牦牛皮膚中調控毛色基因表達定量和黑色素細胞組織學分析

高澤成，梁春年，吳曉云，李明娜，張志飛，閻 萍

(1.甘肅農業大學 動物科學與技術學院，甘肅 蘭州 730070；2.中國農業科學院 蘭州畜牧獸藥研究所，甘肅省牦牛繁育重點實驗室，甘肅 蘭州 730050)

牦牛皮膚中調控毛色基因表達定量和黑色素細胞組織學分析

高澤成1，2，梁春年2，吳曉云2，李明娜2，張志飛2，閻 萍1，2

(1.甘肅農業大學 動物科學與技術學院，甘肅 蘭州 730070；2.中國農業科學院 蘭州畜牧獸藥研究所，甘肅省牦牛繁育重點實驗室，甘肅 蘭州 730050)

旨在通過分子水平和組織學水平闡明牦牛不同被毛顏色的機理。采用實時熒光定量PCR技術檢測皮膚組織中決定色素形成通路中的主效基因：鼠灰色基因(Agouti signaling protein gene(ASIP)，Agouti)、小眼畸形相關轉錄因子(Microphthalmia-associated transcription factor，MITF)、黑色素皮質素受體1基因(Melanocortin 1 receptor，MC1R)和酪氨酸酶基因(Tyrosinasegene，TYR)表達量。結果表明：MC1R表達量在黑色毛色高于白色毛色；MITF表達量在黑色毛色與白色毛色中差異明顯；ASIP表達量在白色毛色和黑色毛色中差異不顯著；TYR表達量在天祝純白被毛中表達量是大通純黑被毛的2.87倍，這與有色被毛高表達的結果相反，TYR的表達量對牦牛黑色素的合成影響有待深入研究。采用石蠟切片制作方法，用HE和甲苯胺藍染色。通過顯微鏡觀察發現牦牛毛囊是由毛鞘、毛乳頭和毛球外面周圍的結締組織形成的。在天祝白牦牛的表皮和毛囊周圍發現分布著大量的黑色素細胞，同時發現有少量的黑色素顆粒存在。大通牦牛的毛囊和表皮黑色素細胞中均發現有黑色素的存在。黑色被毛毛囊中與毛發相連毛乳頭附近的黑色素含量比毛囊周圍其他部位含量高。大通牦牛的毛囊群比天祝牦牛毛囊群密集，毛囊的直徑比天祝長，毛發較粗。大通牦牛毛囊周圍黑色素細胞比天祝白牦牛密集，細胞核大，而且更為明顯。

牦牛;毛色基因;定量表達;石蠟切片;黑色素

動物的毛發是由毛囊發育生長的皮膚衍生物，毛色是動物重要特征之一，它在確定雜交組合、品種純度和親緣關系以及評價產品質量等方面均有很強的使用價值，因此，在組織中的差異性表達及其不同基因相互作用的研究有助于更深地了解毛色形成的分子機理。有研究發現毛色與生長速度、瘦肉率及對疫病的抵抗能力等生產性能有直接關系[1]。毛囊解剖學、毛囊形態發生學研究已經證明，哺乳動物毛發著色主要來源于毛球部毛母質細胞間成熟黑色素細胞合成的色素[2]。黑色素細胞是人類和其他脊椎動物皮膚產生和維持色素的主要細胞，起源于神經嵴。黑色素細胞在胚胎發育過程中逐漸移至表層和毛囊等部位。黑色素細胞在胚胎早期，分布于真皮層，至妊娠后期真皮層的黑色素細胞基本消失，此時黑色素細胞主要分布于表皮和毛囊中。

黑色素皮質素受體-1(MC1R)和鼠灰色基因(ASIP)的表達量與毛發的顏色有著相關性。ASIP能夠抑制黑色素細胞刺激素(α-MSH)誘導的小眼畸形相關轉錄因子(MITF)基因的表達以及MITF蛋白與酪氨酸基因(TYR)啟動子的結合，從而使酪氨酸表達下調，最終導致真黑色素合成減少，褐黑色素生成[3]。研究表明MITF在調節黑色素的生成過程中起著重要的作用[4]。Zhu等[5]研究發現miRNAs通過調節羊駝MITF基因的表達量差異進而影響被毛顏色不同。哺乳動物的MC1R基因與皮膚色素沉積密切相關，主要在毛囊和皮膚黑色素細胞中表達[6]。在MC1R功能喪失或MC1R受到與其拮抗的ASIP蛋白抑制時，酪氨酸酶不能被激活而保持較低活性，造成真黑色素減少，出現棕色或紅色等較淺的毛色性狀[7]。任玉紅等[8]研究發現MC1R在有色被毛羊駝組織中的表達量高于白色組織。MC1R基因在不同被毛顏色哈薩克綿羊皮膚組織中均有表達，且在黑色被毛皮膚組織中的表達量最高，棕色次之，白色最低。TYR是黑色素形成的關鍵酶也是決速酶之一，它的表達活性決定著黑色素合成的數量及速度。當紫外光照射刺激時，TYR表達量增加可以導致黑色素合成增加[9]。

