丹參川芎嗪注射液對糖尿病腎病大鼠微循環障礙及腎功能的影響

宋春宇 王中京 毛 紅 趙 湜

(華中科技大學同濟醫學院附屬武漢中心醫院內分泌科，湖北 武漢 430014)

丹參川芎嗪注射液對糖尿病腎病大鼠微循環障礙及腎功能的影響

宋春宇 王中京 毛 紅 趙 湜

(華中科技大學同濟醫學院附屬武漢中心醫院內分泌科，湖北 武漢 430014)

目的 探討丹參川芎嗪注射液對糖尿病腎病(DN)大鼠腎臟微循環障礙及腎功能的影響。方法 雄性Wistar大鼠48只，隨機分為正常組、模型組、丹參川芎嗪注射液低劑量組(1 ml·kg-1·d-1)和高劑量組(2 ml·kg-1·d-1)，每組12只。采用一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)50 mg/kg建立DN大鼠模型，同時各組給予相應藥物，連續給藥14 d，末次給藥后檢測空腹血糖(FBG)、腎小球濾過率(GFR)和24 h尿微量白蛋白(24 h mAlb)水平；測定血中血栓素(TX)B2的含量。結果 丹參川芎嗪注射液在劑量1～2 ml/kg范圍內均可明顯抑制DN大鼠的FBG水平；還可降低GFR水平、24 h mAlb及血液TXB2的含量，改善腎血流動力學異常，改善腎臟微循環。結論 丹參川芎嗪注射液可有效改善DN大鼠微循環障礙，減輕DN腎小球高濾過、高灌注狀態，保護腎功能。

丹參川芎嗪注射液；糖尿病腎病；微循環；腎功能

糖尿病腎病(DN)是糖尿病(DM)微血管并發癥之一，亦是腎病終末期的首要原因〔1〕。該病的發病機制為DM致腎小球高濾過，引起腎臟持續的血流動力學異常及微血管結構損傷，進而誘發蛋白尿及腎小球硬化。因此，微循環障礙對DN早期發病起關鍵作用〔2〕。臨床研究表明，丹參川芎嗪注射液對DN具有顯著的臨床療效，既可降低空腹血糖(FBG)、糖化血紅蛋白(HbA1c)和尿蛋白的排除率，也可顯著改善機體抗炎指標，促進腎功能恢復〔3〕。此外，現代藥理研究表明，丹參川芎嗪注射液具有抗血小板聚集、降低血液黏度、改善微循環的作用〔4〕，提示其可能對DN的早期微循環障礙有一定的改善作用。然而，目前關于丹參川芎嗪注射液對DN早期發病中微循環障礙和腎功能的改善作用還未見報道。本實驗從血糖、腎血流動力學、腎功能等方面對其進行系統研究。

1 材料與方法

1.1 動物 無特定病原體(SPF)級雄性Wistar大鼠，體質量180～220 g，平均(200±20)g，購自華中科技大學實驗動物中心，動物合格證號：SCXK(鄂)2010-0009。自由攝食，動物房室溫20℃～25℃，相對濕度50%～70%，12 h光照維持，晝夜循環。

1.2 試劑 鏈脲佐菌素(STZ，美國sigma，批號：20151042)，臨用前溶于無菌枸櫞酸緩沖液(0.1 mol/L，pH4.2)配成1%的溶液。生理鹽水(購于江西科倫藥業有限公司，批號：D120825G)，水合氯醛(購于上海恒遠生化試劑有限公司，批號：2015-041)。丹參川芎嗪注射液，貴州拜特藥業公司，規格：5 ml，批號：20140625。

1.3 儀器 電熱恒溫水浴箱(上海一恒科技有限公司，型號：CU600)；代謝籠(蘇州市艾可林實驗動物器材廠)；電子天平(常熟市雙杰測試儀器廠，型號：T1000)；電子分析天平〔梅特勒-托利多儀器(上海) 有限公司，型號：EL204〕；全自動生化分析儀(日立，型號：7180)；全波長酶標儀(美國賽默飛，型號：Multiskan GO 1510)；低溫高速離心機(德國HERMLE公司，型號：MEGAFUGE2.0R)；全景激光灌注成像儀(英國Moor儀器有限公司，型號：Moor FLPI-2)；血糖儀及血糖試紙(德國拜耳拜安康系列)。

