藏藥小大黃降尿酸有效部位研究

李波 朱繼孝 鐘國躍

摘要 [目的]對藏藥小大黃總提物、乙酸乙酯部位和水部位進行降尿酸活性的研究，確定其降尿酸有效部位。[方法]稱取藏藥小大黃干燥的根500.0 g，用70%乙醇提取濃縮，加入乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯部位和水部位，研究小大黃總提物、乙酸乙酯部位和水部位對高尿酸血癥小鼠的血清尿酸（UA）、肝臟黃嘌呤氧化酶（XOD）、腺苷脫氨酶（ADA）、肌酐（Cre）以及血尿素氮（Bun）的影響。[結果]藏藥小大黃總提物和水部位具有一定的降尿酸和抑制XOD、ADA、Cre以及Bun活性。[結論]水部位是藏藥小大黃降尿酸有效部位，其降尿酸作用的機制之一是抑制 XOD 活性。

關鍵詞 小大黃；高尿酸血癥；降尿酸；有效部位

中圖分類號 S567.23 文獻標識碼 A 文章編號 0517-6611（2017）34-0117-03

Abstract [Objective] The research aimed to study the effect of total extract of Rheum pumilum （TER）， ethyl acetate extract， as well as water extract on the level of uric acid and define its active fraction.[Method]The root of the dried rhubarb was weighed 500.0 g， extracted with 70% ethanol， concentrated to a small amount of volume and extracted with ethyl acetate to obtain ethyl acetate and water.The level of uric acid （UA）， xanthine oxidase （XOD）， adenosine deaminase （ADA）， creatinine （Cre） and blood usea nitrogen （Bun） on TER， ethyl acetate extract and water extract were analyzed.[Result]The TER and water extract had a certain effect on reducing the level of UA， XOD， ADA， Cre and Bun.[Conclusion]Water part of Rheum pumilum was the target area for antihyperuricemia， and the effect was related to its inhibition of XOD.

Key words Rheum pumilum；Hyperuricemia；Antihypertension；Effective part

痛風屬中醫“痹癥”“痛風”“白虎歷節”的范疇，在藏醫藥中，多屬“黃水病”范疇。痛風一病的發作，臨床癥狀主要以關節紅腫疼痛為主要表現，特別以下肢關節最為明顯。關節紅腫疼痛屬藏醫的“黃水病” 范疇。藏醫理論認為，所有疾病的發生是“三大因素”（即“龍”“赤巴”“培根”）失調所致，“龍”“赤巴”“培根”的失調可導致黃水病的產生。“黃水”流著于骨，臨床上可見關節腫脹等。“黃水病”“惡性腹水” 是藏區多發疾病，也是藏醫學臨床具有治療優勢的病種之一。“曲瑪孜”類藥材為常用治療這類疾病的藏藥材。文獻記載各地藏醫所用的“曲瑪孜”類藥材的基原植物有一定差異，涉及到蓼科大黃屬多種大黃和同科蓼屬植物西伯利亞蓼根或全草，《藏藥標準》 在“曲瑪孜”條目下收載了蓼科植物小大黃（Rheum pumilum）和西伯利亞蓼（Polygonum sibiricum Laxm.），干燥全草入藥[1]。江西中醫藥大學中藥資源與民族藥研究中心研究組前期對“曲瑪孜”的基原品種進行市場調研，發現小大黃（R.pumilum）和西伯利亞蓼（P.sibiricum）是“曲瑪孜”的主流品種，目前關于西伯利亞蓼和小大黃的化學和藥理作用研究較少[2-5]，其藥效物質基礎尚不清楚。王曉云等[6]研究表明藏藥西伯利亞蓼70%乙醇提取物具有降尿酸作用。王洪玲等[7]對小大黃化學成分進行研究，發現其結構類型包括蒽醌類和二苯乙醇類化合物。基于此，該研究對藏藥小大黃總提物、乙酸乙酯部位、水部位進行抗痛風活性篩選，確定其活性部位及可能的作用機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗動物。湖南斯萊克景達實驗動物有限公司體重（20±3）g的SPF級昆明種雄性小鼠120只，試驗動物使用許可證號SCXK（湘）2011-0003，動物試驗期間室溫（22±2） ℃。

1.1.2 藥品及試劑。藏藥小大黃采自西藏昌都，經江西中醫藥大學鐘國躍研究員鑒定為Rheum pumilum。氧嗪酸鉀鹽（STBD5759V）和別嘌呤醇（081M1112V）購買于Sigma-Aldrich；尿酸測定試劑盒[YZB1JAP4561-2012（398308）]、尿素氮測定試劑盒[YZB1JAP5441-2012（332213）]和肌酐試劑盒[YZB1JAP4550-2012（252203）]購自希森美康醫用電子（上海）有限公司；腺苷脫氨酶測試盒（20151212）、黃嘌呤氧化酶測試盒（20151209）、考馬斯亮藍測試盒（20151210）購自南京建成生物工程研究所。