對于有色毛發來說，黑色素合成發生于毛囊生長期，毛球部的黑色細胞合成黑色素顆粒，轉運到毛干皮質細胞。黑色素顆粒的多少、顆粒性狀及分布決定毛發的顏色。生長期結束的特征是黑色素細胞樹突收縮，黑色素生成停止[10]。黑色素細胞主要分布在皮膚和毛囊中，視網膜上皮、虹膜、眼葡萄膜、軟腦膜和內耳中也有少量分布[11-12]。毛囊黑色素細胞合成的黑色素主要用于形成毛色，具有廣泛的生態適應性[13]。謝光躍等[14]研究發現，黑色素細胞在烏骨羊表皮基底層和毛囊中大量分布，并且黑色被毛的毛囊外根鞘部位的黑色素細胞呈現活化狀態是黑色皮膚和黑色毛發的主要來源。

牦牛是青藏高原與藏民族的生產生活密切相關，牦牛被譽為“高原之舟”，它以極強的生命力和適應性來豐富著青藏高原這一地區的物質和文化生活。牦牛毛、絨制品深受喜愛，因此，研究牦牛毛色有著重要的社會意義和經濟效益。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

家畜禽遺傳資源保種場青海省大通種牛場取樣，6頭純黑色被毛牦牛和4頭黑白花被毛牦牛；天祝牦牛：11月甘肅省天祝縣取樣，6頭純白色被毛牦牛和3頭黑白花被毛牦牛。皮膚組織樣品采集：大通純黑色被毛和天祝純白色被毛均取自背部左側；黑白花被毛分別取樣黑色區域和白色區域皮膚組織樣。均取2 cm×5 cm皮膚組織樣，-80 ℃液氮保存。分別標注：大通純黑被毛(DH)、大通黑白花黑色被毛(DHH)、大通黑白花白色被毛(DHB)、天祝純白色被毛(TB)、天祝黑白花黑色被毛(THB)、天祝黑白花白色被毛(THH)。3頭純黑色被毛大通牦牛和3頭純白色被毛天祝牦牛。大通純黑色被毛和天祝純白色被毛均取自背部左側。均取5 cm×5 cm皮膚組織樣，生理鹽水沖洗后放入福爾馬林固定液中保存。

1.2 儀器設備

超速冷凍離心機、DEPC水、NanNoDrop 2000(Thermal)、Peltier Thermal Cycler(Bio-RAD)、Real-time PCR擴增儀(Bio-RAD)、TRIzol(TaKaRa)、BYY-6C型電泳儀、Gel Image System(Tanon 2500)、TaKaRa反轉錄試劑盒Premix Ex TaqTMⅡ(TliRNaseH Plus)、TaKaRa熒光定量試劑盒PrimeScriptTMRT reagent Kit with gDNA Eraser(Perfect Real Time)、顯微鏡(Leica DM5500B)、HE染色試劑盒(北京索萊寶科技有限公司)、石蠟切片機(Leica RM2235)、石蠟包埋機(Leica EG1150H)、組織全自動脫水機(Leica ASP300S)、載玻片、蓋玻片、染缸、干燥箱、中性樹脂、梯度酒精(100%，95%，90%，80%，70%)、二甲苯、蒸餾水。

1.3 試驗方法

1.3.1 皮膚組織總mRNA提取和反轉錄 液氮中取出保存皮膚組織樣80～100 mg用TRIzol法提取樣品總mRNA。然后用NanNoDrop 2000總mRNA濃度測定;再用瓊脂糖凝膠電泳檢測總mRNA提取質量；最后總mRNA稀釋到 500 ng/μL保存到-80 ℃保存箱。