1.4 實驗方法 Wistar大鼠48只，適應性喂養1 w后隨機分為正常組、模型組、丹參川芎嗪注射液低、高劑量組，每組12只。除正常組外，其余各組均一次性腹腔注射STZ 50 mg/kg誘導實驗性DN大鼠模型〔5〕。由于實驗周期長、大鼠長期高血糖狀態會導致實驗動物死亡。本研究中，模型組和丹參川芎嗪注射液低劑量組大鼠各死亡2只，丹參川芎嗪注射液高劑量組死亡1只。各組動物數仍然具有足夠的樣本重復數，不影響實驗結果的統計分析。72 h后大鼠眼眶采血測定FBG，FBG>16.7 mmol/L為造模成功。造模開始即給藥，丹參川芎嗪注射液給藥組按臨床人體-大鼠體表面積比值換算出大鼠的等效劑量。低劑量組每日給予1 ml/kg，高劑量組給予2 ml/kg，給藥時均利用5%葡萄糖注射液稀釋至0.5 ml后尾靜脈注射給藥。正常組及模型組給予等體積生理鹽水。1次/d，連續3 w，每日記錄24 h飲水量和體重。末次給藥后，用代謝籠收集24 h尿液。隨后腹腔注射水合氯醛(10%，3 ml/kg)麻醉大鼠，完全暴露左右腎臟。Moor FLPI-2散斑血流實時成像系統分析各組大鼠腎臟皮層表面血流值。腹主動脈取血，全自動生化測定儀測定FBG、血清肌酐、尿素氮、腎小球率過濾(GFR)和24 h尿微量白蛋白(24 h mAlb)水平，評價大鼠血糖和腎功能情況。酶聯免疫吸附法(ELISA)測定血栓素(TX)B2的含量。

1.5 統計學方法 應用SPSS18.0軟件行t檢驗。

2 結 果

2.1 丹參川芎嗪注射液對大鼠體重及飲水量的影響 與正常組相比，模型組大鼠3 d后飲水量有增加的趨勢，第8天開始飲水量增加明顯；6 d后體重開始不斷出現減輕；與模型組比較，丹參川芎嗪注射液給藥組大鼠飲水量和體重的減少均有所緩解。見圖1。

圖1 各組不同時間飲水量、體重

2.2 丹參川芎嗪注射液對大鼠FBG和24 h mAlb的影響 與正常組比較，模型組FBG和24 h mAlb水平均顯著升高(P<0.01)；與模型組比較，丹參川芎嗪注射液高、低劑量組FBG和高劑量組24 h mAlb水平均有明顯降低(P<0.05)，見表1。

2.3 丹參川芎嗪注射液對大鼠腎臟皮層血流值的影響 正常組大鼠腎臟皮層的散斑血流圖淺綠色和黃色區域分布較多，紅色區域較少，表明散斑血流灌注量較低，皮層血流值也較低。與正常組比較，模型組紅色分布區域明顯增多，腎臟皮層紅色分布均勻，腎臟皮層血流值(399.76±34.65)明顯升高(P<0.05)，與模型組比較，丹參川芎嗪注射液高劑量給藥組紅色區域分布減少，說明腎臟皮層血流量(334.22±21.44)較模型組少(P<0.05)。低劑量組的腎臟皮層血流值為(356.84±29.31)。

2.4 丹參川芎嗪注射液對大鼠腎功能的影響 相比于正常組，模型組大鼠GFR顯著升高(P<0.01)；血清肌酐和尿素氮含量也有一定程度地升高，但差異無統計學意義(P>0.05)。與模型組相比，經丹參川芎嗪注射液高劑量治療后，大鼠GFR明顯降低(P<0.05)；低劑量丹參川芎嗪注射液也能一定程度的降低GFR，但差異無統計學意義(P>0.05)；血清血肌酐、尿素氮含量有一定程度的降低，但變化不明顯(P>0.05)。見表2。

表1 各組大鼠FBG、24 h mAlb水平比較

與正常組比較：1)P<0.01；與模型組比較：2)P<0.05，3)P<0.01；下表同

表2 各組大鼠血清肌酐、尿素氮和GFR的比較±s)

2.5 丹參川芎嗪注射液對大鼠TXB2的影響 給予STZ誘導后，模型組大鼠的TXB2含量〔(287.39±12.98)pg/ml〕明顯高于正常組〔(98.11±5.32)pg/ml〕(P<0.01)。與模型組相比，丹參川芎嗪注射液低、高劑量干預后大鼠TXB2含量有所降低〔(203.88±11.23)、(167.65±12.90)pg/ml，P<0.05〕。

