副溶血弧菌噬菌體的吸附材料選擇及其吸附和洗脫作用

胡蝶 邱德全

摘要 [目的]選擇副溶血弧菌噬菌體的適宜吸附劑，并研究其吸附和洗脫作用。[方法]比較了滑石粉+硅藻土（3∶1）、活性炭、蒙脫石、玻璃纖維4種吸附劑對副溶血弧菌噬菌體的吸附固定化效果以及洗脫效果。[結果]蒙脫石和玻璃纖維對噬菌體的吸附效果好。

通過單因素試驗和正交試驗研究蒙脫石用量、吸附時間、吸附液pH對噬菌體固定化的影響，結果發現當蒙脫石用量為0.5 g，吸附時間為1 h，吸附液pH為6.0時，吸附效果最佳。[結論]將副溶血弧菌噬菌體制成固定化制劑后分別作用于養殖動物和養殖水體，可以達到對養殖動物進行生物防治和改善水體環境的目的。

關鍵詞 副溶血弧菌噬菌體；吸附；洗脫；蒙脫石

中圖分類號 S94 文獻標識碼

A 文章編號 0517-6611（2017）13-0107-04

Selection of Adsorption Material for Vibrio parahaemolyticus Phage and Its Adsorption and Elution Effects

HU Die1，QIU De-quan2*

（1.Zhanjiang Tengfei Industrial Co.，Ltd.，Zhanjiang，Guangdong 524072；2.College of Fisheries，Guangdong Ocean University，Zhanjiang，Guangdong 524025）

Abstract [Objective] To select suitable adsorbent for Vibrio parahaemolyticus phage and study its adsorption and elution effects.[Method] The adsorption immobilization effect and elution effect of 4 kinds of adsorbents French chalk+diatomite（3：1），active carbon，montmorillonite，and fiberglas）on V.parahaemolyticus phage were compared.[Result] Montmorillonite and fiberglas had better adsorbability to phage.The effects of montmorillonite quantity，adsorption time and pH of eluant on the phage immobilization were studied by single factor test and orthogonal test，and the results showed that the adsorption effect was the best when the quantity of montmorillonite was 0.5 g，the adsorption time was 1 h，pH of eluant was 6.[Conclusion] After V.parahaemolyticus phage was prepared to immobilized preparation，it was used in aquaculture animal and water，to achieve the purpose of biological control and improvement of aquatic environment.

Key words Vibrio parahaemolyticus phage；Adsorption；Elution；Montmorillonite

隨著海水養殖的發展，弧菌病已成為養殖對蝦的主要細菌病害之一。其中，副溶血弧菌主要感染對象是對蝦、海水魚類等，感染蟹類、貝類會引起大量死亡[1]。由該菌引起的食物中毒具有起病急、發病率高的特點[2]。治療的常用方法有抗菌藥物防治、免疫防治、生物防治等。抗菌藥物主要使用抗生素[3]，但使用抗生素存在著藥物殘留、對人體健康造成危害、對環境產生污染等危害，并伴隨著耐藥菌的大量出現。疫苗免疫接種是免疫防治的主要方式，采用口服 、浸泡、注射、噴霧等措施來提高機體的免疫力[4]，但制作復雜，周期長和成本高，不合適大范圍養殖規模。噬菌體是感染細菌和放線菌的病毒，作為生物防治的主要手段[5]，將改變單純用抗生素治療細菌性疾病的傳統觀念，開辟一個全新的治療領域，將細菌性疾病的治療推向一個新階段。固定化微生物技術是20世紀60年代由生物化工中的固定化酶技術發展起來的生物處理技術[6]。吸附法在固定化微生物技術中最為常用，利用微生物具有的可吸附到固體物質表面或其他細胞表面的能力，將微生物吸附在附加劑表面的方法，是一種非常廉價和有效的微生物固定化方法，實現簡單，操作容易，反應條件溫和，對微生物活性影響小，載體可重復使用。多孔陶粒[7]、活性炭[8]、沸石[9]、石英砂[10]、硅藻土[11]等吸附劑能將微生物吸附在表面，從而使其固定化。筆者對副溶血弧菌噬菌體進行固定化，以期制得可以作用于水體的固定化制劑。然而，由于噬菌體的個體較小，直接將噬菌體包埋成固定化小球的效果并不好。因此，筆者先將噬菌體進行吸附法固定，再將吸附過后的物質進行包埋，以制取可以作用于水體的固定化小球。

1 材料與方法

1.1 菌株 副溶血弧菌（Vivrio parahaemolyticus）菌株，廣東省水產經濟動物病原生物學及流行病學重點實驗室分離自患紅體病凡納濱對蝦，經鑒定為副溶血弧菌[12]。