精制冠心系列制劑提取工藝再評價研究

劉 濤， 唐 玉， 劉曉鳳， 彭曉鳳， 謝夢蝶

(1.成都大學 藥學與生物工程學院， 四川 成都 610106； 2.四川天一學院， 四川 綿竹 618200；3.成都大學 張瀾學院， 四川 成都 610106)

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精制冠心系列制劑提取工藝再評價研究

劉 濤1， 唐 玉1， 劉曉鳳2， 彭曉鳳1， 謝夢蝶3

(1.成都大學 藥學與生物工程學院， 四川 成都 610106； 2.四川天一學院， 四川 綿竹 618200；3.成都大學 張瀾學院， 四川 成都 610106)

對精制冠心系列制劑提取工藝進行再評價研究，為改進該系列制劑的生產工藝提供實驗依據.以有效成分提取轉移率和出膏率的綜合評分為指標，利用單因素試驗及正交試驗全面試驗考察精制冠心系列制劑提取工藝的可優化參數和未明確參數，并確定其最佳提取工藝.精制冠心系列的最佳提取工藝為改進后的精制冠心片提取工藝，具體為：丹參、赤芍、川芎、紅花用70%乙醇回流提取2次，第一次加入10倍量70%乙醇提取3 h，第二次加入8倍量70%乙醇提取2 h.結果表明，改進后的精制冠心系列提取工藝穩定可行，有效成分提取轉移率較高，可用于工業大生產.

精制冠心系列制劑；提取工藝；再評價研究

0 引 言

精制冠心系列制劑由丹參、川芎、赤芍、紅花、降香5味中藥材組成，是《中國藥典》2015版一部收錄的中藥復方制劑，包括精制冠心片和精制冠心顆粒，具有活血化瘀之功效，臨床用于淤血內停所致的胸痹，冠心病與心絞痛等癥[1].方中丹參與赤芍為君藥，丹參的主要成分為丹參酮IIA與丹酚酸B，赤芍的主要成分為芍藥苷.丹參酮IIA具有抗動脈粥樣硬化、抗心律失常等藥理作用；丹酚酸B具有保護心肌梗死、抑制動脈粥樣硬化等藥理作用；芍藥苷具有保護腦缺血后血腦屏障及大腦局部血流量等藥理作用[2-4].同是源于冠心康顆粒的精制冠心片與冠心顆粒2種中成藥[5]，其提取工藝卻不同，導致其藥效物質基礎可能不同.何種提取工藝較佳，有待研究評價.對此，本研究以基于中藥工藝與質量控制的中成藥再評價研究理論[6]為基礎，以指標成分提取轉移率和出膏率的綜合評分[7]為指標，對精制冠心系列制劑提取工藝進行再評價研究，擬為改進該系列制劑的生產工藝提供實驗依據.

1 試藥與儀器

1.1 試 藥

實驗所用試藥包括：丹參(批號20160730)、川芎(批號20131224)、赤芍(批號20141214)、紅花(批號20141214)、降香(批號20141214)，均購自于成都市荷花池中藥材市場，經成都大學徐玉玲副教授鑒定為正品；芍藥苷對照品(批號150913，質量分數大于98%)、丹酚酸B對照品(批號151119，質量分數大于98%)、丹參酮IIA對照品(批號160304，質量分數大于98%)購自四川維克奇生物技術有限公司；甲醇、乙腈為色譜純，其余為分析純，均購自成都市科龍化工試劑廠；水為怡寶純凈水.

1.2 儀 器

實驗所用儀器包括：DZTW型電子調溫電熱套(天津市靜海縣工興電器廠)；DZF-6050A型真空恒溫干燥箱(北京中興偉業儀器有限公司)；SHZ-DⅢ型循環水真空泵(鄭州杜甫儀器廠)；P230型高效液相色譜儀(大連依利特分析儀器有限公司)；FA2004型分析天平(上海良平儀器儀表有限公司)；BS-6KH型電子天平(上海友聲衡器有限公司)；酒精計(武強同輝儀表廠)；HS3120型超聲波清洗器.

2 方法與結果

2.1 指標成分的含量測定

2.1.1 精制冠心片中芍藥苷、丹酚酸B、丹參酮IIA的含量測定.

精制冠心片中芍藥苷、 丹酚酸B、丹參酮IIA按《中國藥典》2015版一部“精制冠心片”項下方法測定[1].2.1.2 精制冠心顆粒中芍藥苷、丹酚酸B含量測定.

精制冠心顆粒中芍藥苷、丹酚酸B按《中國藥典》2015版一部“精制冠心顆粒”項下方法測定[1].

2.2 干膏率的測定

取干燥至恒重的蒸發皿，精密加入50 mL藥液，水浴蒸干，于105 ℃烘3 h，干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定質量，計算確定干膏率.

