干擾素—γ誘導蛋白10在子癇前期孕婦血清和胎盤組織中的表達及意義

章彩萍+朱敏+傅蘇仙

[摘要] 目的 探討干擾素-γ誘導蛋白10（IP-10）在子癇前期（PE）孕婦血清和胎盤組織中的表達及意義。 方法 選擇2015年1月～2017年2月61例PE孕婦，按照嚴重程度分為輕度PE組（33例）與重度PE組（28例）；按照發病時間分為早發型PE組（24例）與晚發型PE組（37例），同期30例正常妊娠者為正常對照組，比較組間血清和胎盤組織中IP-10的表達情況。 結果 與正常對照組比較，輕度與重度PE組孕婦的血清IP-10水平、胎盤組織IP-10 蛋白表達量均明顯升高（P均<0.05），且重度PE組均明顯高于輕度PE組（P均<0.05），但早發型與晚發型PE組之間比較均無明顯差異（P均>0.05）。 結論 PE孕婦血清和胎盤組織中IP-10的表達過度，可能通過介導炎癥反應及抑制血管新生參與疾病的發生。

[關鍵詞] 子癇前期；干擾素-γ誘導蛋白10；血清；胎盤

[中圖分類號] R714.244 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701（2017）15-0012-03

[Abstract] Objective To investigate the expression and significance of interferon-γ inducible protein 10 in serum and placenta of pregnant women with preeclampsia. Methods 61 pregnant women with PE from Jan.2015 to Feb. 2017 were selected according to the severity， the patients were divided into mild PE group（33 cases） and severe PE group（n=28）. According to the time of onset， the patients were divided into early onset PE group（n=24） and late onset PE group（n=37），and the normal control group was normal pregnancy with 30 cases. The expression of IP-10 in serum and placenta tissue was compared between groups. Results Compared with the normal control group， the levels of IP-10 in serum and placenta of the mild and severe PE group were significantly higher（P<0.05），and of the severe PE group were significantly higher than those of the mild PE group（P<0.05），while there were no significant difference between early onset and late onset PE group（P>0.05）. Conclusion IP-10 in serum and placenta of pregnant women with PE are Overexpressed， which may be involved in the occurrence of disease by mediating inflammation and inhibiting angiogenesis.

[Key words] Reeclampsia； Interferon-γ inducible protein 10； Serum； Placenta

子癇前期（preeclampsia，PE）為妊娠期特有疾病，臨床上表現為母體綜合征可伴胎兒綜合征，如蛋白尿、高血壓腦病或伴多系統器官損傷等，或胎盤早剝、宮內窘迫等，尤其是重度子癇前期危害更甚，是導致我國孕產婦死亡的第2大原因[1，2]。PE的病因及發病機制比較復雜，目前認為可能的致病因素有螺旋動脈異常變形、上皮細胞功能失常、血管新生抑制、慢性子宮胎盤缺血、Th 1/Th 2型細胞因子紊亂、血管內炎癥等[3]。干擾素-γ誘導蛋白10（interferon-γ inducible protein 10，IP-10）是新近發現的由干擾素-γ誘導產生的一種趨化因子，既往研究已證明，IP-10能通過介導 Th1 型炎癥反應參與病毒性肝炎、系統性紅斑狼瘡、類風濕性關節炎、肺結核、動脈粥樣硬化等疾病，此外IP-10也是一種血管新生抑制因子[4，5]。動物實驗發現，PE孕鼠肝腎、子宮等組織中 IP-10的表達增高[6]，引起了學者的關注。本研究分析IP-10在PE孕婦血清和胎盤組織中的表達變化，為 IP-10在PE發病中的作用機制提供參考。

1資料與方法

1.1一般資料

抽取2015年1月～2017年2月61例PE孕婦，年齡22～33歲，平均（26.56±2.38）歲，其中輕度33例，重度28例；早發型（發病孕周<34周）24例，晚發型（發病孕周>34周）37例。選擇同期正常妊娠者30例，年齡21～30歲，平均（25.98±3.12）歲。入院時采集清晨空腹靜脈血2 mL分離血清，分娩后即刻留取胎盤母體面組織，保存待檢，兩組間基本資料間比較差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

納入標準：①患者診斷標準符合《婦產科學》（第 7 版）[7]；②可以收集到患者完整檢查和治療以及病史資料等；③研究經過醫院倫理委員會批準，患者知情同意等；排除標準：①入選對象均為單胎妊娠；②伴有其他妊娠合并癥及并發癥者；③患有意識障礙性疾病，無法配合研究者；④依從性差，或拒絕參加研究者。

1.2 方法

1.2.1 血清IP-10水平的檢測 采取雙抗體夾心 ELISA法，按試劑盒（美國 R&D 公司）說明書進行操作，用Elx800型全自動酶標儀（美國 VARIOSKAN FLASH Thermo 公司）檢測獲得OD 450 值，根據標準曲線算出水平。