1.1.3 儀器。 DY89-II型電動勻漿機（寧波新芝生物科技股份有限公司）；旋轉蒸發儀（瑞士布奇公司）；電子分析天平（上海浦春計量儀器有限公司）；超低溫冰箱（中科美菱低溫科技有限責任公司）；全自動干式生化分析儀（日本富士公司）；高速冷凍離心機（美國Beckman公司）；UV-2100紫外分光光度儀（北京瑞利分析儀器公司）。

1.2 方法

1.2.1 小大黃樣品的制備。稱取小大黃干燥的根500.0 g，粉碎后加入4.0 L 70%乙醇，超聲提取2次，每次2 h，將提取液合并濃縮，用乙酸乙酯萃取，濃縮得乙酸乙酯部位和水部位，將小大黃總提物、乙酸乙酯部位和水部位加適量的0.5%羧甲基纖維素鈉，得各個部位的低、中、高劑量組（2.0、4.0、8.0 g/kg，按生藥計），放置冰箱冷藏備用。

1.2.2 小大黃各部位小鼠高尿酸血癥的影響。昆明雄性小鼠120只隨機分為正常組、模型組、別嘌呤醇組（0.01 g/kg）、小大黃總提取物低、中、高劑量組、小大黃乙酸乙酯部位中、高劑量組以及小大黃水部位低、中、高劑量組，正常組與模型組灌以生理鹽水，別嘌呤醇組灌以別嘌呤醇 0.01 g/kg，連續給藥7 d，第7天08：00加強給藥一次，12：00腹腔注射氧嗪酸鉀鹽（10 min一組），13：00灌胃，14：00取血，采用自動生化分析儀檢測血清尿酸（UA）、肝臟黃嘌呤氧化酶（XOD）、腺苷脫氨酶（ADA）、肌酐（Cre）以及血尿素氮（Bun）活性。

1.3 數據統計

運用 SPSS 18.0 軟件進行分析，用均數± 標準差（ ±S）表示。組間比較采用 t 檢驗，以P < 0.05 為差異有統計學意義。

2 結果與分析

2.1 小大黃各部位對高尿酸血癥小鼠UA水平作用

由表1可見，模型組小鼠血清尿酸水平顯著高于正常組血清尿酸水平（P<0.01）；在劑量為0.01 g/kg時，別嘌呤醇可顯著降低高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平（P<0.01）；小大黃總提物和水部位低、中、高劑量組均可降低小鼠血清尿酸水平（P<0.05，P<0.01），表明小大黃總提物和水部位具有一定的降尿酸作用。

2.2 小大黃各部位對高尿酸血癥小鼠肝臟XOD及ADA 作用

由表2可知，別嘌呤醇組0.01 g/kg、小大黃總提物和水部位中、高劑量組均可降低高尿酸血癥小鼠肝XOD 水平（P<0.05，P<0.01），但其抑制程度與其相同劑量組對血清尿酸的抑制程度并不平行。別嘌呤醇組、小大黃總提物中、高劑量組和水部位中、高劑量組對模型小鼠肝臟 ADA 活性均有一定抑制活性（P<0.05）。

2.3 小大黃各部位對高尿酸血癥小鼠Cre與Bun作用

由表3可知，別嘌呤醇組可以顯著地降低高尿酸血癥小鼠Cre水平（P<0.01），但對Bun無抑制作用；小大黃總提物、乙酸乙酯部位和水部位均可降低高尿酸血癥小鼠Cre和Bun的水平。

3 討論

痛風是嚴重威脅人類健康的代謝性疾病，現有治療痛風藥物主要有別嘌呤醇、苯溴馬隆等[8]，但由于副作用較多，患者難以長期服用和耐受[9]，遠遠不能滿足臨床需求。因此，亟需開發高效低毒、作用機制新穎、價格相對低廉的抗痛風藥物。該研究采用高尿酸血癥模型對小大黃進行降尿酸作用的研究，發現其總提物和水部位具有一定的降尿酸作用，提示小大黃的有效部位為水部位，但小大黃總提物對肝臟 XOD 活性的抑制水平與其降尿酸作用并不平行，推測其降尿酸的作用除抑制XOD活性外還可能存在其他機制。腎臟在尿酸排泄過程中起著重要作用，因此高尿酸癥常常伴隨著腎臟功能損害。血肌酐和尿素氮是檢驗腎功能的重要指標，可以反映腎小球濾過和腎小管重吸收的功能。小大黃水部位的中、高劑量（4.0、8.0 g/kg）可顯著降低高尿酸血癥小鼠肌酐和尿素氮的水平（P<0.01），表明小大黃的水部位還具有保護腎臟作用。

藏藥小大黃和西伯利亞蓼為藏藥曲瑪孜的代表性基原品種，二者都具有降尿酸的功效，那么二者的藥效物質是否相同呢？王洪玲等[10]對二者揮發油進行比較研究，發現其化學成分組成相差較大，因此二者具體藥效物質基礎還有待進一步的研究。此外，前期研究發現小大黃中含有蒽醌和二苯乙醇類化合物[5，7]，而蒽醌類（大黃酸、大黃素）[11]和二苯乙醇類（白藜蘆醇）[12]均具有一定的抗痛風作用，因此下一步將對其分離得到的化合物進行XOD活性研究，找到其有效成分，為以后藏藥小大黃的開發和利用提供一定的依據。

參考文獻

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