均勻設計法優選樂脈顆粒半仿生提取工藝研究

謝紫薇

（四川省成都市新都區中醫醫院，四川成都610500）

均勻設計法優選樂脈顆粒半仿生提取工藝研究

謝紫薇

（四川省成都市新都區中醫醫院，四川成都610500）

目的優選樂脈顆粒的半仿生提取工藝。方法以丹參素、芍藥苷、丹酚酸B及干浸膏得率數據標準化后加權和為綜合指標，采用均勻設計法優選出方藥的半仿生提取法工藝條件。結果半仿生提取法工藝條件為，3次煎煮水的pH分別為4.5，7.5，9.0，煎煮時間為2 h，1 h，1 h。結論該方法提取樂脈顆粒工藝條件合理、穩定、可行。

樂脈顆粒；半仿生提取法；提取工藝；均勻設計法

樂脈顆粒是根據傳統中醫理論研制，用于治療急、慢性心腦血管疾病的新型純中藥顆粒劑，由丹參、川芎、赤芍、紅花等7味中藥組方，具有行氣活血、化瘀通脈之功效，常用于氣滯血瘀所致的頭痛、眩暈、胸痛、心悸、心絞痛、冠狀動脈硬化性心臟病、多發性腦梗死的治療[1－8]。2015年版《中國藥典（一部）》中，僅對處方中的臣藥之一赤芍中的芍藥苷進行定量測定[9]，難以有效控制該藥的質量。半仿生提取(SBE)法是張兆旺等利用“灰思維”提出的中藥提取新思維[10]。具體方法是，通過模擬藥物經胃腸道轉運的過程而設計，達到盡可能保留原藥中有效成分的目的，符合中藥配方多種成分復合作用的特點。SBE法在提取工藝的設計中堅持“有成分論，不唯成分論，重在機體藥效學反應”的觀點，藥效物質的提取效率高，不改變中藥、方劑原有的功能與主治，生產周期短，成本低。基于此，本試驗中在前期對SBE法研究的基礎上[11－15]，采用均勻設計法，以丹酚酸B、丹參素、芍藥苷和干浸膏含量為評價指標，綜合分析評判，優選最佳提取工藝條件。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent1200型高效液相色譜儀（美國安捷倫科技有限公司），包括四元泵（G1311A）、自動進樣器（G1313A）、柱溫箱（G1316A）、VWD檢測器（G1314A）、Agilent 1200 series色譜工作站；FA2240B型電子天平（上海越平科學儀器有限公司）；SB120D型超聲波提取儀（寧波新芝生物科技股份有限公司）；KQ－200VDE型雙頻數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；pHS－3C型精密pH計(杭州奧立龍儀器有限公司)；旋轉蒸發儀（上海青浦瀘西儀器廠）；202型電熱恒溫干燥箱（北京中興偉業儀器有限公司）；GTR10－2型離心機(北京時代北利離心機有限公司)。

1.2 試藥

經攀枝花學院副教授劉姍對復方藥材（飲片）進行來源鑒定，丹參為唇形科植物丹參Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根和根莖，川芎為傘形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根莖，赤芍為毛茛科植物芍藥Paeonia lactiflora Pall.的干燥跟，紅花為菊科植物紅花Carthamus tinctorius L.的干燥花，香附為莎草科植物莎草Cyperus rotundus L.的干燥根莖，木香為菊科植物木香Aucklandia lappa Decne.的干燥根，山楂為薔薇科植物山里紅Crataegus pinnatifida Bge.var.major N.E.Br.的干燥成熟果實。丹參素對照品（批號為110855－200506，純度為98%），芍藥苷對照品（批號為110810－200506，純度為98%），丹酚酸B對照品（批號為111562－200503，純度為98%），均購自中國食品藥品檢定研究院；甲醇（色譜純，成都科龍化工試劑有限公司），水為重蒸水。