1.2.2 胎盤組織IP-10蛋白表達量的檢測 采取Western blot法，在提取胎盤組織總蛋白后，用 Bradford 法測定其濃度，并將各標本調整到相同蛋白濃度。用SDS-PAGE 電泳蛋白，電轉移到PVDF 膜（北京中杉金橋生物技術有限公司），4℃封閉過夜。以 1∶2500的比例稀釋多克隆抗體（北京冬歌生物），4℃孵育過夜，用TBST 緩沖液洗膜 3 次。將漂洗好的膜放置在1∶2000稀釋的二抗HRP-羊抗兔 IgG（北京冬歌生物）中，在37℃下孵育2 h，ECL顯色試劑盒（美國 Abcam 公司）顯示膠片感光顯影。用 Image J 軟件掃描膠片上的圖像，獲得灰度值，用積分光密度法統計Western blot結果，然后與內參Actin 光密度值相比，即為IP-10蛋白相對表達量。

1.3 觀察指標

比較輕度組、重度PE組、正常對照組和早發型PE組及晚發型PE組IP-10水平和胎盤組織IP-10 蛋白。

1.4 統計學方法

采用SPSS13.0統計學軟件分析，計量資料以（x±s）表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，三組間比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA，F檢驗），對于有意義采用SNK-q檢驗進行兩兩比較，計數資料以百分比（%）表示，組間采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血清IP-10水平分析

輕度與重度PE組孕婦血清IP-10水平分別為（115.23±20.51）pg/mL、（147.16±31.47）pg/mL，高于正常對照組（84.72±11.38）pg/mL（P<0.05），重度PE組明顯高于輕度PE組（P<0.05）；早發型PE組IP-10水平（141.96±22.38）pg/mL低于晚發型PE組（158.16±25.66）pg/mL，但差異無統計學意義（P>0.05），見表1，2。

2.2 胎盤組織IP-10蛋白表達

輕度與重度PE組胎盤組織IP-10蛋白表達量分別為（0.919±0.054）、（1.638±0.079），明顯高于正常對照組的（0.777±0.089）（P<0.05），重度PE組明顯高于輕度PE組（P<0.05）；早發型PE組IP-10蛋白表達量（1.081±0.029）高于晚發型PE組（1.074±0.053），但差異無統計學意義（P>0.05），見表3、4。

3討論

迄今對PE的病因和發病機制尚未完全明了，多認為其是一種母體系統性的過度性炎癥反應[8]。前期動物實驗提示IP-10與PE的發病有關系，可能涉及母體、胎盤和胎兒等多種因素，包括有滋養細胞侵襲異常、免疫調節功能異常、內皮細胞損傷、遺傳因素和營養因素，但是沒有任何一種單一因素能夠解釋所有子癇前期發病的病因和機制，與子癇前期發病相關的重要機制包括血管痙攣、內皮細胞激活、升壓反應增加、前列腺素、一氧化氮、內皮素和血管生成和抗血管生成的蛋白質[9，10]。

IP-10為趨化因子CXC家族成員，又可稱為CXCL10。目前已發現多達30種的細胞可表達 IP-10，包括活化的成纖維細胞、NK細胞、T細胞、單核/巨噬細胞等，由于IP-10能趨化NK細胞、T 淋巴細胞、單核細胞等多種炎癥細胞，因而生物學功能十分豐富重要[11，12]。IP-10的受體只有CXCR3，IP-10可特異性結合靶細胞上的CXCR3，經信號轉導途徑介導免疫細胞遷移、活化，具有促炎癥反應的特性。Th1/Th2 型細胞因子紊亂是PE的主要學說之一[7]，而IP-10可選擇性趨化 Th1細胞，推進具有免疫殺傷作用的Th1反應，破壞Th2反應[13]。此外，IP-10還具有調節血管生成的特性，體內、體外研究均證明 IP-10能有效抑制血管新生[14]。有研究認為[15]，促血管生成因子/抗血管生成因子失衡造成了PE的病理生理改變。

本研究結果顯示，無論是輕度抑或重度PE的血清、胎盤組織中IP-10的表達均明顯高于正常妊娠，與既往研究一致，而且病情越重，PE表達升高越明顯，但早發型與晚發型PE不存在明顯差異。正常妊娠過程中出現全身性血管炎癥反應，特別是在妊娠初期，一些炎性刺激物的生成會增加，而PE患者體內的IFN-γ、IP-10等因子更會不受抑制地增加，從而表現出過度的血管炎癥反應[16]。IFN-γ可誘導吲哚胺2，3-雙加氧酶的合成，使色氨酸轉變為犬尿氨酸，使血液中色氨酸的水平下降，可能與出現神經系統癥狀有關，IFN-γ誘導巨噬細胞可誘導一氧化氮合酶產生，促進NO的合成，可誘導小膠質細胞星形細胞的iNOS產生，可能與中樞神經系統的某些疾病的發生或保護作用有關[17，18]。IP-10作為一種血管新生抑制因子，屬趨化因子CXC亞家族，由單核細胞、內皮細胞等在γ干擾素和腫瘤壞死因子誘導下表達，可趨化活化T細胞和單核細胞，參與遲發型超敏反應和造血調控，受體為CXCR3，促進滋養層細胞黏附、遷移及浸潤，削弱造血干細胞功能，抗血管生成，參與血管重鑄，而使其在PE患者血清和胎盤中的表達過度，由此可推測IP-10可能通過介導全身性血管炎癥反應及抑制血管新生參與PE的發生[19，20]。

IP-10 表達過度能夠反映出PE患者機體處于血管炎癥狀態和抗血管生成狀態，其與PE的發病有密切關系，但對其在PE病理生理過程中的具體作用、信號轉導機制及其在廣泛的免疫網絡中所發揮的功能仍需進一步闡明。

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