乳腺浸潤性導管癌Ephrin-A1、VEGF、VEGFR2表達對血管生成的影響

林哲洙 張 磊 張 睿 張 紅

(遼寧醫學院附屬第三醫院普外科，遼寧 錦州 121000)

乳腺浸潤性導管癌Ephrin-A1、VEGF、VEGFR2表達對血管生成的影響

林哲洙 張 磊 張 睿 張 紅

(遼寧醫學院附屬第三醫院普外科，遼寧 錦州 121000)

目的 檢測乳腺浸潤性導管癌Ephrin-A1配體(Ephrin-A1)、血管內皮生長因子(VEGF)和VEGF受體(VEGFR)2的表達，分析其臨床意義及相關性。方法 68例確診為乳腺浸潤性導管癌患者術后的蠟塊組織作為觀察組，21例乳腺腺病患者術后的蠟塊組織作為對照組，采用免疫組化方法檢測兩組中Ephrin-A1、VEGF和VEGFR2的表達。結果 兩組中Ephrin-A1、VEGF和VEGFR2的陽性率差異顯著(P<0.05)，觀察組中Ephrin-A1、VEGF和VEGFR2的表達與腫瘤的最大徑密切相關，觀察組中Ephrin-A1的表達與腫瘤的增殖指數密切相關，VEGF和VEGFR2的表達與腫瘤的脈管累犯密切相關。線性相關分析顯示觀察組中Ephrin-A1和VEGF、VEGF和VEGFR2的表達均具有正相關性(均P<0.05)。結論 乳腺浸潤性導管癌中Ephrin-A1、VEGF和VEGFR2高表達是病變的促進因素，三者具有協同作用，對間質血管生成有一定影響。

乳腺；浸潤性導管癌；Ephrin-A1；血管內皮生長因子(VEGF)；VEGF受體(VEGFR)2

浸潤性乳腺癌是一組惡性上皮性腫瘤，導管癌是最常見的一型，是富于血管的腫瘤，血管生成的相關因子對腫瘤間質的血管形成和腫瘤進展均有一定作用〔1〕。Ephrin-A1配體是已知的酪氨酸激酶受體家族中的最大成員，其所介導的信號傳導通路對細胞發生、腫瘤形成及血管新生可能有重要調節作用〔2，3〕。血管內皮生長因子(VEGF)是機體中可由腫瘤細胞分泌的血管生成促進因子，可以通過其受體(VEGFR)2介導血管生成〔4，5〕。本研究關注乳腺浸潤性導管癌患者術后組織中Ephrin-A1、VEGF和VEGFR2蛋白的表達特征，探討三者的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 觀察組均為2014年1月至2015年12月遼寧醫學院附屬第三醫院診斷為乳腺浸潤性導管癌并行手術治療的患者68例，年齡40～79歲，平均56.3歲。均經病理醫師再次確診，并符合世界衛生組織(WHO)中的病理診斷標準。排除標準：①合并其他器官惡性腫瘤；②伴有嚴重風濕免疫性疾??；③合并血液系統疾病。21例乳腺腺病患者術后的蠟塊組織作為對照組，年齡35～67歲，平均50.9歲。兩組常規資料無明顯差異。

1.2 Ephrin-A1、VEGF和VEGFR2的檢測方法 兩組術后組織立即應用甲醛溶液固定12 h后，切取2～3 mm厚的組織塊，脫水，石蠟包埋，切取4 μm切片，置于膠片上。應用免疫組化SP法檢測Ephrin-A1、VEGF和VEGFR2的表達，二氨基聯苯胺(DAB)顯色。操作嚴格按說明書進行，努力減少誤差。

1.3 Ephrin-A1、VEGF和VEGFR2的判斷方法 切片均由病理醫師按盲法閱片判讀，均應用Olympus顯微鏡進行觀察。Ephrin-A1的陽性部位是在細胞質和(或)細胞膜上，VEGF和VEGFR2的陽性部位是細胞質，以出現棕黃色顆粒為陽性反應細胞。先用100倍視野進行觀察，選擇染色較為密集的區域進行觀察，選擇3個400倍視野進行計數，陽性率以<5%定為陰性，以≥5%定為陽性。

