視網膜母細胞瘤腫瘤標志物篩選研究

劉智屏，李 博，陳俐麗，張朝霞，陳言釗，唐芳政

·論著·

視網膜母細胞瘤腫瘤標志物篩選研究

劉智屏*，李 博，陳俐麗，張朝霞，陳言釗，唐芳政

背景 視網膜母細胞瘤(RB)多發于嬰幼兒，就診時多處于中晚期，治療較困難，易復發轉移。目的 篩選出對RB有臨床意義的腫瘤標志物。方法 選取2014年8月—2016年8月在深圳市人民醫院化療且臨床資料完整的RB患兒20例為RB組，同期選取本院體檢健康的兒童20例為對照組。檢測對照組體檢時，RB組化療前、化療3個療程后、化療6個療程后甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、神經元特異性烯醇化酶(NSE)、糖蛋白抗原(CA)125、CA153、CA199、CA724水平。結果 對照組與RB組化療前、化療3個療程后、化療6個療程后AFP、CEA、CA125、CA724水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)；對照組與RB組化療6個療程后NSE水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)；RB組化療前、化療3個療程后NSE水平高于對照組(P<0.05)；RB組化療前、化療3個療程后、化療6個療程后CA153、CA199水平高于對照組(P<0.05)。RB組化療前、化療3個療程后、化療6個療程后AFP、CEA、CA125、CA153、CA199、CA724水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)；RB組化療6個療程后NSE水平低于化療前、化療3個療程后(P<0.05)。結論 血清NSE、CA153、CA199水平對RB診療有重要意義，可以作為RB的腫瘤標志物；其中NSE水平下降相對較早，更有利于早期診斷RB的復發。

視網膜母細胞瘤；腫瘤標記,生物學；甲胎蛋白類；癌胚抗原；神經元特異性烯醇酶；糖蛋白抗原

劉智屏,李博,陳俐麗,等.視網膜母細胞瘤腫瘤標志物篩選研究[J].中國全科醫學，2017，20(18)：2213-2217.[www.chinagp.net]

LIU Z P,LI B,CHEN L L,et al.Identification of tumor biomarkers for retinoblastoma[J].Chinese General Practice，2017，20(18)：2213-2217.

視網膜母細胞瘤(RB)是嬰幼兒眼部最常見的一種惡性腫瘤，在嬰幼兒中的發病率約為1/20 000[1]。RB多發于2歲以下的嬰幼兒，不易被早期診斷發現，就診患兒多處于中晚期，使其治療難度增加，治療后容易出現轉移復發。因此，早期診斷、通過監測化療效果實現個體化治療、早期發現復發及轉移，對于降低RB病死率尤為重要。本研究通過動態檢測RB患兒化療前后甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、神經元特異性烯醇化酶(NSE)、糖蛋白抗原(CA)125、CA153、CA199、CA724水平，篩選出對RB有臨床意義的腫瘤標志物，以便更好地監測病情發展，評價治療效果，早期發現轉移復發情況，制定適宜的化療方案。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2014年8月—2016年8月在深圳市人民醫院化療且臨床資料完整的RB患兒20例為RB組。其中男8例，女12例；月齡3～57個月，平均月齡(19.8±16.2)個月；單眼14例，雙眼6例；行眼球摘除術治療者9例；疾病分期：眼內期14例(A～C期4例，D期7例，E期3例)，青光眼期2例，眼外期4例。納入標準：根據眼眶CT、雙眼彩色超聲多普勒、兒童眼底照相機檢查結果或眼球摘除術后病理檢查確診為RB。排除標準：(1)同時合并其他系統疾病的患兒；(2)既往進行不規范治療的患兒；(3)不能堅持完成化療療程的患兒。同期選取本院體檢健康的兒童20例為對照組。其中男7例，女13例；月齡2～65個月，平均月齡(22.0±16.6)個月。納入標準：年齡<10歲，無特殊既往史或家族史。排除標準：其他體檢結果有異常者。兩組性別、月齡比較，差異無統計學意義(χ2=0.107，P=0.744；t=0.427，P=0.672)。本研究經深圳市人民醫院倫理委員會審批通過，研究對象家屬均知情同意。

1.2 研究方法

1.2.1 化療方法 根據疾病分期制定治療方案。所有患兒應用CEV化療方案：3周為1個療程。長春新堿1.5 mg/m2，靜脈滴注1次/周，每個療程共3次；依托泊苷150 mg/ m2，靜脈滴注1次/d，連用3 d，每個療程共3次；卡鉑560 mg/m2，靜脈滴注1次/d，每個療程共1次。A～C期化療6個療程；D、E期化療6～8個療程，眼外期全身化療延長至9～12個療程。每個化療療程第1天鞘內注射甲氨蝶呤12.5 mg/m2，最大劑量12.5 mg；地塞米松2.5 mg(<3歲)或5 mg(≥3歲)。各患兒均定期于眼科醫院隨診。

