黔北麻羊超數排卵效果分析

朱芳賢 陳家宏 許海濤

摘要 [目的]探索適宜的地方山羊品種超數排卵方案。[方法]以黔北麻羊為試驗動物，比較不同品牌促卵泡素（FSH）、相同品牌不同劑量FSH的超數排卵效果。[結果]41只黔北麻羊的平均黃體數14.59個，平均有效胚數8.39枚。日本產FSH 20.0 AU/只劑量組平均黃體數13.90個，平均有效胚數10.21 枚；加拿大產FSH 160 mg/只劑量組平均黃體數14.00個，平均有效胚數7.33 枚。[結論] 日本產FSH的適宜劑量為20.0 AU/只，加拿大產FSH的適宜劑量為160 mg/只，日本產FSH的超數排卵效果優于加拿大產FSH，但差異不顯著。

關鍵詞 黔北麻羊；超數排卵；促卵泡素；有效胚

中圖分類號 S826 文獻標識碼 A 文章編號 0517-6611（2017）34-0089-03

Abstract [Objective]To explore the optimal superovulation scheme for local goats. [Method] Taking Qianbei brown goat as test amimals， the superovulation effects among different brands of FSH， same brand FSH with different dosages were compared. [Result]

The luteum （CL） number of 41 Qianbei brown goats was 14.59， the number of effective embryos was 8.39.In the group of Japanese FSH with the dose of 20.0 AU/head， the luteum （CL） number was 13.90， the number of effective embryos was 10.21.In the group of 160 mg/head FSH from Canada， the luteum （CL） number was 14.00， the number of effective embryos was 7.33. [Conclusion]The appropriate dose of FSH from Japan was 20.0 AU/head， the suitable dose of FSH from Canada was 160 mg/head， and the superovulation effect of FSH from Japan was better than that of FSH from Canada， but there was no significant difference.

Key words Qianbei brown goat；Superovulation；Folliclestimulating hormone；Effective embryo

黔北麻羊是經過長期選育的特色地方山羊品種，具有適應性強、抗病力強、耐粗飼和肉質優良等特點[1]。為了避免在發展過程中因雜交、近交、環境變化等造成的優良基因流失，開展了貴州良種黔北麻羊保種胚胎收集保存工作。利用冷凍胚胎保存動物遺傳資源與其他保存技術相比具有突出的優越性，胚胎保存了品種的全部基因，若有數量充足的胚胎，可保存與現有物種遺傳多樣性一致的遺傳資源。細胞可在超低溫條件下長期保存，即使活物消失，只要存在同種物種，通過胚胎移植和核移植技術就可以恢復這些遺傳資源，因此在保護動物遺傳資源，尤其是挽救瀕危動物方面，冷凍胚胎技術發揮著越來越重要的作用[2]。筆者比較了不同品牌FSH、同一品牌不同劑量FSH對黔北麻羊的超數排卵效果，旨在為提高黔北麻羊品種保存、良種山羊擴繁技術提供參考。

1 材料與方法

1.1 供體羊

從主產區挑選純種優良黔北麻羊在國家肉羊產業體系貴陽綜合試驗站花溪區麥坪示范基地開展試驗。

1.2 試驗時間

2015年9—10月進行超數排卵處理、胚胎回收和胚胎冷凍保存。

1.3 主要藥品與儀器

1.3.1

主要藥品。日本（JP）產FSH（促卵泡素），劑量10 AU/支；加拿大（CAN）產Follitropin FSH，劑量400 mg/支；促黃體素釋放激素A3（促排3號），由寧波三生藥業有限公司生產，劑量20 μg/支；氯前列烯醇（PG），由上海市計劃生育科學研究所生產，0.2 mg/支；普魯卡因，由北京市永康藥業有限公司生產，40 mg/支；黃體酮陰道緩釋劑（CIDR），由新西蘭DEC國際有限公司生產，劑量1.9 g/支。

