群失調以及應激反應過度等異常表現，這種生理及心理的影響成年后可持續存在[18-19]。母子分離聯合番瀉葉灌胃法和慢性束縛法造模，從“證”的角度而言，采用番瀉葉灌胃通常被作為復制脾虛泄瀉動物模型的首選方法[20]，故不會引入新的中醫“證”的因素，大鼠胃腸道組織在番瀉葉提取物灌胃后無光鏡可見的變化，且不會產生藥物依賴性。而從“病”的角度而言，番瀉葉灌胃可以導致大鼠產生稀便、大便次數增多的疾病臨床特點。有研究表明，慢性束縛應激也可提高大鼠的內臟敏感性，而且可以影響胃腸道運動功能[5]。慢性束縛應激和番瀉葉灌胃都可使大鼠產生抑郁及腹瀉等癥狀，同時該模型具有肝郁脾虛的中醫證候，而長達2個月的造模時間也符合IBS-D患者病程特點。

3 展望

IBS-D易遷延不愈，反復發作，嚴重影響患者生活品質，給患者帶來巨大的精神折磨與經濟損失。目前對IBS-D動物模型的造模方法尚未成熟，單純中醫或現代醫學動物模型不能很好模擬IBS-D的發病機理和癥狀特征。IBS-D肝郁脾虛病證結合動物模型既運用了IBS-D的中醫病因病機，又綜合了現代醫學致病理論，因此，體現了中醫辨證論治特色的同時又符合現代醫學對疾病明確的病理組織器官變化和診斷評價。該方法符合臨床診治實際情況，對于探討IBS-D病理生理變化與中醫證候特征之間的關系，以及中醫藥治療IBS-D的作用機理，具有重大意義。

但目前IBS-D肝郁脾虛病證結合動物模型研究尚存在一些問題：采用西醫疾病模型與證候模型（母子分離＋束縛＋番瀉葉灌胃）的單純疊加，是否能夠較好模擬IBS-D的病理生理機制和發病特點；模型建立后，如何對模型進行公認合理的疾病和證候特征評價。上述問題需要通過大量研究驗證并加以改進，使IBS-D肝郁脾虛病證結合動物模型更加成熟，從而更好地發揮中醫藥治療優勢。

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Research Progress in Animal Models of IBS-D Disease Combined with Liver Stagnation and Spleen Deficiency

SHU Yuan-yue1, XIAO Xiao-qin1, DENG Gui-ming1,2, CHEN Zhen2, YANG Li-ping3, OUYANG Lin-qi2, HE Yan-ping1, XIANG Biao1, HE Hai1

At present, TCM treatment of diarrhea-predominant irritable bowel syndrome (IBS-D) is based on the combination of disease differentiation and syndrome differentiation. Therefore, the establishment of IBS-D of liver stagnation and spleen deficiency syndrome combined with animal model as a combination of traditional Chinese and Western medicine innovation theory has become increasingly concerned about, and gradually become a new direction for the development of TCM experimental animal model. This article reviewed the research progress in IBS-D liver and spleen deficiency syndrome in recent years, discussed the establishment of IBS-D liver stagnation and spleen deficiency animal model and research ideas for the treatment of IBS-D, and provided references for mechanism research of TCM treatment for IBS-D and research and development of new medicine.

IBS-D; liver stagnation and spleen deficiency; combination of disease and syndrome; animal model; review

10.3969/j.issn.1005-5304.2017.06.037

R259.74；R285.5

A

1005-5304(2017)06-0134-03

中國博士后科學基金面上項目（2014M550420）；湖南省教育廳重點項目（14A107）；湖南省中醫藥科研計劃項目（201429、2013135）；湖南省研究生科研創新項目（2014CX02）；湖南省教育廳項目（15C1041）

鄧桂明，E-mail：705500732@qq.com

（2016-05-01）

（修回日期：2016-05-20；編輯：向宇雁）