茄根煎液對Ⅱ度凍瘡大鼠模型的療效觀察

白 強，羅銀河*，王妍潔，紀(jì)紅云，歐陽皇迪，曹靜靜

（湖南中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)院，湖南 長沙 410208）

茄根煎液對Ⅱ度凍瘡大鼠模型的療效觀察

白 強，羅銀河*，王妍潔，紀(jì)紅云，歐陽皇迪，曹靜靜

（湖南中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)院，湖南 長沙 410208）

目的考察茄根煎液不同給藥途徑對Ⅱ度凍瘡SD大鼠模型血液流變學(xué)的影響。方法將50只SD大鼠隨機分為空白組、模型組、灌胃組、外涂組、凍瘡膏組5組，利用液氮建立Ⅱ度凍瘡模型，連續(xù)給藥10 d后觀察皮損計分、腫脹率、血液流變學(xué)的變化。結(jié)果茄根煎液外涂組、灌胃組、凍瘡膏組皮損計分、腫脹率、全血黏度、紅細(xì)胞比容、血漿黏度、凝血因子Ⅰ較模型組均有明顯降低（P＜0.01）；與灌胃組比較，外涂組皮損計分在第 8、10 天明顯降低（P＜0.01），腫脹率在第 2、4、6、8、10 天明顯降低（P＜0.01）；與凍瘡膏組和灌胃組比較，外涂組全血黏度值、細(xì)胞比容值、血漿黏度值均明顯降低（P＜0.01）。結(jié)論凍瘡模型大鼠局部有血液微循環(huán)障礙，茄根煎液不同給藥途徑均可降低微循環(huán)血液流變學(xué)相關(guān)指標(biāo)，從而改善微循環(huán)障礙，以外涂給藥優(yōu)于灌胃給藥。

茄根；凍瘡；血液流變學(xué);微循環(huán)障礙

凍瘡是由于氣候寒冷引起的人體局部皮膚反復(fù)紅斑、腫脹性損害，嚴(yán)重者可出現(xiàn)水皰、潰瘍，多發(fā)生于肢體的末端和皮膚暴露部位，如手、足、鼻尖、面頰和耳部等處。其具有季節(jié)性、自愈性、易復(fù)發(fā)等特點。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為本病系因陽氣不達(dá)，復(fù)感寒邪侵襲，氣血運行不暢，經(jīng)脈阻隔、氣血凝滯肌膚而成。根據(jù)其病機，中醫(yī)治療以溫陽散寒，活血化瘀，消腫止痛為主。茄根是民間常見的一種中草藥,是茄科茄屬植物白茄Solanum melongenaL.的干燥根，具有活血化瘀、消腫止痛、祛風(fēng)通絡(luò)、清熱止血等功效,《全國中草藥匯編》記載其用于治療風(fēng)濕熱痹、腳氣、血痢、凍瘡?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)茄根其活性成分豐富,在抗炎、鎮(zhèn)痛、抗氧化、降血脂等方面有重要作用[1]。而這些功效在治療凍瘡過程中發(fā)揮著重要作用。本實驗觀察了茄根煎液不同給藥途徑對實驗性凍瘡大鼠的皮膚損傷修復(fù)、局部腫脹度、血液流變學(xué)的影響?，F(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 主要儀器及試劑 SA-5600自動血流變分析儀（北京賽科希德公司）；液氮（產(chǎn)地/生產(chǎn)商：青島，產(chǎn)品等級：工業(yè)級，含量：99.999%，執(zhí)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：GB/T，8979-2008）；6%硫化鈉溶液（6 g硫化鈉固體加100 mL蒸餾水）、10%水合氯醛 （用無菌生理鹽水將水合氯醛配制成10%的無菌溶液，即配即用）均為化學(xué)純，購買于廣州蘇喏化工有限公司。

1.1.2 藥物 茄根購自祁州百草公司，經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥鑒定教研室鑒定為正品，待洗凈晾干后，稱取茄根1.5 kg，水煎，濃縮成1 g/mL的藥液，4℃冷藏，備用。凍瘡膏：規(guī)格20 g/支，湖北科田藥業(yè)有限公司。

1.1.3 實驗動物 SPF級SD大鼠50只，雄鼠，體質(zhì)量（200～250）g，許可證號：SCXK(湘)2011-0003。動物實驗使用單位：湖南中醫(yī)藥大學(xué)。許可證號：SYXK（湘）2013-0005。

