基于SRAP標記的黃瓜霜霉菌遺傳多樣性分析

白玲玲, 劉行風, 陳政瑜, 周瑩瑩, 劉 麗, 張艷菊*, 張 奧, 楊 森

(1. 東北農業大學農學院, 哈爾濱 150030; 2. 黑龍江省哈爾濱市阿城區種子服務中心, 哈爾濱 150039)

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基于SRAP標記的黃瓜霜霉菌遺傳多樣性分析

白玲玲1, 劉行風1, 陳政瑜1, 周瑩瑩2, 劉 麗1, 張艷菊1*, 張 奧1, 楊 森1

(1. 東北農業大學農學院, 哈爾濱 150030; 2. 黑龍江省哈爾濱市阿城區種子服務中心, 哈爾濱 150039)

本研究對來自黑龍江、遼寧、河北、山東、江蘇5個省12個黃瓜主產區的77個黃瓜霜霉菌菌株,采用SRAP分子標記進行了遺傳多樣性分析。從35對SRAP引物中篩選出10對引物,共產生9 554條擴增條帶,其中9 132條表現多態性,占95.6%。基于SRAP分子標記,77個黃瓜霜霉菌菌株的遺傳距離為0.60～1.00,表明黃瓜霜霉菌具有豐富的遺傳多樣性。通過聚類分析,77個黃瓜霜霉菌菌株聚類為8個類群,并且來自相同地區的菌株大多數聚集于同一類群中,表明黃瓜霜霉菌群體的遺傳多樣性與其地理來源密切相關。

黃瓜霜霉病; 分子標記; SRAP; 群體遺傳

由藻物界卵菌門古巴假霜霉菌Pseudoperonosporacubensis(Berkeley & Curtis) Rostovzev侵染引起的霜霉病是黃瓜生產上的重要葉部病害。該病害廣泛分布于世界各地,在適宜條件下,傳播流行速度極快,一到兩周時間即可造成葉片全部枯死,對黃瓜生產威脅極大[1-2]。

目前,國內外學者利用不同的分子標記技術對黃瓜霜霉菌遺傳多樣性開展了相應的研究。Wang等[3]通過對rDNA-ITS序列進行研究認為,黃瓜霜霉菌在種內保持高度的遺傳一致性,而種間遺傳存在差異且與親緣關系有密切的關系。Sarris等[4]利用AFLP對來自捷克、克里特島、法國和荷蘭的黃瓜霜霉菌菌株進行了遺傳多樣性研究,發現霜霉菌菌株被劃分為2個獨立的類群,一個類群為捷克、法國和荷蘭的所有菌株;另一個類群為克里特島的菌株,分析表明，菌株遺傳多樣性與其地理起源、寄主品種、致病型和對殺菌劑抗性有關。Quesada-Ocampo等[5]通過對黃瓜霜霉菌的群體遺傳結構分析,構建了全球第一個黃瓜霜霉菌群體遺傳結構圖。Polat等[6]采用ISSR和SRAP分子標記對以色列、捷克和土耳其的87個黃瓜霜霉菌菌株進行分析,證實菌株間具有顯著的遺傳多樣性,采自土耳其和捷克的菌株表現出一致的遺傳背景,而以色列的菌株則明顯不同,認為可能是由于菌株遷移或有性生殖現象引起的。在中國,劉艷玲等[7]對中國12個城市的34株黃瓜霜霉菌的rDNA-ITS序列進行SNP分析表明,菌株來源與地理區域存在一定的相關性,菌株間在遺傳上存在較大的差異。張艷菊等[8]利用27個RAPD隨機引物對18株黃瓜霜霉菌進行全基因組DNA的PCR擴增,獲得RAPD標記共230個,發現各菌株之間的相似性系數較低,在基因組DNA 水平上存在差異,具有豐富的遺傳多樣性。