1.3.2 主要儀器與耗材。體視顯微鏡、羊用二通式沖卵管、滯留針、集卵杯、恒溫水浴鍋、手術器械、自制手術保定架。

1.4 供體超數排卵處理方案

將供體母羊隨機分成5組：① Ⅰ 組，注射日本產FSH，劑量為16.0 AU/只；② Ⅱ 組，注射日本產FSH，劑量為20.0 AU，第0天放栓，第9天開始注射，間隔12 h注射1次，注射量依次為3.6、3.2、3.0、2.6、2.4、2.0、1.8、1.4 AU/只，第5次注射時注射PG 0.2 mg/只，第7次注射時撤掉CIDR栓；③Ⅲ組，注射日本產FSH，劑量為24.0 AU/只；④Ⅳ組，注射加拿大產FSH，劑量 160 mg/只，第0天放栓，第9天開始注射，間隔12 h注射1次，注射量依次為28、24、22、22、18、18、14、14 mg/只，第5次注射時注射PG 0.2 mg/只，第7次注射時撤掉CIDR栓；⑤Ⅴ組，注射加拿大產FSH，劑量 200 mg/只。各試驗組放置CIDR和配種時各注射維生素ADE注射液3 mL，撤栓時用0.9%生理鹽水沖洗陰道，配種時注射促排3號3/4支。

1.5 供體羊配種

待觀察到第1次站立發情12 h后配種，此后間隔10～12 h再配種1次，連續配種2～3次。

1.6 胚胎的采集與質量鑒定

以發情之日為第0天，第7天采用手術法回收胚胎。用含1%血清的杜氏磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗兩側子宮角，每側20～30 mL 。子宮回流液靜置3～5 min后在實體顯微鏡下撿出卵子，并保存在保存液中。根據形態學標準進行胚胎分級，通常說的有用胚胎或可移胚胎包括A、B、C級胚胎，由于保種需要，該試驗中有效胚胎為A、B級胚胎。分級標準如下：

①A級。胚胎形態完整，輪廓清晰，呈球形，分裂球大小均勻，結構緊湊，色調和透明度適中，無附著的細胞和泡液，變性細胞少于15%。

②B級。輪廓清晰，色調及細胞密度良好，可見到少量附著的細胞和泡液，變性細胞少于50%。

③C級。輪廓不清晰，色調發暗，結構較為松散，游離的細胞或泡液較多，變性細胞少于75%。

④D級。16細胞以下的受精卵，或有碎片、輪廓不清晰、結構松散，變性細胞在75%以上。

1.7 數據處理

采用SPSS 17.0統計軟件對試驗數據進行統計分析，試驗數據以“平均值±標準差”表示，采用單因素方差分析對各組數據進行差異顯著性分析。超數排卵有效而沖卵失敗的個體不計入個體數。

2 結果與分析

2.1 不同FSH劑量超數排卵效果的比較

由表1可知，不同劑量日本產FSH處理中，Ⅱ組超數排卵效果最佳，平均黃體數、平均卵泡發育數（黃體數與卵泡數之和）、平均回收卵數、卵子回收率、平均有效胚數、有效胚率（有效胚占回收卵的比例）分別為13.90個、14.74個、11.40個、77%、10.21枚和90%，Ⅲ組平均卵泡發育數為22.80個，極顯著高于 Ⅰ 組和 Ⅱ 組（P<0.01），Ⅲ組平均卵泡數為3.60個，高于 Ⅰ 組和 Ⅱ 組（P>0.05）；Ⅰ 組和 Ⅲ 組平均回收卵數、卵子回收率、平均有效胚數、有效胚率均低于Ⅱ組，但差異均不顯著（P>0.05）。由表2可知，不同劑量加拿大產FSH處理中Ⅳ組超數排卵效果最佳，平均黃體數、平均卵泡發育數、平均回收卵數、卵子回收率、平均有效胚數、有效胚率分別為14.00個、15.17個、7.67個、51%、7.33枚和96%；Ⅴ組平均卵泡發育數（17.25個）和平均回收卵數（8.50個）均高于Ⅳ組，但差異均不顯著（P>0.05）；Ⅴ組卵子回收率、平均有效胚數、有效胚率均低于Ⅳ組，但差異不顯著（P>0.05）。

