QuEChERS—氣相色譜分析鐵皮石斛中的6種有機磷農藥殘留

王萬成+柳敏

摘要：目的：建立同時測定鐵皮石斛中甲胺磷、甲拌磷、甲基對硫磷、毒死蜱、殺螟硫磷、磷胺6種有機磷農藥殘留的QuEChERS-氣相色譜分析方法。樣品用乙腈進行超聲提取，無水硫酸鎂鹽析后， 提取液經N-丙基乙二胺（PSA）、C18和石墨化炭黑（GCB）進行分散固相萃取凈化，火焰光度檢測器（PFPD）進行分析測定， 外標法定量。結果 6種有機磷農藥的檢出限范圍為0.002～0.01毫克/公斤，6次進樣相對標準偏差小于5%， 平均回收率范圍為85.6%～100.8%。結論：方法前處理操作簡單， 檢測的重復性好、精密度高，可滿足對鐵皮石斛中多種有機磷農藥殘留的同時測定。

關鍵詞：QuEChERS；氣相色譜法； 鐵皮石斛；有機磷農藥殘留

中圖分類號： TS255.7；O657.71 文獻標識碼： A DOI編號： 10.14025/j.cnki.jlny.2017.12.030

鐵皮石斛為蘭科石斛蘭屬多年生草本植物，喜在溫暖、潮濕、半陰半陽的環境中生長。鐵皮石斛含有豐富的氨基酸、多糖類物質，具有滋陰養血、增強免疫功能的作用的功能。清代《藥性論》，鐵皮石斛可補腎積精、養胃陰、益氣力。現代藥理研究表明：鐵皮石斛能提高應激能力，具有良好的抗疲勞、耐缺氧的作用。作為我國傳統名貴藥材，近年來，以鐵皮石斛為原料的保健食品更是越來越多。由于野生鐵皮石斛的自然繁殖能力低、生長緩慢，目前已十分稀少。當今市場上流通的鐵皮石斛，主要來自人工栽培。在栽培過程中，難免受到病蟲害的影響，為了提高產量會通噴灑農藥控制病蟲害，同時鐵皮石斛的生長還受到種植土壤、水源等的影響，這些均有可能引起農藥殘留量超標。目前檢測農藥殘留以氣相色譜方法居多。由于中藥材基質復雜，樣品前處理方面若未凈化到位，會對檢測結果產生很大的影響。QuEChERS法是近年來發展迅速的農藥多殘留快速提取方法， 該方法因具有快速、簡單、有效、可靠、安全的特點而得名。很快得到廣泛的應用。該方法主要采用乙腈提取，無水硫酸鎂鹽析分層，提取液經PSA（N-丙基乙二胺填料）、C18和石墨化炭黑（GCB）分散固相萃取，用GC或GC-MS進行多殘留分析。本實驗采用QuEChERS前處理方式，用GC- PFPD 測定新鮮采摘的鐵皮石斛中有機磷農藥殘留量，為鐵皮石斛的多項有機磷農藥殘留的同時測定提供參考依據[1-5]。

1儀器與試劑

瓦里安450型氣相色譜儀帶有PFPD檢測器；DB-1毛細管色譜柱（30m×0.25mm，250μm）；梅特勒XS205DH電子天平；臺式高速冷凍離心機（湖南湘儀）；安譜QuEChERS萃取包（硫酸鎂和乙酸鈉）和QuEChERS凈化管（硫酸鎂、PSA、GCB和C18）。

甲胺磷、甲拌磷、甲基對硫磷、毒死蜱、殺螟硫磷、磷胺標準品（100ug/ml）均購自農業部環境保護科學研究所；乙腈、乙酸乙酯為色譜純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

進樣口溫度，220℃；檢測器溫度，260℃；不分流； 載氣，氮氣；氫氣流量 30mL/min，空氣流量300mL/min；柱流量，2ml/min；柱溫，80℃保持1min，以15℃/min升至200℃保持1min，然后以10℃/min升溫到250℃，保持15分鐘。

2.2 測定方法

2.2.1標準溶液的配制 由100ug/ml的各農藥標準品溶液用乙酸乙酯稀釋至一定濃度的標準儲備溶液。

根據每種農藥在儀器上的響應靈敏度，確定其在混合標準中間液的濃度，用乙酸乙酯溶液稀釋定容，得系列濃度的混合標準工作液。

2.2.2 試樣制備 將采集回來的新鮮鐵皮石斛樣品切碎，用攪拌機充分攪勻，待用。

提取：準確稱取 10.0克已粉碎好的樣品放入 25毫升離心管中，加入10毫升乙酸+乙腈（體積比：1+99）混合液，旋渦混合 1分鐘，快速加入提取包（MgSO4、NaAcetate），適當旋渦混合，再劇烈振蕩 20min，以 8000 r/min 離心 3min。凈化：取 6毫升離心好的上清液于裝有分散固相萃取劑（QuEChERS 凈化試劑盒：含有1.2克 MgSO4+400 mg PSA+400 mg GCB+400 mg C18）的 15毫升離心管中（，旋渦混勻 3min，以 6000 r/min 離心 5min。取離心好的上清液2毫升于玻璃試管中，用氮吹儀吹至近干，乙酸乙酯定容至1毫升，最后用 0.22μm 濾膜過濾至進樣瓶中。

3 結果與討論

3.1 測定結果

標準色譜圖。本實驗根據色譜保留時間定性，6種有機磷農藥的標準色譜圖，如圖1所示，6種有機磷農藥各組分分離良好，峰形理想。

3.2進樣溶劑的選擇

乙腈對多數農藥具有良好的溶解性，QEChERS法也推薦使用乙腈提取液，但是用乙腈作為進樣溶劑色譜峰峰型很差，選擇乙腈提取、凈化后用乙酸乙酯作為進樣溶劑，可克服色譜峰的裂分。

3.3基體干擾情況

基體空白可用于評估基體干擾情況，用未噴灑農藥的鐵皮石斛作為基體樣品進行檢測，結果發現鐵皮石斛在PFPD檢測器上無明顯干擾峰存在，不會干擾待測農藥的測定，見圖2。

3.4 標準曲線及檢出限

在以上色譜條件下，在0.02μg /ml～0.20μg/ml線性范圍內6中有機磷農藥呈良好的線性關系，相關系數（r2）>0.99。 以3倍信號噪聲值（S/N）作為檢出限6種農藥的檢出限在0.004 ～0.01mg/kg之間，見表1。

3.5精密度及回收率

本實驗條件下，分別添加濃度為0.02ug/ml、0.05 ug/ml、 0.10ug/ml的3個濃度的混標液，每個濃度的樣品重復測定6次，結果見表2。

4結論

采用緩沖QuEChERS法提取， 利用氣相色譜火焰光度法可以快速測定鐵皮石斛中6種有機磷農藥殘留， 方法快速、準確， 儀器和實驗條件要求不高， 建立了完全滿足鐵皮石斛中有機磷類農藥的殘留量分析，并對其他中藥材中機磷類農藥的多殘留檢測也具有一定的參考價值。

參考文獻

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