相關序列擴增多態性(sequence-related amplified polymorphism, SRAP)是一種基于PCR的分子標記技術[9],具有快速、可靠、高效、低成本、無需知道基因組的序列信息等優點[10],已經成功應用于遺傳多樣性分析、遺傳圖譜的構建、重要性狀的基因定位等方面的研究。Tang等[11]采用ISSR和SRAP分子標記,對中國的34株栽培木耳Auriculariaauricula的遺傳多樣性進行了分析,認為SRAP的分類更細,內容更豐富。Liu等[12]采用RAPD、ISSR和SRAP三種標記對香菇Lentinulaedodes的遺傳多樣性進行了分析,成功轉化為SCAR標記。Zhang等[13]利用ISSR和SRAP分子標記對金頂側耳Pleurotuscitrinopileatus進行了遺傳多樣性分析,并建立了其系統發育進化樹,利用SRAP分子標記將菌株分為了6個類群,表現出較高的遺傳多樣性水平。Zhang等[14]利用SRAP標記分析了豬苓Polyporusumbellatus的遺傳多樣性。Ma等[15]對中國東北的13個地區的松口蘑Tricholomamatsutake進行了遺傳多樣性鑒定,發現菌株間的遺傳距離與地理隔離具有極高的正相關性。

本文利用SRAP分子標記對采自我國5個省12個黃瓜主產區的黃瓜霜霉菌群體進行遺傳多樣性研究,了解霜霉菌遺傳多樣性和演化關系,為有效防治黃瓜霜霉病提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

2014年至2015年,在黃瓜霜霉病盛發期,從黑龍江、遼寧、山東、河北、江蘇5個省12個黃瓜主產區的溫室大棚中采集77個黃瓜霜霉病樣品(表1),用于SRAP分析。

1.2 試驗方法

1.2.1 DNA提取

黃瓜霜霉菌基因組DNA的提取采用CTAB方法[15],稍加改良。DNA的純度與濃度使用紫外分光光度計(DU600,Beckman,美國)檢測后,置于-20℃保存待用。

1.2.2 SRAP反應體系和反應程序

PCR反應總體積為20 μL,其中10×PCR Buffer (含20 mmol/L Mg2+) 2.0 μL,dNTPs(各2.5 mmol/L) 2 μL,Taq酶(5U/μL)0.3 μL,ddH2O 12.7 μL,上下游混合引物(10 μmol/L)1 μL, 模板DNA(50 ng/μL)2 μL。反應程序為：94℃預變性30 s;94℃變性1 min,35℃退火30 s,72℃擴展1 min,進行3個循環;然后94℃變性1 min,50℃退火1 min,72℃擴展1 min,進行35個循環;72℃延伸10 min;4℃保存。

1.2.3 SRAP引物篩選

7個SRAP上游引物和5個SRAP下游引物(表2)由上海生物工程有限公司合成,隨機組合成35對引物,選取3個模板DNA分別進行PCR擴增,篩選擴增條帶清晰,重復性和多態性顯著的引物,用于本研究黃瓜霜霉菌遺傳多樣性分析。

1.2.4 SRAP分析

在PCR擴增產物中加入2 μL加樣緩沖液,用8%的非變性聚丙烯酰胺凝膠檢測。凝膠大小為180 cm×120 cm×1 mm,電泳緩沖液為1×TBE,每個點樣孔加2.0 μL樣品,180V恒壓下電泳約1.0 h。電泳結束后,進行銀染。先將膠放入固定液中,輕搖7～8 min;倒掉固定液,加入滲透液,輕搖10 min左右;倒掉滲透液,蒸餾水水洗30 s;倒掉蒸餾水后,加入顯色液,輕搖至DNA條帶顯出為止;倒掉顯色液,用蒸餾水洗1次;倒掉蒸餾水,加入終止液終止反應;統計帶型并照相。