3 討 論

中醫學將DN歸屬于屬于 “尿濁”“腎勞”“關格”等范疇，亦有學者將DN命名為“消渴病腎病”。中醫認為，DN病位以腎臟為中心，兼及肝、脾、肺、心等諸多臟腑。以虛、瘀、濁為核心病機，本虛標實，虛實互見，因此，需以虛實同治，標本兼顧為治則，以補虛、活血通絡、溫陽瀉濁為基本治法〔6〕。丹參川芎嗪注射液的主要成分為丹參素、鹽酸川芎嗪，具有活血化瘀功效，契合DN淤阻之病機。臨床研究表明，丹參川芎嗪注射液治療早期DN有很好的療效，總有效率可達73.3%，可降低24 h mAlb含量，促進腎功能恢復；降低DN患者血清的C反應蛋白(CRP)、腫瘤壞死因子(TNF)-α水平，改善抗炎指標活性〔3〕。本實驗結果表明，丹參川芎嗪注射液可顯著降低STZ誘導的血糖水平，對改善微循環障礙及腎功能具有積極的意義。

在DM過程中，高血糖常可引起腎內血管阻力下降，腎血漿流量增加，出現腎臟GFR、高內壓和血流動力學的改變〔7〕。這種高灌注、高濾過的狀態可使腎小球內毛細血管切流壓增加，引起血管內皮和上皮細胞損害，破壞正常濾過屏障，是導致DN發生及形態學改變的基礎。因此，有效減輕DN早期的高灌注、高濾過狀態，可減少尿微量白蛋白排出，是減輕DM腎損傷的有效方法。本實驗結果表明，丹參川芎嗪注射液可以明顯降低SZT誘導的DN模型大鼠腎小球高濾過狀態，減緩高血流灌注對腎臟的損傷，對腎功能有一定的保護作用，且療效具有劑量依賴性。DM患者體內普遍存在高凝狀態。高凝導致血小板黏附聚集活性增強并形成微血栓，進一步促使血小板大量活化，從而出現亞臨床癥狀，即微血管病變〔8〕。DN的發病過程中，由血流動力學改變等因素引起的微循環障礙，常可造成腎小球硬化性改變，出現腎臟不可逆的損害、血管內皮細胞形態和功能改變，最終出現尿蛋白，導致腎功能損害〔9〕。本實驗研究表明，給予STZ誘導DN后，模型組大鼠腎臟損害早期會表現腎臟皮層微循環血流動力學異常；丹參川芎嗪注射液可改變腎臟皮層微循環血流，劑量在1～2 ml/kg之間療效具有劑量依賴性。血中TXA2含量增加會導致血小板聚集和血管收縮增強，TXB2是TXA2的無活性代謝物，可間接反映TXA2含量。本實驗結果顯示，DN模型大鼠血小板功能增強，TXA2釋放增多，易引起血管并發癥；而丹參川芎嗪注射液具有明顯的降低血小板活性作用，符合活血化瘀的藥理作用。

綜上所述，丹參川芎嗪注射液可明顯降低DN大鼠的血糖水平，減少24 h mAlb的排出；有效降低DN大鼠的高濾過狀態，還可以減少大鼠腎臟皮層血流值和血液中TXB2含量，改善DN大鼠的腎臟微循環障礙，保護腎功能，且療效具有劑量依賴性。

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3 陶 李，佟 杰，曹 亮，等.丹參川芎嗪注射液治療早期糖尿病腎病33例臨床觀察〔J〕.新中醫，2015；47(6)：90-1.

4 金 晟.丹參川芎嗪注射液聯合中藥灌腸對慢性腎臟病的療效及作用機制研究〔J〕.中國實驗方劑學雜志，2013；19(8)：287-9.

5 林鷺平，李 興.鏈脲佐菌素誘導大鼠糖尿病腎病動物模型〔J〕.山西醫藥雜志，2010；39(1)：27-8.

6 劉玉寧，尕麗婭，馬雷雷.糖尿病腎病的中醫命名與病因病機〔J〕.中華腎病研究電子雜志，2013；2(4)：201-3.

7 張慶平，胡國華，朱衛平，等.丹參川芎嗪注射液對2型糖尿病腎病的臨床療效及CRP，TNF-α水平的影響〔J〕.中國中藥雜志，2009；34(7)：911-2.

8 楊 芳，李敬林，依秋霞，等.益氣解毒活絡方對早期糖尿病腎病大鼠的防治作用〔J〕.中國實驗方劑學雜志，2014；20(11)：165-9.

9 Raptis AE，Viberti G.Pathogenesis of diabetic nephropathy〔J〕.Exp Clin Endocrinol Diabetes，2001；109(2)：S424-37.

〔2016-09-15修回〕

(編輯 袁左鳴)

宋春宇(1978-)，女，碩士，主治醫師，主要從事內分泌疾病中西醫結合防治技術研究。

R587

A

1005-9202(2017)10-2396-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.10.020