1.2.2 檢測方法 對照組于體檢時，RB組于化療前、化療3個療程后、化療6個療程后，分別用干燥管采集其清晨空腹靜脈血3 ml，室溫下靜置30 min，待自凝后4 000 r/min離心10 min(離心半徑8 cm)，分離血清后置于-20 ℃冰箱保存待檢。采用化學發光法(Roche公司Cobase 601全自動化學發光免疫分析儀)及原裝配套試劑盒(Roche公司)測定AFP、CEA、NSE、CA125、CA153、CA199、CA724水平，按照廠家說明書嚴格操作。

1.2.3 判斷標準 參照Roche公司提供的標準，各腫瘤標志物參考范圍為：AFP<9.00 μg/L，CEA<10.00 μg/L，NSE<15.20 μg/L，CA125<35.00 kU/L，CA153<25.00 kU/L，CA199<39.00 kU/L，CA724<10.00 kU/L，大于參考范圍為陽性結果。

2 結果

對照組與RB組化療前、化療3個療程后、化療6個療程后AFP、CEA、CA125、CA724水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)；對照組與RB組化療6個療程后NSE水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)；RB組化療前、化療3個療程后NSE水平高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)；RB組化療前、化療3個療程后、化療6個療程后CA153、CA199水平高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。

RB組化療前、化療3個療程后、化療6個療程后AFP、CEA、CA125、CA153、CA199、CA724水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)；RB組化療前、化療3個療程后、化療6個療程后NSE水平比較，差異有統計學意義(P<0.05)；RB組化療6個療程后NSE水平低于化療前、化療3個療程后，差異有統計學意義(P<0.05，見表1)。

Table1LevelsofAFP,CEA,NSE,CA125,CA153,CA199,andCA724inthecontrolgroup,andintheRBgroupmeasuredbeforechemotherapy,atthetimeofcompletingthethirdandsixthcyclesofchemotherapy

組別例數AFP(μg/L)化療前 化療3個療程后 化療6個療程后F值P值CEA(μg/L)化療前 化療3個療程后 化療6個療程后F值P值對照組2014.62±45.69a14.62±45.69a14.62±45.69a--2.42±1.24a2.42±1.24a2.42±1.24a--RB組2022.48±60.2818.42±48.0715.25±37.260.1080.8983.17±2.953.20±2.563.14±2.420.0020.998t值0.4650.2560.0481.0471.2161.186P值0.6450.7990.9620.3050.2340.246組別NSE(μg/L)化療前 化療3個療程后 化療6個療程后F值P值CA125(kU/L)化療前 化療3個療程后 化療6個療程后F值P值對照組29.31±10.14a29.31±10.14a29.31±10.14a--20.68±8.65a20.68±8.65a20.68±8.65a--RB組43.77±20.1038.50±15.0028.73±9.13bc4.9040.01118.79±5.6518.42±4.9718.76±5.130.0320.969t值2.8712.270-0.191-0.818-1.016-0.854P值0.0080.0290.8500.4190.3180.400組別CA153(kU/L)化療前 化療3個療程后 化療6個療程后F值P值CA199(kU/L)化療前 化療3個療程后 化療6個療程后F值P值對照組10.59±3.28a10.59±3.28a10.59±3.28a--19.83±13.37a19.83±13.37a19.83±13.37a--RB組18.63±11.0718.00±8.8914.35±6.561.3120.27740.62±28.0839.04±24.8032.29±20.350.6460.528t值3.1173.4992.2932.9913.0492.289P值0.0050.0020.0300.0060.0050.028組別 CA724(kU/L)化療前 化療3個療程后 化療6個療程后F值P值對照組1.94±1.90a1.94±1.90a1.94±1.90a--RB組1.20±0.321.21±0.331.21±0.370.0120.988t值-1.726-1.692-1.647P值0.1000.1060.114

注：RB=視網膜母細胞瘤，AFP=甲胎蛋白，CEA=癌胚抗原，NSE=神經元特異性烯醇化酶，CA=糖蛋白抗原，-為無此項數據；a為對照組于體檢時檢測指標；與RB組化療前比較，bP<0.05；與RB組化療3個療程后比較，cP<0.05