1.2.5 數據分析

在PAGE膠上同一位置,出現條帶的記為“1”,無條帶的記為“0”,生成“0”和“1”組成的原始矩陣。利用軟件NTSYS-PC(ver. 2.1)中的SIMQUAL程序計算菌株間相似系數(similarity coefficient),獲得相似系數矩陣。利用其中的SAHN程序和UPGMA方法進行聚類分析,通過Tree Plot模塊建立聚類分析樹狀圖。

表1 黃瓜霜霉菌菌株名稱及來源

Table 1 Name ofPseudoperonosporacubensisisolates and their origins

編號Number菌株名稱Isolatecode年份Year來源Origin編號Number菌株名稱Isolatecode年份Year來源Origin1Pc-hlj12014黑龍江省,哈爾濱市40Pc-hb32014河北省,滄州市2Pc-hlj22014黑龍江省,哈爾濱市41Pc-hb42014河北省,廊坊市3Pc-hlj32014黑龍江省,哈爾濱市42Pc-hb52014河北省,廊坊市4Pc-hlj42014黑龍江省,哈爾濱市43Pc-hb82015河北省,滄州市5Pc-hlj52014黑龍江省,哈爾濱市44Pc-hb92015河北省,滄州市6Pc-hlj62014黑龍江省,哈爾濱市45Pc-hb102015河北省,滄州市7Pc-hlj72014黑龍江省,哈爾濱市46Pc-hb112015河北省,滄州市8Pc-hlj82014黑龍江省,哈爾濱市47Pc-hb122015河北省,滄州市9Pc-hlj92014黑龍江省,哈爾濱市48Pc-hb132015河北省,滄州市10Pc-hlj112014黑龍江省,哈爾濱市49Pc-hb162015河北省,石家莊市11Pc-hlj122014黑龍江省,哈爾濱市50Pc-hb172015河北省,石家莊市12Pc-hlj132015黑龍江省,哈爾濱市51Pc-hb182015河北省,石家莊市13Pc-hlj142015黑龍江省,哈爾濱市52Pc-hb192015河北省,石家莊市14Pc-hlj152015黑龍江省,哈爾濱市53Pc-hb202015河北省,石家莊市15Pc-hlj212014黑龍江省,哈爾濱市54Pc-hb212015河北省,石家莊市16Pc-hlj222014黑龍江省,哈爾濱市55Pc-hb222015河北省,石家莊市17Pc-hlj232014黑龍江省,哈爾濱市56Pc-hb232015河北省,石家莊市18Pc-hlj242014黑龍江省,哈爾濱市57Pc-sd12014山東省,壽光市19Pc-hlj252014黑龍江省,哈爾濱市58Pc-sd22014山東省,壽光市20Pc-hlj272014黑龍江省,哈爾濱市59Pc-sd52015山東省,壽光市21Pc-hlj282014黑龍江省,哈爾濱市60Pc-sd62015山東省,壽光市22Pc-ln12014遼寧省,沈陽市61Pc-sd72015山東省,壽光市23Pc-ln22014遼寧省,沈陽市62Pc-sd82015山東省,壽光市24Pc-ln62015遼寧省,沈陽市63Pc-sd92015山東省,壽光市25Pc-ln72015遼寧省,沈陽市64Pc-sd102015山東省,壽光市26Pc-ln82015遼寧省,沈陽市65Pc-sd112015山東省,壽光市27Pc-ln102015遼寧省,沈陽市66Pc-sd122015山東省,壽光市28Pc-ln272015遼寧省,盤錦市67Pc-sd132015山東省,壽光市29Pc-ln282015遼寧省,盤錦市68Pc-sd142014山東省,臨沂市30Pc-ln312015遼寧省,盤錦市69Pc-sd152014山東省,臨沂市31Pc-ln332015遼寧省,凌源市70Pc-sd172014山東省,臨沂市32Pc-ln342015遼寧省,凌源市71Pc-sd192014山東省,臨沂市33Pc-ln352015遼寧省,凌源市72Pc-sd202014山東省,臨沂市34Pc-ln362015遼寧省,凌源市73Pc-sd222015山東省,泰安市35Pc-ln372015遼寧省,凌源市74Pc-sd272015山東省,泰安市36Pc-ln412014遼寧省,鞍山市75Pc-sd282015山東省,泰安市37Pc-ln422014遼寧省,鞍山市76Pc-js12014江蘇省,連云港市38Pc-hb12014河北省,滄州市77Pc-js22014江蘇省,連云港市39Pc-hb22014河北省,滄州市