1.3.2 反轉錄 參照反轉錄試劑盒操作步驟進行，除去基因組DNA反應：首先在每支PCR管中加入DNA Eraser Buffer 2 μL、gDNA Eraser 1 μL、總mRNA 1 μL，然后加入RNase Free gH2O 使PCR管總體積達到10 μL，上述步驟在冰上進行；最后42 ℃、2 min進行除去基因組DNA反應，4 ℃保存。反轉錄反應：將上述反應液PCR管中依次加入PrimeScriptRT Enzyme Mix I 1 μL、RT Primer Mix 1 μL、5×PrimeScript Buffer 24 μL、RNase Free gH2O 4 μL，上述反應在冰上進行；然后在37 ℃ 15 min，85 ℃ 5 s，反應條件下進行；反應產物4 ℃保存待用。

1.3.3 熒光定量 熒光定量引物合成，參考NCBI中所收錄的牦牛和牛的基因。內參基因GAPDH和ASIP、MITF、MC1R、TYR4種mRNA基因序列。用Primer 5.0和Oligo 6.0設計內參引物和熒光定量引物，引物由蘇州泓迅生物科技有限公司合成(表1)。參照熒光定量試劑盒在熒光定量PCR板每孔均加入SYBR Premix Ex TaqⅡ5 μL，上下游引物各0.4 μL，cDNA 3 μL，ddH2O 3 μL；反應程序設置95 ℃ 30 s;95 ℃ 5 s，60 ℃ 30 s，40個循環。加熔解曲線程序，每個樣品做3個復孔。其中ΔCT目的基因=CT目的基因-CT內參基因，ΔΔCT=ΔCT目的基因-△CT大通純黑被毛。

1.3.5 石蠟切片 取樣、修塊，大小為4 mm×4 mm×3 mm；脫水：自來水洗24 h，5%苯酚(24 h)使組織軟化，脫水70%(1)、80%(1)、90%(2)、95%(2)、100%(Ⅰ、Ⅱ各1 h)，二甲苯透明(Ⅰ、Ⅱ各1 h)，浸蠟(24 h)、包埋、修塊、切片、展片(40 ℃)。

1.3.6 HE染色 二甲苯(Ⅰ、Ⅱ各5 min)，100%(Ⅰ、Ⅱ各5 min)，95%(3 min)，80%(2 min)，蒸餾水洗 5 min，蘇木素染色 5 min，自來水5 min，分化液分化30 s，蒸餾水浸泡15 min，伊紅染色90 s，蒸餾水洗10 min，梯度酒精脫各1 min：70%，80%，90%，100%(Ⅰ、Ⅱ)，二甲苯透明各1 min(Ⅰ、Ⅱ)，晾干，中性樹脂封片。

1.3.7 甲苯胺藍染色 皮膚組織切片二甲苯(Ⅰ、Ⅱ)脫蠟，梯度酒精脫水70%，80%，90%，100%(Ⅰ、Ⅱ)，0.5%甲苯胺藍染色15 min，蒸餾水洗3次，每次1 min，95%，100%乙醇快速脫水(將切片放入其中蘸洗10次左右)，二甲苯透明3次(5 min/次)，晾干，中性樹脂封片，鏡下觀察。

表1 熒光定量PCR引物設計

2 結果與分析

2.1 提取總mRNA濃度和質量測定

用NanoDrop2000測定提取總RNA樣品濃度為450～1 200 ng/μL，OD值A260/280為1.92～2.09，A260/230為2.12～2.17，符合要求；總mRNA樣品用瓊脂糖凝膠電泳檢測，膠帶呈現清晰的28S、18S和5S 3條帶，并且28S條帶亮度是18S亮度的2倍，結果表明提取總mRNA完整(圖1)。

2.2 熒光定量

圖1 總mRNA瓊脂糖凝膠電泳

在所有檢測樣本中ASIP基因在DHB中表達含量較其他樣本高；MITF基因在DH和THH高表達，TB和THB低表達；MC1R基因在THH、DHH和THB高表達，TB中表達含量低；TYR基因表達量在DHH和THH相對較高(圖2)，TYR表達量在天祝純白被毛中表達量是大通純黑被毛的2.87倍。

DH.大通純黑被毛;DHH.大通黑白花黑色被毛;DHB.大通黑白花白色被毛;TB.天祝純白被毛;THB.天祝黑白花黑色被毛;THH.天祝黑白花白色被毛。DH.Datong pure black coat; DHH. Datong piebald black coat; DHB. Datong piebald white coat; TB. Tianzhu white coat;THB. Tianzhu piebald black coat; THH. Tianzhu piebald white coat.