2.3 精制冠心片提取工藝參數確定

按《中國藥典》2015版一部方法，精制冠心片中丹參、赤芍、川芎、紅花提取工藝中提取所用乙醇濃度偏大且未明確乙醇用量.對此，本實驗擬對其進行再評價研究.

2.3.1 提取所用溶媒量及所用溶媒濃度考察.

在預實驗基礎上，選取乙醇用量、乙醇濃度為考察因素，以芍藥苷轉移率、丹酚酸B轉移率、丹參酮ⅡA轉移率的綜合評分為指標，按處方比例稱取丹參37.6 g，赤芍18.8 g，川芎18.8 g，紅花18.8 g，共4份，按L4(23)正交表安排實驗，按“2.1.1”項下方法進行含量測定.實驗安排及結果見表1，方差分析見表2.

表1 兩因素兩水平實驗結果

注：綜合評分=芍藥苷轉移率/芍藥苷最大轉移率×33.33+丹酚酸B轉移率/丹酚酸B最大轉移率×33.33+丹參酮ⅡA轉移率/丹參酮ⅡA最大轉移率×33.33

表2 兩因素兩水平試驗顯著性差異分析表

由表1、2可知：各因素對提取工藝的影響因素順序為B(乙醇用量)>A(乙醇濃度)；方差分析表明，因素B具有顯著性影響，因素A影響不顯著.根據數據分析，選取最佳提取工藝為A2B1，即加入10倍量70%乙醇回流提取2次.

2.3.2 驗證實驗.

按“2.3.1”項下優選的提取工藝平行制備3份供試品，按“2.1.1”項下方法進行含量測定.驗證實驗結果表明，芍藥苷、丹酚酸B與丹參酮IIA的轉移率RSD分別為，1.69%、4.71%與4.92%，說明優選的提取工藝較穩定可行.

2.3.3 2次加入溶媒量優化.

取丹參37.6 g、赤芍18.8 g、川芎18.8 g、紅花18.8 g，加入70%乙醇回流提取2次，每次加入的溶媒量不同，第一次提取3 h，第二次提取2 h.采用單因素試驗法，并按“2.1.1”項下方法進行含量測定.實驗安排與結果見表3.

表3 優化2次加入溶媒量

由表3結果可知，精制冠心片的最佳提取工藝為：丹參、赤芍、川芎、紅花按照《中國藥典》2015版一部規定的處方比例，用70%乙醇回流提取2次，第一次加入10倍量乙醇提取3 h，第二次加入8倍量乙醇提取2 h.

2.4 精制冠心顆粒提取工藝參數確定

按《中國藥典》2015版一部方法，精制冠心顆粒中丹參、赤芍、川芎、降香提取工藝中溶媒量不確定，冷凝回流次數多且提取時間較長.對此，本實驗擬對其進行再評價研究.

2.4.1 精制冠心顆粒中丹參、赤芍、川芎、降香提取工藝參數確定.

選取溶媒量(用水量)、提取次數為考察因素，以芍藥苷轉移率、丹酚酸B轉移率與干膏率的綜合評分為指標，按處方比例稱取丹參30.0 g，赤芍15.0 g，川芎15.0 g，降香10.0 g，因素水平實驗安排見表4，按“2.1.2”項下方法進行含量測定，按“2.2”項下方法進行干膏率測定，結果見表5，方差分析見表6.

表4 全面實驗因素水平表

表5 正交實驗結果分析表

注：綜合評分=丹酚酸B轉移率/丹酚酸B最大轉移率×50.00+芍藥苷轉移率/芍藥苷最大轉移率×30.00+出膏率/最大出膏率×20.00[9].

表6 綜合評分方差分析

由表5、6可知，各因素對提取工藝的影響因素順序為B(提取次數)>A(溶媒量)；方差分析表明，因素B具有顯著性影響，因素A影響不顯著.根據數據分析，選取最佳提取工藝為A1B3，即以水為提取溶媒，選取溶媒量為4倍，回流提取3次，提取時間分別為1.5 h、1 h、0.5 h.

2.4.2 驗證實驗.

按“2.4.1”項下優選的提取工藝平行制備3份供試品，按“2.1.2”項下方法進行含量測定，按“2.2”項下方法進行干膏率測定，實驗結果表明，芍藥苷轉移率、丹酚酸B轉移率、出膏率RSD分別為：2.97%、4.57%、0.80%，說明優選的提取工藝穩定可行.

2.4.3 精制冠心顆粒工藝對比實驗.

稱取丹參30.0 g，赤芍15.0 g，川芎15.0 g，降香10.0 g，以4倍量水進行提取.按照《中國藥典》2015版一部規定工藝平行制備3份供試品，即供試品1、供試品2、供試品3.按“2.4.1”項下優選的提取工藝平行制備3份供試品，即供試品4、供試品5、供試品6.對比實驗結果見表7.