3 討論

RB多發于2歲以內嬰幼兒，就診患兒多處于中晚期，使其治療較為困難。目前RB的治療采用CEV方案化療結合局部治療、眼球摘除術、外照射、基因治療、中醫治療等[2]。盡管目前有統一的化療方案并且綜合治療效果取得了不錯的進展，但部分早期保眼患兒經過化療后病情仍進展，需行眼球摘除術，部分行眼球摘除術的患兒化療后仍出現眼外轉移情況，也有部分患兒化療結束后出現復發或遠處轉移[3]。目前多根據眼眶CT、雙眼彩色超聲多普勒、兒童眼底照相機檢查、腦脊液細胞學檢查及顱腦CT/MRI等檢查判斷療效以及有無復發及轉移[4]，但出現影像學改變后才發現相對較晚，因此希望能尋找對RB的療效監測及預后判斷更便捷、敏感的指標。

隨著現代診療技術和分子生物學的迅猛發展，血清腫瘤標志物已廣泛應用于各種腫瘤的早期診斷、療效監測和預后評估。腫瘤標志物是在腫瘤細胞發展和增殖過程中，由腫瘤細胞本身合成、分泌或是機體對腫瘤細胞發生反應而產生的一類物質[5]。血清腫瘤標志物是一種易反復操作、安全、無創、簡便快捷的檢測手段。但關于RB腫瘤標志物的研究并不多，尚未發現RB特異性的腫瘤標志物。所以本研究選擇了7個常用的、易檢測的指標進行研究。

血清NSE是一種神經源性和神經內分泌細胞分泌的、特有的烯醇化酶的同工酶。研究顯示，肺癌化療后血清NSE水平顯著下降，其可作為評價療效、判斷預后的重要指標[6]。國外已相繼有文獻報道將NSE檢測用于RB的診斷[7]。有研究表明，RB化療后血清NSE水平明顯下降，血清NSE水平的測定對于RB遠處轉移有診斷價值[8]。本研究結果顯示，RB組化療前、化療3個療程后NSE水平高于對照組，化療6個療程后NSE水平與對照組無差異，RB組化療6個療程后NSE水平低于化療前、化療3個療程后，與上述研究結果[8]相似，說明NSE可以作為RB的腫瘤標志物。關于RB患兒NSE水平異常機制目前尚無深入研究，可能與視神經元相關。

CA153最早發現于乳腺癌上皮細胞，血清CA153常在乳腺癌中過度表達，是監測浸潤性乳腺癌或轉移性乳腺癌的重要標志物，在其他一些惡性腫瘤如肺癌、胃癌、卵巢癌中其水平也有增高[9]。有研究表明，晚期乳腺癌患者一線化療有效后，隨診中CA153等腫瘤標志物水平升高早于影像學的改變，早期給予二線治療可改善預后[10]。本研究結果顯示，RB組化療前、化療3個療程后、化療6個療程后CA153水平高于對照組，推測CA153可以作為RB的腫瘤標志物；RB組化療6個療程后CA153水平低于化療前、化療3個療程后，但無統計學差異，可能與本研究觀察時間較短有關，需要進一步研究證實。CA153與RB的關系在國內外文獻中鮮有報道，CA153水平在RB中升高的機制有待進一步研究。

CA199是一種黏蛋白型糖蛋白腫瘤標志物，在血清中含量甚微，常分布于正常胎兒的胰腺、膽囊、肝臟、腸和正常成年人的胰腺、膽管上皮等處，是迄今為止報道的對胰腺癌敏感性最高的腫瘤標志物，在一些消化道炎癥中CA199水平也有不同程度升高[11]。有研究表明，血清CA199水平變化與結腸癌化療效果相關，其對評估化療效果有一定的價值[12]。CA199與RB的關系鮮有報道。本研究結果顯示，RB組化療前、化療3個療程后、化療6個療程后CA199水平高于對照組，推測CA199可以作為RB的腫瘤標志物；RB組化療6個療程后CA199水平低于化療前、化療3個療程后，但無統計學差異，可能與本研究觀察時間較短有關。但其水平升高的具體機制有待進一步研究。

AFP是目前公認的肝臟腫瘤最有特異性的腫瘤標志物，在一些消化道腫瘤及胚胎瘤中，AFP水平也有不同程度的升高[13]。CEA是一種糖蛋白，在成人血清中含量極少，在其他多器官惡性腫瘤如胃癌、胰腺癌、乳腺癌、肺癌等過度表達，屬于非器官特異性腫瘤相關抗原，目前其主要作為結腸癌的一個預測指標[14]。CA125是一種高分子糖蛋白復合物，其水平升高主要見于婦科腫瘤或乳腺癌、宮頸癌、子宮內膜癌、腸癌、肺癌以及一些炎性疾病，現已被應用于卵巢腫瘤的診斷、預后評估及隨訪[15]。CA724是一種黏蛋白類癌胚抗原，也是一種廣譜腫瘤標志物，存在于多種腫瘤中，如胃癌、胰腺癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌等，對胃癌診斷具有較高的靈敏度和特異度[16]，在有些良性疾病如胰腺炎、風濕病等其水平也可能增高。本研究結果顯示，RB組與對照組化療前、化療3個療程后、化療6個療程后AFP、CEA、CA125、CA724水平比較無差異，RB組化療前、化療3個療程后、化療6個療程后AFP、CEA、CA125、CA724水平比較無差異，故認為該4項指標對RB的診斷、療效監測及預后判斷等是無意義的。