2 結果與分析

2.1 黃瓜霜霉菌基因組DNA的提取

所提取的黃瓜霜霉菌基因組DNA經1%(w/v)瓊脂糖凝膠電泳檢測(圖1),顯示條帶清晰完整,無拖尾現象,DNA無降解,可滿足SRAP分子標記研究。

2.2 黃瓜霜霉菌SRAP-PCR結果

采用上、下游引物自由組合的35對引物對霜霉菌菌株進行PCR擴增,從中篩選出10對多態性好、帶型清晰的引物組合(表3)。利用這10對引物對77個黃瓜霜霉菌菌株進行SRAP分析,總共擴增出條帶9 554條,大小為100～5 000 bp不等,其中9 132條為多態性條帶,多態性比率為95.6%。引物組合Me9/Em14擴增出的條帶數最多,達1 406條;引物組合Me2/Em4擴增出的條帶數最少。每個SRAP引物對擴增出的平均條帶數為955條(表3)。

圖1 1%瓊脂糖凝膠電泳檢測部分黃瓜霜霉菌基因組DNAFig.1 Detection of genomic DNA of some Pseudoperonospora cubensis isolates based on ethidium bromide-stained 1% agarose gel

上游引物名稱Forwardprimer引物序列(5'-3')Primersequence(5'-3')下游引物名稱Reverseprimer引物序列(5'-3')Primersequence(5'-3')Me2TGAGTCCAAACCGGAGCEm4GACTGCGTACGAATTCAGMe3TGAGTCCAAACCGGTGTEm7GACTGCGTACGAATTCACMe4TGAGTCCAAACCGGAATEm9GACTGCGTACGAATTATGMe6TGAGTCCAAACCGGATGEm10GACTGCGTACGAATTCAAMe8TGAGTCCAAACCGGAGCEm14GACTGCGTACGAATTGTCMe9TGAGTCCAAACCGGAAGMe12TGAGTCCAAACCGGTAG

表3 10對引物組合對77個黃瓜霜霉菌菌株SRAP擴增結果

Table 3 SRAP-PCR amplification of 77 isolates ofPseudoperonosporacubensisusing 10 primer pairs

引物編號Primercode引物組合Primercombination總條帶數/條Totalofband多態性條帶數目/條Polymorphicband多態性比率/%PercentageofpolymorphicbandSRAP-1Me8/Em10692692100SRAP-2Me8/Em1457850086.5SRAP-3Me2/Em4569569100SRAP-4Me2/Em998190492.2SRAP-5Me4/Em1485658868.7SRAP-6Me6/Em4895895100SRAP-7Me6/Em711301130100SRAP-8Me12/Em1012211221100SRAP-9Me3/Em412271227100SRAP-10Me9/Em1414061406100

2.3 SRAP聚類分析

利用軟件NTSYS-PC(ver. 2.1)對供試的77個黃瓜霜霉菌菌株基因組DNA的SRAP-PCR擴增條帶的數據進行統計分析,獲得這些菌株間的聚類分析樹狀圖(圖2)。由圖可見,黃瓜霜霉菌群體遺傳多樣性比較豐富,遺傳分化較大,菌株間的相似系數在0.60～1.00之間,在相似系數為0.73時(圖2),所有菌株被分為8個類群,第一類群為黑龍江的所有菌株共21個,占總菌株數的27.3%;第二類群為江蘇的2個菌株(Pc-js1和Pc-js2),占總菌株數的2.6%;第三類群為遼寧的16個菌株,占總菌株數20.8%;第四類群為河北的所有菌株(19個)和山東的部分菌株(10個),共29株,占總菌株數的37.7%;第五類群為山東的2個菌株(Pc-sd1和Pc-sd5),第六類群為山東菌株Pc-sd8和Pc-sd9;第七類群為山東菌株Pc-sd19;第八類群為4個山東菌株Pc-sd2、Pc-sd13、Pc-sd12和Pc-sd17。