1.2 實驗方法

1.2.1 實驗分組 50只SD大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，取10只為空白組。其余40只造模，模型成功后將40只SD大鼠隨機分為模型組、灌胃組、外涂組、凍瘡膏組4組，每組10只。

1.2.2 造模 參照王鵬等[2]方法建立Ⅱ度凍瘡大鼠模型。實驗大鼠術(shù)前一晚開始禁食，當(dāng)天禁水。實驗時10%水合氯醛按照0.4 mL/100 g劑量作腹腔麻醉。在作腹腔注射時，選擇在左下或右下腹部靠外側(cè)進(jìn)針，切忌將藥物直接注入腹腔臟器和血管內(nèi)[3]。麻醉后用彎剪緊貼皮膚粗略去除背部兩側(cè)試驗部位被毛，大小為直徑4 cm左右的圓形區(qū)域；用6%硫化鈉溶液快速蘸洗試驗部位，2～3 min后待被毛溶解成糊狀，用濕紗布擦洗干凈；脫毛后立即用溫水徹底洗凈，使試驗部位皮膚裸露。將準(zhǔn)備好的1元錢硬幣全部浸入液氮罐中15 min，使其充分冷卻至-196℃；然后取出1枚硬幣，立即將其貼緊大鼠背部一側(cè)試驗部位，致傷范圍以此大小作為1個瘡面，致傷時間8 s，造成皮膚局部凍傷，并重復(fù)上述冷凍操作，依據(jù)涂祈國等[4]模型評判方法，根據(jù)Ⅱ度受凍較重，小動脈收縮時間過長，組織損傷加重，在紅斑的基礎(chǔ)上會發(fā)水皰或大皰，且內(nèi)容清晰，皰破后形成糜爛滲出液或結(jié)痂等現(xiàn)象來判斷模型的成功與否?？瞻捉M同樣給予局部皮膚剪毛、蘸洗等操作，但不進(jìn)行冷凍造模處理。

1.2.3 給藥方法 造模成功后24 h開始給藥。各組給藥持續(xù)10 d。外涂組在裸露皮膚表面給予5 g/kg的茄根煎液涂擦處理。灌胃組給予茄根煎液，5 g/kg。凍瘡膏組給予8 g/kg凍瘡膏在皮膚表面涂搽處理。模型組給予同外涂組等量的蒸餾水涂搽。各組處理均為2次/d，間隔8 h，空白組不做裸露皮膚涂擦處理。

1.2.4 療效指標(biāo)檢測 （1）皮損情況評分，參照李曉蕓等[5]方法，擬定皮損評分。給藥同時，每2日觀察1次患處皮損情況（紅斑、腫脹、有無繃緊感、水皰、糜爛及滲出液等）并做好記錄，比較用藥前后的變化，并根據(jù)局部皮損情況進(jìn)行計分統(tǒng)計。計分以紅斑、腫脹、水泡及糜爛等三個指標(biāo)進(jìn)行累計計分，其中無紅斑計0分，直徑小于1 cm計1分，直徑1～2 cm計2分，直徑大于2 cm計3分；無腫脹計0分，輕微腫脹計1分，有繃緊感計2分，腫脹明顯且局部發(fā)亮計3分；出現(xiàn)水泡計3分，出現(xiàn)糜爛計4分，滲出液較少計5分，滲出液較多可流出計6分；（2）凍瘡局部腫脹程度的測定，給藥同時，每2日稱量大鼠凍瘡后的體質(zhì)量，持續(xù)10日。采用馬平勃等[6]稱體質(zhì)量法，計算出各時間段治療時體質(zhì)量變化值，體質(zhì)量變化值/凍前值×100%即得體質(zhì)量變化百分率 （凍前值以100%計），用體質(zhì)量變化百分率作為其腫脹率；（3）局部凍傷大鼠病理形態(tài)的檢測，末次給藥24 h后采用注射麻醉法處死各組大鼠，分別切取各組大鼠凍傷皮膚組織標(biāo)本，經(jīng)固定、水洗、梯度乙醇脫水、二甲苯透明、石蠟包埋、連續(xù)切片、蘇木精-伊紅染色、中性樹膠封固后，于光學(xué)顯微鏡下觀察不同組別皮下的炎癥、水腫、血管等情況；（4）血液流變學(xué)檢測指標(biāo)各組大鼠用10%水合氯醛麻醉后，腹主動脈取血5 mL，肝素抗凝，取2 mL抗凝血用SA-5600自動血流變分析儀檢測全血黏度、凝血因子Ⅰ、血漿黏度、紅細(xì)胞比容及血漿黏度等指標(biāo)（湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗科）。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 茄根對局部凍傷大鼠皮損計分變化的影響