2.2 不同品牌FSH超數排卵效果的比較

由表3可知，加拿大產FSH處理組平均卵泡發育數、有效胚率均高于日本產FSH處理組（P>0.05），但平均回收卵數、卵子回收率、平均有效胚數均低于日本產FSH處理組（P>0.05），說明日本產FSH的超數排卵效果優于加拿大產FSH。

3 討論

超數排卵對于供體牛而言是一個復雜的生理過程，超數排卵處理方法通常是根據供體本身血清激素水平的變化而設計的，但對于不同品種、不同個體和不同藥物，其處理方法也不盡相同，超數排卵結果也不一。適宜FSH劑量是獲得最佳超數排卵效果的關鍵因素之一。若劑量過高會造成較強的激素應答反應。劉廣振[3]認為較強的激素應答反應使得部分個體優勢卵泡排卵過早，黃體功能不全，分泌孕酮水平較低，從而造成胚胎退化。譚景和等[4]、范必勤等[5]也認為較強的激素應答反應使得卵巢過度增大，卵泡過度增多，可能卵母細胞質量下降，排卵后卵子未進入輸卵管中而直接掉入腹腔，最終卵子回收率低、未受精卵多、可用胚率也很低，A、B級胚胎更少。該試驗中日本產FSH大劑量組（24.0 AU/只）、加拿大產FSH大劑量組（200 mg/只）組卵泡發育多，但回收到的卵子少，尤其是有效胚胎少，可能卵子質量差，造成受精率低和退化胚胎多。該試驗證實了以上說法，同時也說明黔北麻羊適宜FSH劑量為20.0 AU/只的日本產FSH和160 mg/只的加拿大產FSH。

超數排卵所用激素不同品牌、不同批次也是影響超數排卵效果的主要因素之一。桑潤滋[6]認為，不同品牌、不同批次都存在質量差異和效價不穩定，純度及所含促黃體素（LH）活性成分的多少，以及用于不同品種、不同個體超數排卵效果也不相同。該試驗中日本產FSH超數排卵效果優于加拿大FSH，但差異不顯著，說明日本產FSH更適合貴州黔北麻羊，同時也建議大規模進行超數排卵前應做預試驗。

4 結論

該試驗中用促卵泡素處理41只貴州黔北麻羊，平均黃體數14.59個，平均獲有效胚8.39 枚，日本產FSH的適宜劑量為20.0 AU/只，平均黃體數13.90個，平均回收卵數14.74個，平均獲有效胚10.21 枚；加拿大產FSH的適宜劑量為160 mg/只，平均黃體數14.00個，平均回收卵數7.67個，平均獲有效胚7.33 枚；日本產FSH效果優于加拿大產FSH，但差異不顯著，說明日本產FSH更適合貴州黔北麻羊，同時也建議大規模進行超數排卵前應做預試驗。

參考文獻

[1] 國家畜禽遺傳資源委員會組.中國畜禽遺傳資源志：羊志[M].北京：中國農業出版社，2011：370-373.

[2] 趙永聚.動物遺傳資源保護概論[M].重慶：西南師范大學出版社，2007：49-51.

[3] 劉廣振.奶牛胚胎體內死亡的因素分析及預防措施[J].乳業科學與技術，2005，27（5）：225-227.

[4] 譚景和，秦鵬春.超數排卵及其存在的問題（綜述）[J].黑龍江畜牧獸醫，1987（5）：33-37.

[5] 范必勤，熊慧卿，邵春榮.家兔超數排卵的研究[J].中國養兔雜志，1987（1）：25-30.

[6] 桑潤滋.動物繁殖生物技術[M].北京：中國農業出版社，2002：220-225.