綜上所述，血清NSE、CA153、CA199水平對RB診療有重要意義，可以作為RB的腫瘤標志物。其中NSE水平下降相對較早，更有利于早期診斷RB的復發。但本研究觀察時間及樣本例數較少，研究結果可能具有一定的局限性，需要增大樣本量，并根據病情程度、化療效果等因素進行分組研究比較，以便更準確地了解各腫瘤標志物在監測化療療效以及判斷預后等方面的意義。也可選擇更多的指標來進行研究，以便尋找到對RB診療更有特異性意義的腫瘤標志物。

作者貢獻：劉智屏進行文章的構思與設計，撰寫論文，進行論文的統計學處理、修訂，對文章整體負責，監督管理；劉智屏、李博進行研究的實施與可行性分析；陳俐麗、陳言釗、唐芳政進行數據收集、整理；李博進行結果的分析與解釋；劉智屏、張朝霞進行英文的修訂；張朝霞負責文章的質量控制及審校。

本文無利益沖突。

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(本文編輯：崔麗紅)

Identification of Tumor Biomarkers for Retinoblastoma

LIUZhi-ping*,LIBo,CHENLi-li,ZHANGZhao-xia,CHENYan-zhao,TANGFang-zheng

DepartmentofPediatrics,ShenzhenPeople′sHospital,2ndClinicalMedicalCollegeofJinanUniversity,Shenzhen518020,China

Background Retinoblastoma(RB) is more common in infants and young children.In general,it is diagnosed at an advanced stage and is prone to recurrence and metastasis and difficult to treat.Objective To identify the tumor biomarkers for RB diagnosis and treatment.Methods From Shenzhen People′s Hospital between August 2014 and August 2016,we recruited the participants of this study〔20 children with RB and complete clinical data undergoing chemotherapy(RB group),and other 20 healthy children undergoing physical examination(control group)〕.The measurement of levels of serum alpha fetoprotein(AFP),carcinoembryonic antigen(CEA),neuron-specific enolase(NSE),carbohydrate antigen(CA) 125,CA153,CA199 and CA724 was performed in the control group during physical examination,and in the RB group before chemotherapy,at the time of completing the third and sixth cycles of chemotherapy,respectively.Results There was no significant difference in AFP,CEA,CA125 and CA724 levels before chemotherapy,at the time of completing the third and sixth cycles of chemotherapy between RB group and the control group(P>0.05). There was no significant difference in NSE level at the time of completing the sixth cycles of chemotherapy between RB group and the control group(P>0.05). NSE level before chemotherapy and at the time of completing the third cycles of chemotherapy in RB group was higher than that in the control group(P<0.05). CA153 and CA199 levels before chemotherapy,at the time of completing the third and sixth cycles of chemotherapy in RB group were higher than those in the control group(P<0.05). There was no significant difference in AFP,CEA,CA125,CA153,CA199 and CA724 levels before chemotherapy,at the time of completing the third and sixth cycles of chemotherapy in RB group(P>0.05). NSE level at the time of completing the sixth cycles of chemotherapy was lower than that before chemotherapy and at the time of completing the third cycles of chemotherapy in RB group(P<0.05). Conclusion Serum NSE,CA153 and CA199 levels are of great significance in the diagnosis and treatment of RB,which can be used as the tumor biomarkers of RB. The level of NSE decreased relatively early,which is more conducive to the early diagnosis of RB recurrence.

Retinoblastoma;Tumor markers,biological;Alpha-fetoproteins;Carcinoembryonic antigen;Neuron-specific enolase;Carbohydrate antigen

深圳市科技研發資金知識創新計劃基礎研究項目(JCYJ20140416122811998)

R 739.72

A

10.3969/j.issn.1007-9572.2017.18.009

2016-12-26；

2017-02-14)

518020 廣東省深圳市，深圳市人民醫院 暨南大學第二臨床醫學院兒科

*通信作者：劉智屏，副主任醫師；E-mail：lzp97420@163.com

*Correspondingauthor:LIUZhi-ping,Associatechiefphysician;E-mail:lzp97420@163.com