2 方法與結果

2.1 均勻設計法

根據SBE法理論，在藥材粒度、煎煮溫度、煎煮用水量、濾過、濃縮等相同條件下，確定考察的主要因素及水平，第1煎水pH(A)，第2煎水pH(B)，第3煎水pH (C)，煎煮時間D(h)見表1。選用均勻設計法U9(91×33)表安排試驗方案，見表2。

表1 U9(91×33)試驗因素與水平

表2 U9(91×33)試驗設計表

2.2 溶液制備

將丹參、川芎、赤芍、紅花、香附、木香、山楂7味藥材分別粉碎，過10～20目篩，按處方比例稱取粗粉60.95 g，共9份，混勻。常壓下加熱回流提取3次(加水量分別為藥材質量的10，8，8倍)，pH及提取時間見表2，提取液用4層紗布加100目篩分別濾過、離心，合并上清液，濃縮并定容至500m L，即得1～9號提取液。分別精密吸取上述提取液25mL，即得供試品溶液A1至A9。

分別稱取對照品適量，丹酚酸B對照品4.15 mg，丹參素對照品1.53mg，芍藥苷對照品2.25mg，精密稱定，置100m L容量瓶中，加甲醇溶解并定容，搖勻，即得丹酚酸B、丹參素、芍藥苷質量濃度分別為41.5，15.3，22.5μg／mL的混合對照品溶液。

2.3 組分含量測定

2.3.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Waters Acquity UPLC BEH C18柱（50mm× 2.1mm，1.7μm）；流動相：0.5%甲酸水溶液（A）－乙腈（B），梯度洗脫（0～12 min，97%～73%A；12～13 min，73%～5%A）；體積流量：0.4mL／min；檢測波長：230 nm；進樣量：2μL；柱溫：30℃；樣品管理器溫度：4℃。理論板數以丹酚酸B峰計算為44 512。色譜圖見圖1。

2.3.2 方法學考察

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察：依次精密量取混合對照品溶液0.20，0.50，1.00，1.50，2.00，3.00，5.00μL，分別進樣，測定峰面積。以各色譜峰面積積分值（Y）對其質量濃度（X）進行線性回歸，得回歸方程。結果見表3。

表3 線性關系考察結果

精密度試驗：取樂脈顆粒同一混合對照品溶液，按擬訂色譜條件，連續進樣6次，測定各成分峰面積積分值。結果的RSD分別為丹參素0.61%，芍藥苷0.46%，丹酚酸B 0.45%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取樂脈顆粒供試品溶液（A4），按擬訂色譜條件，在24 h內每隔4 h測定各成分峰面積積分值。結果的RSD分別為丹參素0.92%，芍藥苷0.50%，丹酚酸B 0.72%（n＝6），表明供試品溶液在24 h內穩定。

重復性試驗：取樂脈顆粒供試品溶液（A4），平行取樣5份，測定并計算各成分的量。結果的RSD分別為丹參素0.47%，芍藥苷0.68%，丹酚酸B 0.21%（n＝5），表明方法重復性良好。

回收率試驗：取樂脈顆粒供試品溶液（A4），加入適量混合對照品溶液，依法進樣測定，計算各組分回收率。結果各組分回收率丹參素98.8%，芍藥苷101.9%，丹酚酸B 99.4%，RSD分別為0.77%，0.49%，0.88%。

2.3.3 樣品含量測定

取樂脈顆粒1－9號供試液，按擬訂色譜條件進行測定，重復3次，取平均值。結果見表4。

2.4 干浸膏含量測定

精密量取2.1項下1～9號提取液10 mL，置恒重的蒸發皿中，加硅藻土3 g，攪勻，水浴蒸干，105℃烘至恒重，按公式Y＝(丹參素＋芍藥苷＋丹酚酸B)×2＋干浸膏×3，計算干浸膏得率。結果見表4。