2.3 甲苯胺藍染色

甲苯胺藍是一種堿性染料，屬于噻嗪類染料，可作為細胞核染劑[15]。2種被毛顏色皮膚組織均能較好的顯示牦牛皮膚的黑色素分布和皮膚分層，是分析黑色素細胞和黑色素的研究關鍵。顯微鏡下清晰看到毛囊、毛發的結構，黑色素的分布。在毛發生長過程中，基部的黑色素細胞不能看到有黑色素顆粒的生成，毛乳頭細胞位于毛球中央，是由大量的結締組織構成，主要作用是供給毛發營養，從而保證了細胞不間斷得分裂增殖。在天祝白牦牛的毛囊染色發現毛發的根部容易被染色劑著色，周圍的黑色素細胞沒有產生黑色素顆粒。大通牦牛毛囊周圍黑色素細胞比天祝白牦牛密集，細胞核大，而且更為明顯。毛囊是由毛鞘、毛乳頭和毛球外面周圍的結締組織形成的。大通牦牛毛囊周圍和表皮中的黑色素細胞均產生大量黑色素顆粒，數量多于天祝白牦牛(圖3)。

A.大通牦牛毛發生長初期；B.大通牦牛成熟的毛發；C.大通牦牛毛囊與皮膚表皮結構；D.大通牦牛毛囊與皮膚表皮結構；E.天祝白色被毛牦牛毛囊結構；F.成熟毛囊及毛發結構；1.毛囊周黑色素細胞；2.黑色素顆粒；3.毛乳頭；黑色箭頭指示黑色素顆粒。

A.Datong yak wool happening grows initial stage; B.Datong yak mature hairs; C.Datong yak hair follicle and skin epidermis structure; D.Datong yak hair follicle and skin epidermis structure; E.Tianzhu white coat yak hair follicle structure; F.Mature follicle and hair structure; 1.Week of hair follicle melanocytes; 2.Melanin granules; 3. Hair papilla;Black arrow means the melanin granules.

圖3 大通黑色被毛牦牛和天祝白色被毛牦牛甲苯胺藍染色

Fig.3 Datong black coat yak and Tianzhu white coat toluidine blue staining

2.4 HE染色

普通的HE染色，黑色素不能清楚地顯示，但能清楚地顯示細胞結構[15]。在天祝白牦牛的表皮和毛囊周圍的黑色素細胞分布密集。大通牦牛毛囊中與毛發相連毛乳頭附近的黑色素含量比毛囊周圍其他部位含量高。在同一放大倍數視野下發現，大通牦牛的毛囊群比天祝白牦牛毛囊群密集，毛囊的直徑比天祝白牦牛長，毛發粗大。表皮黑色素細胞不規則，它們一般有形成空泡的趨勢，細胞核較大，成熟的黑色素細胞還有不明顯的樹突，細胞相互接觸，形成黑色素細胞簇，有的具有非典型的細胞核或者整個細胞呈現出多形性，部分細胞還存在于真皮和表皮連接處的上方(圖4)。

甲苯胺藍染色比HE染色較容易看到黑色素顆粒的分布，但是不能很好地對黑色素細胞進行染色；HE染色能充分得對黑色素細胞進行染色，能夠看到黑色素細胞的分布和形狀大小、細胞結構。黑色素在正常情況下分散在皮膚、毛發、眼睛虹膜及脈絡膜等器官內，皮膚的黑色素細胞位于表皮基底層細胞之間，無細胞間橋和張力原纖維，細胞體積較大，大小不均勻，有圓形、橢圓形、紡錘形等；細胞核大致呈圓形或卵圓形，細胞質內含有大量黑色素。黑色素細胞出現在表皮基底細胞之間和其上下方。另外也見于毛囊中。

A.天祝白牦牛皮膚組織切片；B.大通牦牛皮膚組織切片；C.天祝白牦牛毛囊；D.大通牦牛毛囊及黑色毛發；E.大通黑色被毛毛囊群；F.天祝白色被毛毛囊群；黑色箭頭指示黑色素顆粒。