表7 提取工藝對比實驗結果

由表7結果可知，“2.4.1”項下優選的提取工藝不僅比《中國藥典》2015版一部規定提取工藝芍藥苷轉移率、丹酚酸B轉移率、出膏率的綜合評分高，結果穩定，而且提取時間大大縮短，適合工業化大生產流程.因此，精制冠心顆粒的最佳提取工藝為：丹參、赤芍、川芎、降香按照《中國藥典》2015版一部規定的處方比例，以水為提取溶媒，選取溶媒量為4倍，回流提取3次，提取時間分別為1.5 h、1 h、0.5 h.

2.5 中間體顯著性差異對比實驗

按“2.3.1”項下優選的提取工藝平行制備3份精制冠心片中間體，即供試品1、供試品2、供試品3.按“2.4.1”項下優選的提取工藝平行制備3份精制冠心顆粒中間體，即供試品4、供試品5、供試品6.按“2.1.1”項下方法進行含量測定，按“2.2”項下方法進行干膏率測定，實驗結果見表8.

表8 中間體顯著性差異對比實驗結果

注：P為供試品1、供試品2、供試品3與供試品4、供試品5、供試品6之間的顯著性差異.

由表8結果可知，精制冠心片中間體與精制冠心顆粒中間體的芍藥苷轉移率、丹酚酸B轉移率、出膏率無顯著性差異，而丹參酮IIA轉移率具有極顯著性.丹參酮IIA微溶于水，精制冠心顆粒由于提取工藝原因，丹參酮IIA幾乎完全喪失.丹參酮IIA作為君藥丹參的主要藥效成分，具有抗動脈粥樣硬化、抗血栓、抗心律失常等藥理作用，與精制冠心系列處方功能主治相符，為處方中不可或缺的藥效物質基礎.

據此，精制冠心系列的最佳提取工藝為改進后的精制冠心片提取工藝，即：丹參、赤芍、川芎、紅花用70%乙醇回流提取2次，第一次加入10倍量70%乙醇提取3 h，第二次加入8倍量70%乙醇提取2 h.

3 討 論

藥物上市后的再評價是藥品研究的一個重要環節，是確保用藥安全的有效手段，也是對新藥評價的擴大和延伸[8-10].由于精制冠心片與顆粒處方相同，功能主治相同，但因提取工藝參數不明確，提取工藝不一致，可能引起成品物質基礎不一致，因此有必要對其進行再評價研究.本研究通過實驗明確了上述2種劑型的提取工藝參數，使其提取工藝路線更合理可行，確定精制冠心系列的最佳提取工藝為改進后的精制冠心片提取工藝，此為改進該系列制劑的生產工藝提供了實驗依據.需指出的是，為了進一步對比2種劑型藥效物質基礎的差異，還需要進一步展開其HPLC指紋圖譜的研究工作，以便更全面有效地控制2種制劑的質量.

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[2]李秀英,黃文華,涂愛國.精制冠心片的配伍機制研究[J].江西中醫藥,2013，44(2):67-68.

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Re-evaluation on Extraction Process of Refined Crown Series Preparations

LIUTao1,TANGYu1,LIUXiaofeng2,PENGXiaofeng1,XIEMengdie3

(1.School of Pharmacy and Bioengineering, Chengdu University, Chengdu 610106, China;2.Sichuan Tianyi University, Mianzhu 618200, China; 3.School of Zhanglan, Chengdu University, Chengdu 610106, China)

The study of the re-evaluation on the extraction process of refined crown series preparations provided experimental basis for improving the production technology of the series.With the comprehensive evaluation of the extraction transfer rate and the dry extraction ratio as index, the single factor test,the orthogonal test and comprehensive test were used to investigate the optimizable parameters and unspecified parameters to find the best extraction process of refined crown series preparations.The optimal extraction process of refined crown series preparations was the improved extraction process of refined coronary tablets:Salvia miltiorrhiza Bge,Paeonia veitchii Lynch,Ligusticum chuanxiong Hort and Carthamustinctorius L were extracted twice with 70% ethanol reflux,and 10 times of 70% ethanol was added and the extraction lasted for 3 h for the first time,and 8 times of 70% ethanol was added and the extraction lasted for 2 h for the second time.The conclusion drawn from the paper is that the improved extraction process of refined crown series preparations is stable and feasible,which has higher effective component extraction transfer rate and can be used for industrial production.

refined crowns series preparations;extraction process;re-evaluation

1004-5422(2017)02-0131-04

2017-04-05.

四川省千人計劃(2013332)資助項目.

劉 濤(1976 — )， 男， 博士， 研究員， 從事中成藥開發與再評價研究.

R284.2

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