表4 SBE提取法提取液各指標成分含量

2.5 數據處理

將表2中各試驗水平的4個因素及表4中相應試驗水平的綜合指標Y值輸入計算機，采用數據分析模塊處理，二次多項式逐步回歸，得回歸方程：Y＝590.724－25.346 5A－129.068 3C＋2.259 231A2＋7.960 54C2－0.696 895 6AB＋0.999 666 3AC－0.872 932 7AD，r＝0.999 934 5，SS＝0.210 701 7，F＝1 007.211。查F表，F0.05(7.1)＝236.8，F0.05(7.1)＜F，檢驗通過，回歸方程有意義。

再將方程進行優化處理，以Y的期望值方向大者為佳。故SBE法提取樂脈顆粒的條件為：3煎用水pH依次為4.44，7.61，9.05；3煎總計時間為3.89 h(煎煮時間依次為2.07，0.94，0.88 h)。結合生產實際，確定其SBE法工藝條件為：3煎用水pH依次為4.5，7.5，9.0；煎煮時間依次為2，1，1 h。

2.6 驗證試驗

按照優化的工藝條件，依法依次進行3次重復試驗，測定各指標含量，對含量數據進行標準化處理。結果丹參素、芍藥苷、丹酚酸B、干浸膏的含量分別為2.801 1，3.892 4，12.867 9，29.127 9 mg／g。按上述公式計算Y＝15.162 3，接近預測值。

3 討論

SBE法是以幾種有效成分、有效部位及干浸膏等為指標，以選定pH的溶劑依次分別進行連續提取的一種方法。中藥的有效成分多為有機酸或有機堿類，故采用SBE法可更充分地提取出中藥的有效成分，可體現其“有成分論，不唯成分論，重在機體藥效學反應”的中藥提取理論[16]。本試驗中，根據中藥的提取為有效成分從固相（藥材）轉移至液相（溶劑）的傳質過程，其中提取溶劑的用量對潤濕、滲透、解吸和擴散的傳質過程具有較大的影響[17]，因此在參考現有半仿生提取方法的基礎上選用提取溶劑用量為考察因素之一。

經3批驗證試驗的平均綜合評價值接近預測值，說明該工藝參數穩定可行。考慮本試驗采用高溫煎煮的提取方式，容易影響熱不穩定活性成分，如丹酚酸B的提取而降低藥效。因此，后續研究可擬將提取溫度改為近人體溫度，且在提取液中加入擬人體消化酶活性物質，使提取過程更接近于藥物在人體胃腸道的轉運吸收過程。

樂脈顆粒化學成分復雜，本試驗中選取了君藥丹參中丹參素、丹酚酸B，臣藥之一芍藥中芍藥苷作為指標成分控制其質量，雖較藥典標準有所提高，但對于該產品的全面質量控制還不夠。故后續研究有必要進一步對樂脈顆粒的主要有效成分進行多組分的同時測定，以全面提升藥品質量控制標準。

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Sem i－Bionic Extraction of Lem ai G ranu les by Uniform Design

Xie Ziwei

(Xindu Hospital of Traditional Chinese Medicine,Chengdu,Sichuan,China 610500)

Ob jective To optimize semi－bionic extraction(SBE)of Lemai Granules.M ethods The standardized and weighted sum datas of tanshinol,paeoniflorin,salvianolic acid B and dry extract were taken as the comprehensive index to optimize the SBE technical conditions of Lemai Granule by uniform design method.Results The SBE extraction condition of Lemai Granules:the pH of 3 boiling water was 4.5,7.5,9,and the boiling time was 2 h,1 h,1 h,respectively.Conclusion The optimized SBE extraction conditions for Lemai Granules are reasonable,stable and feasible.

Lemai Granules;semi－bionic extraction;extract condition;uniform design method

TQ 460.6；R284.1

A

1006－4931(2017)11－0013－04

2017－03－29)

10.3969／j.issn.1006－4931.2017.11.004

謝紫薇（1981－），女，碩士研究生，高級工程師，主要從事中藥制劑質量評價研究，（電子信箱）657064681＠qq.com。