外涂組及灌胃組在第 2、4、6、8、10 天的皮損計分均較模型組明顯降低，差異有顯著性（P＜0.01或P＜0.05）。 凍瘡膏組第 4、6、8、10 天的皮損計分均較模型組明顯降低，差異有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01或P＜0.05）。外涂組在第8、10天的皮損計分低于灌胃組，差異有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。外涂組在第 2、4、6、8、10 天的皮損計分與凍瘡膏組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。見表1。

表1 各組大鼠局部皮損計分情況 (±s，n=10)

表1 各組大鼠局部皮損計分情況 (±s，n=10)

注：與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與外涂組比較，##P＜0.01。

組別模型組外涂組灌胃組凍瘡膏組FP第2天9.0±1.83 7.6±0.84**8.1±0.88*7.5±1.04 2.68 0.061第4天8.5±1.27 6.1±0.74**7.7±0.67**7.0±0.82**1.51 0.23第6天7.7±1.06 4.8±0.63**7.1±0.56**6.6±0.84*0.055 0.983第8天6.8±0.72 3.4±0.70**6.3±0.48**##5.9±0.74*0.316 0.814第10天6.3±0.67 2.7±0.67**5.4±0.52*##4.6±0.70**0.323 0.809

2.2 茄根對局部凍傷大鼠病理形態(tài)的影響

結(jié)果可知，模型組表皮較厚，皮下有較少血管；凍瘡膏組、外涂組、灌胃組表皮均較薄，中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等炎細(xì)胞較少，成纖維細(xì)胞較多，并有毛囊出現(xiàn)，可知給藥后表皮腫脹消退且凍傷皮膚逐漸康復(fù),見圖1。

圖1 各組大鼠皮下組織病理形態(tài)（HE×200）

2.3 茄根對局部凍傷大鼠腫脹率的影響

藥物干預(yù)后，外涂組、灌胃組及凍瘡膏組的腫脹率在第 2、4、6、8、10 天較模型組有明顯降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01或P＜0.05）。外涂組腫脹率在第 2、4、6、8、10 天均低于灌胃組，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），在第 6、8、10 天低于凍瘡膏組，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。見表2。

表2 各組大鼠腫脹率比較 ±s,n=10,%)

表2 各組大鼠腫脹率比較 ±s,n=10,%)

注：與模型組比較，**P＜0.01，*P＜0.05；與外涂組比較，##P＜0.01。

組別空白組模型組外涂組灌胃組凍瘡膏組FP第2天-0.131±0.024 0.076±0.009**0.113±0.129**##0.118±0.067*4.207 0.026第4天-0.100±0.043 0.046±0.009**0.055±0.010**##0.054±0.011**4.600 0.003第6天-0.066±0.016 0.034±0.003**0.051±0.007*##0.052±0.011*##12.13 0.001第8天-0.044±0.007 0.024±0.002**0.034±0.005*##0.032±0.008**##5.074 0.002第10天-0.023±0.002 0.021±0.002**0.029±0.001**##0.024±0.002**##2.853 0.034

2.4 茄根對局部凍傷大鼠血液流變學(xué)的影響

模型組全血黏度、紅細(xì)胞比容、血漿黏度及凝血因子Ⅰ均顯著高于空白組（P＜0.01)。外涂組、凍瘡膏組、灌胃組各項指標(biāo)均明顯低于模型組（P＜0.01）。外涂組全血黏度值低于凍瘡膏組和灌胃組，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。外涂組凝血因子Ⅰ含量與凍瘡膏組和灌胃組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。外涂組的細(xì)胞比容值和血漿黏度值低于凍瘡膏組和灌胃組，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。見表3。

表3 各組大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)比較 (±s,n=10)

表3 各組大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)比較 (±s,n=10)

注：與空白組比較，**P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.01；與外涂組比較，##P＜0.01。

