QuEChERS—?dú)庀嗌V分析鐵皮石斛中的6種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留

王萬(wàn)成+柳敏

摘要：目的：建立同時(shí)測(cè)定鐵皮石斛中甲胺磷、甲拌磷、甲基對(duì)硫磷、毒死蜱、殺螟硫磷、磷胺6種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的QuEChERS-氣相色譜分析方法。樣品用乙腈進(jìn)行超聲提取，無(wú)水硫酸鎂鹽析后， 提取液經(jīng)N-丙基乙二胺（PSA）、C18和石墨化炭黑（GCB）進(jìn)行分散固相萃取凈化，火焰光度檢測(cè)器（PFPD）進(jìn)行分析測(cè)定， 外標(biāo)法定量。結(jié)果 6種有機(jī)磷農(nóng)藥的檢出限范圍為0.002～0.01毫克/公斤，6次進(jìn)樣相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于5%， 平均回收率范圍為85.6%～100.8%。結(jié)論：方法前處理操作簡(jiǎn)單， 檢測(cè)的重復(fù)性好、精密度高，可滿足對(duì)鐵皮石斛中多種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的同時(shí)測(cè)定。

關(guān)鍵詞：QuEChERS；氣相色譜法； 鐵皮石斛；有機(jī)磷農(nóng)藥殘留

中圖分類號(hào)： TS255.7；O657.71 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A DOI編號(hào)： 10.14025/j.cnki.jlny.2017.12.030

鐵皮石斛為蘭科石斛蘭屬多年生草本植物，喜在溫暖、潮濕、半陰半陽(yáng)的環(huán)境中生長(zhǎng)。鐵皮石斛含有豐富的氨基酸、多糖類物質(zhì)，具有滋陰養(yǎng)血、增強(qiáng)免疫功能的作用的功能。清代《藥性論》，鐵皮石斛可補(bǔ)腎積精、養(yǎng)胃陰、益氣力?，F(xiàn)代藥理研究表明：鐵皮石斛能提高應(yīng)激能力，具有良好的抗疲勞、耐缺氧的作用。作為我國(guó)傳統(tǒng)名貴藥材，近年來(lái)，以鐵皮石斛為原料的保健食品更是越來(lái)越多。由于野生鐵皮石斛的自然繁殖能力低、生長(zhǎng)緩慢，目前已十分稀少。當(dāng)今市場(chǎng)上流通的鐵皮石斛，主要來(lái)自人工栽培。在栽培過(guò)程中，難免受到病蟲害的影響，為了提高產(chǎn)量會(huì)通噴灑農(nóng)藥控制病蟲害，同時(shí)鐵皮石斛的生長(zhǎng)還受到種植土壤、水源等的影響，這些均有可能引起農(nóng)藥殘留量超標(biāo)。目前檢測(cè)農(nóng)藥殘留以氣相色譜方法居多。由于中藥材基質(zhì)復(fù)雜，樣品前處理方面若未凈化到位，會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生很大的影響。QuEChERS法是近年來(lái)發(fā)展迅速的農(nóng)藥多殘留快速提取方法， 該方法因具有快速、簡(jiǎn)單、有效、可靠、安全的特點(diǎn)而得名。很快得到廣泛的應(yīng)用。該方法主要采用乙腈提取，無(wú)水硫酸鎂鹽析分層，提取液經(jīng)PSA（N-丙基乙二胺填料）、C18和石墨化炭黑（GCB）分散固相萃取，用GC或GC-MS進(jìn)行多殘留分析。本實(shí)驗(yàn)采用QuEChERS前處理方式，用GC- PFPD 測(cè)定新鮮采摘的鐵皮石斛中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量，為鐵皮石斛的多項(xiàng)有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的同時(shí)測(cè)定提供參考依據(jù)[1-5]。

1儀器與試劑

瓦里安450型氣相色譜儀帶有PFPD檢測(cè)器；DB-1毛細(xì)管色譜柱（30m×0.25mm，250μm）；梅特勒XS205DH電子天平；臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（湖南湘儀）；安譜QuEChERS萃取包（硫酸鎂和乙酸鈉）和QuEChERS凈化管（硫酸鎂、PSA、GCB和C18）。