1.4 統計學方法 采用SAS6.12統計軟件進行χ2檢驗和線性相關分析。

2 結 果

2.1 兩組Ephrin-A1、VEGF和 VEGFR2表達陽性率比較 兩組Ephrin-A1、VEGF和VEGFR2表達陽性率差異有統計學意義(均P<0.01)。見表1。

2.2 觀察組Ephrin-A1、VEGF和VEGFR2陽性率在不同臨床特征中的比較 觀察組Ephrin-A1、VEGF和VEGFR2表達與腫瘤最大徑密切相關，Ephrin-A1表達與腫瘤增殖指數密切相關，VEGF和VEGFR2表達與腫瘤脈管累犯密切相關(均P<0.05)。見表2。

表1 兩組Ephrin-A1、VEGF和 VEGFR2表達陽性率比較〔n(%)〕

表2 觀察組Ephrin-A1、VEGF和VEGFR2表達陽性率在不同臨床特征中的比較〔n(%)〕

2.3 觀察組中Ephrin-A1、 VEGF和VEGFR2陽性率的相關性 Ephrin-A1和VEGF(r=0.49，P=0.036)、VEGF和VEGFR2(r=0.54，P=0.019)的表達呈正相關。

3 討 論

乳腺癌生長過程中可以見到明顯的血管新生，CD31、CD34等可以成功標記新生的血管。VEGF是血管生成的促進因子，其在作用過程中常通過VEGFR2發揮生物學作用〔6，7〕。Ephrin-A1是Eph家族中的重要成員，血管內皮細胞中一氧化氮對調控血管張力和通透性有重要作用，研究認為Ephrin-A1在腫瘤血管生成的信號激活中充當了關鍵效應因子〔8，9〕。低氧是腫瘤微環境中重要特征，低氧狀態可以引起VEGF的生成，Ephrin-A1是低氧的誘導基因〔10〕。研究顯示Ephrin-A1對組織器官分化成熟、軸突導管分化、肢芽形成、細胞間黏附、血管生成有重要生物學作用〔11〕。本研究提示Ephrin-A1、VEGF和VEGFR2高表達是乳腺浸潤性導管癌發生的重要促進因素。Ephrin-A1作為單次跨膜蛋白，其胞外的末端為糖基化免疫球蛋白樣的配體結合結構域，向下與一個富半胱氨酸區及兩個纖連蛋白重復相連，這對腫瘤性病變有一定作用〔12，13〕。研究認為酪氨酸殘基磷酸化后可以形成SH2/SH3結構域信號分子的結合位點，對介導其受體的信號傳導有重要作用〔14，15〕。本文提示Ephrin-A1、VEGF和VEGFR2三者高表達可以促進腫瘤的生長，此時腫瘤生長加速，細胞增生明顯，細胞分化過程明顯受到抑制，細胞異型性增大，腫瘤體積增大。本文提示Ephrin-A1高表達是促進腫瘤細胞增殖的重要蛋白，此時腫瘤的分裂旺盛，腫瘤細胞增生活躍。本文提示VEGF和VEGFR2的表達與腫瘤的脈管累犯密切相關，腫瘤細胞侵犯脈管，對腫瘤細胞形成遠處播散提供必要的基礎〔16〕。本文提示Ephrin-A1和VEGF、VEGF和VEGFR2的表達均具有正相關性，提示三者間具有正向協同作用，此種作用是Ephrin-A1促進腫瘤間質血管生成的重要機制之一。Ephrin-A1在高表達時可以引起VEGF和VEGFR2的分泌或富集，使其作用點增加，作用強度增大〔17〕。在腫瘤性血管發育過程中，相鄰細胞之間的絲狀偽足彼此彌合形成連接，是血管管腔形成的初始步驟，這種過程Ephrin-A1可以起到一定的作用〔18〕，也有研究認為Ephrin-A1可能是通過二級和三級結構域調節細胞骨架，從而改變絲狀偽足形成的能力，完成Ephrin-A1的去磷酸化〔19〕。因此Ephrin-A1對血管生成的作用機制可能更趨于復雜。

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〔2016-12-19修回〕

(編輯 苑云杰)

錦州醫科大學博士啟動項目(No.Y201109)

張 紅(1969-)，男，博士，主任醫師，主要從事普外科研究。

林哲洙(1973-)，男，博士，主治醫師，主要從事腫瘤學及普通外科研究。

R73

A

1005-9202(2017)10-2466-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.10.053