3 討論與結論

3.1 ASIP基因相對表達量與毛色的關系

ASIP基因編碼的信號蛋白作用于毛囊微環境，阻止α-MSH與MC1R的結合，從而拮抗黑色素的產生[16]。吳偉偉[17]在山羊研究中發現ASIP在皮膚組織表達量白色最高，黑色最低。在不同被毛顏色太行山羊研究中發現，ASIP基因表達量不同。在羊駝皮膚中ASIP基因均有表達，但其表達水平與被毛顏色不同而表現出不同。在白色羊駝中表達量最高，不同毛色羊駝皮膚中ASIP基因表達量存在顯著差異[18]。本研究顯示ASIP基因高表達，MC1R基因會出現低表達，ASIP基因與MC1R基因是負相關。DHB中ASIP基因表達量最高，相反MC1R基因表達量白色被毛低于黑色被毛。這與毛色調控通路中ASIP的高表達抑制MC1R的表達相一致。

3.2 MITF基因相對表達量與毛色的關系

MITF可以調控TYR基因家族的表達，參與黑色素生成調控。ASIP能夠抑制α-MSH誘導MITF基因的表達和MITF與TYR基因啟動子Mbox的結合，導致TYR表達下調，最終黑色素合成減少[19]。MITF在牦牛皮膚組織中mRNA表達量黑色顯著高于其他皮膚(P<0.01)。當ASIP基因在DH、THH出現低表達時，對應的組織樣中的MITF基因出現高表達；ASIP基因在DHB中高表達時，DHB中MITF基因呈現低表達。ASIP基因對MITF基因呈現抑制作用，符合ASIP對MITF抑制調控機理。

3.3 MC1R基因相對表達量與毛色的關系

MC1R基因是黑色素皮質素受體1基因，當上游的ASIP基因下調MC1R基因，通過氨基酸末端，降低TYR水平[20]，最終導致真黑色素合成終止，轉為合成褐黑色素。在羊駝中，棕色被毛皮膚中MC1R基因的表達量是白色被毛的4.32倍，差異極顯著[21]。對大通牦牛和天祝牦牛基因表達量進行相對定量分析顯示，MC1R在牦牛皮膚組織中mRNA表達量DHH、THH、THB顯著高于其他皮膚(P<0.05)，THH中表達量最高。本研究同樣MC1R基因在白色被毛皮膚中高表達。

3.4 TYR基因相對表達量與毛色的關系

TYR是合成黑色素的限速酶，其表達量的高低和活性直接影響著黑色素合成的種類和數量。牛TYR基因被認為是決定毛色位點之一[22]。高莉等[23]研究發現TYR基因在棕色羊駝中的表達量是白色羊駝的13.67倍。本研究的結果顯示TYR表達量在TB中表達量是DH的2.87倍，與高莉等[23]研究結果相反。TYR的高表達并沒有出現在有色被毛中，推斷不同物種及遺傳可能是產生結果不同的原因，有待深入研究。

3.5 甲苯胺藍染色與HE染色

在天祝純白色被毛牦牛中發現，盡管毛色純白，但是經過染色發現在皮膚表皮中分布著數量較少的黑色素，牦牛生活在高海拔的地區，陽光的紫外線照射強烈，為了適應環境，皮膚表皮的黑色素可以吸收紫外線，減少傷害。年輕的黑色素細胞可分裂，皮膚的顏色決定于表皮細胞內黑色素的多少，而不決定于黑色素細胞的數目[24]。表皮基底層的黑色素細胞合成的黑色素主要用于形成膚色，具有保護作用，使機體免受紫外線傷害[25]。在大通純黑色被毛牦牛中發現，有些皮膚表皮并沒有黑色素存在，但在毛囊周圍發現黑色素，毛囊的黑色素細胞與表皮的黑色素細胞的調控機理不同或許是傳導運輸機理不同。黑色素細胞是黑色素的制造者，制成的黑色素沿黑色素細胞樹枝突沿途分送給角質形成細胞。故后者不制造黑色素也含有。黑色素形如細小的棕色顆粒，存在于基底細胞之間。當黑色素細胞向淺方位移位時，這種顆粒漸漸消失，故淺層細胞中僅有淺淡色。黑色素主要是由黑色素細胞產生和存儲，黑色素細胞根據特征不同分為3個群體：第一類分布在表皮，它們只有少量黑色素沉積；第二類分布于毛囊外根鞘中，它們的形態較小，沒有黑色素分泌，但是能夠增生分化；第三類分布于毛球部，形態較大并且有大量黑色素分泌，但是卻不能增生分化[26-27]。毛囊黑色素細胞合成的黑色素主要用于形成毛色[13]。黑色素通過黑色素細胞樹枝狀突起，向角質形成細胞轉移，然后隨表皮細胞上行至角質層，隨著老化的膠質細胞脫落排出體外[28]。