甲胺磷、甲拌磷、甲基對(duì)硫磷、毒死蜱、殺螟硫磷、磷胺標(biāo)準(zhǔn)品（100ug/ml）均購(gòu)自農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科學(xué)研究所；乙腈、乙酸乙酯為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

進(jìn)樣口溫度，220℃；檢測(cè)器溫度，260℃；不分流； 載氣，氮?dú)?；氫氣流?30mL/min，空氣流量300mL/min；柱流量，2ml/min；柱溫，80℃保持1min，以15℃/min升至200℃保持1min，然后以10℃/min升溫到250℃，保持15分鐘。

2.2 測(cè)定方法

2.2.1標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 由100ug/ml的各農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品溶液用乙酸乙酯稀釋至一定濃度的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。

根據(jù)每種農(nóng)藥在儀器上的響應(yīng)靈敏度，確定其在混合標(biāo)準(zhǔn)中間液的濃度，用乙酸乙酯溶液稀釋定容，得系列濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。

2.2.2 試樣制備 將采集回來(lái)的新鮮鐵皮石斛樣品切碎，用攪拌機(jī)充分?jǐn)噭?，待用?/p>

提?。簻?zhǔn)確稱取 10.0克已粉碎好的樣品放入 25毫升離心管中，加入10毫升乙酸+乙腈（體積比：1+99）混合液，旋渦混合 1分鐘，快速加入提取包（MgSO4、NaAcetate），適當(dāng)旋渦混合，再劇烈振蕩 20min，以 8000 r/min 離心 3min。凈化：取 6毫升離心好的上清液于裝有分散固相萃取劑（QuEChERS 凈化試劑盒：含有1.2克 MgSO4+400 mg PSA+400 mg GCB+400 mg C18）的 15毫升離心管中（，旋渦混勻 3min，以 6000 r/min 離心 5min。取離心好的上清液2毫升于玻璃試管中，用氮吹儀吹至近干，乙酸乙酯定容至1毫升，最后用 0.22μm 濾膜過(guò)濾至進(jìn)樣瓶中。

3 結(jié)果與討論

3.1 測(cè)定結(jié)果

標(biāo)準(zhǔn)色譜圖。本實(shí)驗(yàn)根據(jù)色譜保留時(shí)間定性，6種有機(jī)磷農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)色譜圖，如圖1所示，6種有機(jī)磷農(nóng)藥各組分分離良好，峰形理想。

3.2進(jìn)樣溶劑的選擇

乙腈對(duì)多數(shù)農(nóng)藥具有良好的溶解性，QEChERS法也推薦使用乙腈提取液，但是用乙腈作為進(jìn)樣溶劑色譜峰峰型很差，選擇乙腈提取、凈化后用乙酸乙酯作為進(jìn)樣溶劑，可克服色譜峰的裂分。

3.3基體干擾情況

基體空白可用于評(píng)估基體干擾情況，用未噴灑農(nóng)藥的鐵皮石斛作為基體樣品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)鐵皮石斛在PFPD檢測(cè)器上無(wú)明顯干擾峰存在，不會(huì)干擾待測(cè)農(nóng)藥的測(cè)定，見圖2。

3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線及檢出限

在以上色譜條件下，在0.02μg /ml～0.20μg/ml線性范圍內(nèi)6中有機(jī)磷農(nóng)藥呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)（r2）>0.99。 以3倍信號(hào)噪聲值（S/N）作為檢出限6種農(nóng)藥的檢出限在0.004 ～0.01mg/kg之間，見表1。

3.5精密度及回收率

本實(shí)驗(yàn)條件下，分別添加濃度為0.02ug/ml、0.05 ug/ml、 0.10ug/ml的3個(gè)濃度的混標(biāo)液，每個(gè)濃度的樣品重復(fù)測(cè)定6次，結(jié)果見表2。

4結(jié)論

采用緩沖QuEChERS法提取， 利用氣相色譜火焰光度法可以快速測(cè)定鐵皮石斛中6種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留， 方法快速、準(zhǔn)確， 儀器和實(shí)驗(yàn)條件要求不高， 建立了完全滿足鐵皮石斛中有機(jī)磷類農(nóng)藥的殘留量分析，并對(duì)其他中藥材中機(jī)磷類農(nóng)藥的多殘留檢測(cè)也具有一定的參考價(jià)值。

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