原代乳鼠心肌細胞缺氧/復氧損傷模型的構建

杜 芳,劉 偉,劉 敏,劉 芳,王曉紅

·論 著·

原代乳鼠心肌細胞缺氧/復氧損傷模型的構建

杜 芳1,劉 偉1,劉 敏1,劉 芳1,王曉紅2

目的 構建體外培養乳鼠心肌細胞缺氧/復氧(H/R)損傷模型。方法 原代乳鼠心肌細胞培養至第5天進行干預，缺氧過程(H)將細胞置入1% O2、5% CO2、37 ℃三氣培養箱內無糖無血清依次培養1、2、3、4 h，再復氧過程(R)更換含10%胎牛血清低糖DMEM正常培養6 h。將細胞共分5組：正常對照組，H1R6組，H2R6組，H3R6組，H4R6組。觀察C組和各H/R組再復氧6 h時心肌細胞一般形態和超微結構，用CCK-8法檢測細胞增殖情況，乳酸-丙酮酸法測定乳酸脫氫酶(LDH)活性，流式細胞儀檢測細胞早期凋亡率。結果 與C組比較，各H/R組心肌細胞一般形態及超微結構損傷明顯,隨缺氧缺糖時間延長，其損傷逐漸加重；與C組比較，各H/R組細胞增殖減少，培養液LDH活性升高(P<0.05),隨缺氧時間延長，細胞增殖逐漸減少(P<0.05)，培養液LDH活性逐漸升高(P<0.05)；與C組比較，各H/R組細胞早期凋亡率明顯增加(P<0.05)，且隨缺氧時間延長，凋亡率逐漸升高(P<0.05)。結論 成功建立乳鼠心肌細胞H/R損傷模型，該模型可靠穩定，重復性好，且缺氧時間以3 h為宜。

心肌細胞；缺氧；復氧；無糖；缺血-再灌注；損傷

近年來心血管疾病發病率逐漸升高，隨著冠脈搭橋術、血管成形術、體外循環術、心臟移植術等的推廣應用，心肌缺血-再灌注損傷現象越來越受到臨床關注。因此，建立心肌細胞缺氧/復氧(H/R)損傷模型對于在離體水平下研究心肌缺血-再灌注發生的機制具有重要意義[1]。目前已知的細胞缺氧方法很多，單純性物理法和化學法制造的缺氧環境不穩定，O2濃度和缺氧時間不易控制，無法建立穩定可靠的H/R模型[2-3]，實驗重復性較差，研究結果不具說服力[3-4]。本研究擬體外原代培養乳鼠心肌細胞，采用物理性缺氧(1% O2)，同時更換無糖DMEM培養基培養的方法，模擬缺血過程，恢復糖氧供給模擬再灌注過程，通過觀察細胞一般形態和超微結構、細胞損傷酶活性以及細胞凋亡率，以期建立一種穩定可靠的體外心肌細胞缺血-再灌注損傷(MIRI)模型。……