毛乳頭是毛發發生的部位，在毛發生長中，毛囊周圍的黑色素細胞產生黑色素在細胞之間傳導運輸，經黑色素運輸到與毛發直接相連的毛乳頭部位，因此，在毛囊中毛發的基部與毛乳頭相連接的部位黑色素密集。哺乳動物毛發著色主要來源于毛球部毛母質細胞間成熟黑色素細胞合成的色素[2]，而與毛囊所在皮膚組織中黑色素細胞的數量以及成熟度無關[29]。

3.6 結論

根據研究結果顯示，4種基因對牦牛不同被毛顏色起到一定的調控作用。ASIP對MITF和MC1R基因起著拮抗作用，影響TYR基因的表達量及黑色素的合成。TYR的高表達對黑色素的合成具有重要作用。為了進一步揭示牦牛不同被毛顏色的調控，需要結合基因的多態性和基因間相互關系進一步研究。大通牦牛是野生牦牛與家養牦牛雜交品種，大通牦牛比天祝白牦牛生活海拔地區較高，環境更加惡劣復雜，粗大的毛囊可以生長出較為粗長的毛發，而且毛囊的密度比天祝白牦牛的密度大。這樣密集的毛發有利于大通牦牛適應寒冷嚴酷的生活環境。

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Quantitative the Control Colour Gene Expression and the Melanin Cell Histologic Analysis in the Yak Skin

GAO Zecheng1，2，LIANG Chunnian2，WU Xiaoyun2，LI Mingna2， ZHANG Zhifei2，YAN Ping1，2

(1. College of Animal Science and Technology，Gansu Agricultural University，Lanzhou 730070，China;2.Lanzhou Institute of Husbandry and Pharmaceutical Science of CAAS，Key Laboratory of Yak Breeding Engineering of Gansu Province，Lanzhou 730050，China)

The test was to through the molecular level and histological level shed light the different mechanism of coat color in yak. The experiment adopted the Real-time fluorescent quantitive PCR technique to detect the skin tissue determines the main effect of pigment formation pathway genes：gray mouse gene(agouti signaling protein gene (ASIP)，Agouti)，small eye malformation associated transcription factor (microphthalmia-associated transcription factor，MITF)，melanin cortisol receptor 1 gene(melanocortin receptor 1，MC1R) and tyrosine enzyme gene(tyrosinase gene，TYR) expression.The results showed that theMC1Rexpression quantity in black the color was higher than the white color;MITFexpression quantity in the black coat with white color difference was obvious;ASIPexpression quantity in white color and black color was not different;TYRexpression quantity in Tianzhu white coat was Datong pure black coat 2.87 times，this result was opposite the colored coat with high expression result，theTYRexpression quantity of yak melanin synthesis effect remained to be further research.Test made by paraffin section method，using HE and toluidine blue staining.Mammalian hair by hair follicle growth and development of derivatives，the melanothore mainly distributed in the epidermis and hair follicles.Through microscope found the yak hair follicle was made up of wool sheath,hair papilla and connective tissue around the group formed outside the bulb.A lot of melanothores were found in skin and around hair follicels in Tianzhu white yak，and found that there was a small amount of melanin granules.Melanin granules were found in hair follicle and epidermis melanothore in Datong yak.The melanin content near the hair dermal papilla was higher than other parts around the hair follicle in black coat hair follicle.Datong yak hair follicle group was more serried than Tianzhu yak hair follicle group，and the diameter of the hair follicle was longer than Tianzhu yak，with thicker hair.The melanin cell around the hair follicle of Datong yak was denser than Tianzhu yak，and the nucleus was larger，and more obvious.

Yak;Genes about colour;RT-PCR;Paraffin section;Melanin

2016-11-09

科技部科技支撐計劃項目(2012BAD13B05)；現代農業(肉牛牦牛)產業技術體系(CARS-38)

高澤成(1991-)，男，山東萊蕪人，在讀碩士，主要從事家畜分子生物學研究。

閻 萍(1963-)，女，山西運城人，研究員，博士，博士生導師，主要從事動物遺傳育種與繁殖研究。

Q78；S823

A

1000-7091(2017)02-0117-07

10.7668/hbnxb.2017.02.018