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3 討論

大量實驗結(jié)果表明:機體受凍后，血液黏度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)均增加，并且紅細(xì)胞硬度升高，導(dǎo)致紅細(xì)胞變形能力降低，體內(nèi)血凝性質(zhì)增強，而抗凝物質(zhì)含量減少，抗凝效應(yīng)降低。血液處于高凝狀態(tài);且凝血程度會隨凍傷程度而變化，隨著凍傷時間的延長，凍傷大鼠全血黏度及血漿黏度會逐漸惡化，這些因素綜合作用使局部肢體微循環(huán)障礙，加速凍瘡形成，并造成凍瘡區(qū)組織損傷、變性、壞死[7-9]。因此降低凍區(qū)的血液高凝狀態(tài)，改善微循環(huán)障礙，是治療凍瘡的關(guān)鍵一步。

現(xiàn)代藥理分析，茄根中化學(xué)成分種類很多,主要含有苯丙酰胺、木脂素、黃酮、香豆素、甾體、倍半萜和小分子齡酸等。在民間茄根是一種常見的中藥材,具有活血化瘀、消腫止痛、祛風(fēng)通絡(luò)、清熱止血等功效,用于除風(fēng)濕熱痹、腳氣、血痢、凍瘡等。有研究表明內(nèi)服茄根酸性組分可以顯著降低高脂血癥小鼠的三酰甘油的量，提高高密度脂蛋白與低密度脂蛋白的比例[10]。茄根水煎劑對于二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹具有一定的抑制作用[11]。

本研究選取民間常用中藥茄根，考察其不同給藥途徑對實驗性凍瘡大鼠血流變的影響。實驗結(jié)果顯示，茄根煎劑有利于凍傷的恢復(fù)，在凍瘡早期可以降低凍傷區(qū)的血液粘稠度及紅細(xì)胞比容，改善了凍傷區(qū)的微循環(huán)障礙。在凍瘡修復(fù)期時，加速肉芽組織的生成，加快損傷修復(fù)，縮短了凍瘡恢復(fù)的周期。從不同給藥途徑來看，外涂組表現(xiàn)出的藥效作用優(yōu)于灌胃給藥方式。但本實驗主要從凍瘡區(qū)的血液高凝狀態(tài)這方面來進(jìn)行茄根煎劑治療凍瘡的機制的探究。對于凍瘡區(qū)的炎癥僅在皮膚的腫脹率涉及，未進(jìn)行詳細(xì)的研究，而凍瘡區(qū)的炎癥反應(yīng)對于其治療也有很大影響，值得進(jìn)一步探究。

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（本文編輯 楊 瑛）

Effects of Eggplant Root Decoction on DegreeⅡFrostbite Model Rats

BAI Qiang,LUO Yinhe*,WANG Yanjie,JI Hongyun,OUYANG Huangdi,CAO Jingjing
(College of Combination of Chinese Traditional and Western Medicine,Hunan University of Chinese Medicine,Changsha,Hunan 410208,China）

ObejectiveTo investigate the hemorrheology of eggplant root decoction in different routes of administration on degreeⅡ frostbite model rats.Methods50 SD rats were randomly divided into five groups, control group,model group,gavage group,exterior coating group,frostbite cream group.The degreeⅡfrostbite model rats were established by liquid nitrogen.After consecutive medication for 10 days,the changes of the lesions scoring,swelling rate,blood rheology were observed.ResultsCompared with the model group,the scoring lesions,swelling rate,blood viscosity,hematocrit,plasma viscosity,coagulation factor in eggplant root decoction exterior coating group,gavage group,frostbite cream group were significantly lower(P＜0.01).Compared with the gavage group,the lesions score of exterior coating group was significantly lower at 8 and 10 days(P＜0.01),the swelling was significantly lower at 2,4,6,8,10 days(P＜0.01).Compared with frostbite cream group and gavage group,the whole blood viscosity values,hematocrit value,plasma viscosity values were significantly lower(P＜0.01).ConclusionThe frostbite model rats were with the locally blood microcirculation,eggplant rootdecoction in differentroutesofadministration can reduce the microcirculation hemorheology parametersand improve microcirculation,the route of exterior coating administration is better than oral administration.

eggplant root;frostbite;hemorheology;morphology

R285.5；R269

A

10.3969/j.issn.1674－070X.2017.02.010

2016-05-16

湖南省大學(xué)生研究性學(xué)習(xí)和創(chuàng)新性實驗計劃項目（10210001017057）。

白 強，男，本科在讀。

* 羅銀河，女，副教授．E-mail：1286313109@qq．com。

本文引用：白 強，羅銀河，王妍潔，紀(jì)紅云，歐陽皇迪，曹靜靜.茄根煎液對II度凍瘡大鼠模型的療效觀察[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2017，37（2）：153-156.