圖2 77株黃瓜霜霉菌菌株基于SRAP標記的聚類分析圖Fig.2 Dendrogram of 77 isolates of Pseudoperonospora cubensis based on analysis of genetic similarity of the pathogenic populations using SRAP markers

3 討論

SRAP分子標記技術是利用一對設計獨特的引物擴增基因閱讀框區域(opening read frame, ORF),上游引物特異性擴增外顯子區域,下游引物特異性擴增內含子及啟動子區域。本研究對5個省12個黃瓜主產區的77個黃瓜霜霉菌菌株的SRAP進行了研究,從分子水平上揭示出黃瓜霜霉菌群體遺傳多樣性比較豐富。聚類結果表明,來自黑龍江、遼寧、江蘇和河北的所有菌株分別聚類于同一類群內,來自山東的菌株則聚類于5個不同的類群。此研究結果一方面表明基于SRAP分析的黃瓜霜霉菌群體遺傳多樣性與其地理來源存在密切的相關性,同一地區來源的菌株歸于相同的類群;另一方面也可以看出,來自山東的菌株具有較高的遺傳多樣性。

突變和有性生殖被認為是病菌發生變異的主要原因。由于病菌發生變異,產生新的基因型,從而使菌株表現豐富的遺傳多樣性。2012年Zhang等[17]在黑龍江、吉林、遼寧、河北、山東、寧夏、陜西和青海省發現了卵孢子的存在,并證實越冬后的卵孢子翌年仍具有活性,可以作為黃瓜霜霉病的初侵染源。2013年Cohen等[18]報道來自我國山東、北京和黑龍江的菌株同時存在兩種交配型A1和A2,進一步證實在這些地區病菌在自然條件下發生有性生殖。Zhang等和Cohen等的研究均在山東省發現病菌存在有性生殖,表明進行有性生殖以及異宗配合的病菌,由于發生了遺傳物質的重組,因此比不進行有性生殖的病菌具有更大的變異性,產生具有更強適應性、更多樣化的新侵染性后代。這些新的后代往往具有相對強的侵染性和復雜的毒力結構,并逐漸取代適應性和侵染性較弱的種群,成為優勢種群,使病害發生更加嚴重。張艷菊等[19]于2015年報道,相比于黑龍江、吉林、遼寧、北京等省份采集的菌株，來自山東省的黃瓜霜霉菌菌株對殺菌劑嘧菌酯的抗性水平最高,其原因可能是因為長期大量使用嘧菌酯使菌株產生了抗藥性,這也從另一方面解釋了來自山東的病菌具有較高遺傳多樣性的原因。

迄今為止,教科書及多數學者對黃瓜霜霉病的初侵染源還未形成定論,認為由于北方高寒地區冬季沒有黃瓜種植,推測這一地區的初侵染源可能是由發病較早的地區隨季風吹來的孢子囊釋放游動孢子侵染所致。但是,Zhang等[17]的研究結果表明黑龍江、吉林、遼寧、河北、山東、寧夏、陜西和青海省等地黃瓜霜霉菌均發現存在卵孢子,并可作為黃瓜霜霉病發生的初侵染源。Cohen等[18]的報道也有力地支持了Zhang等[17]的結論。本研究通過對黃瓜霜霉菌遺傳多樣性的研究,發現同一地區菌株相似性較高,而不同地區菌株間相似性較低,從分子水平證實黃瓜霜霉菌與地理來源存在相關性。

[1] Lebeda A, Cohen Y. Cucurbit downy mildew (Pseudoperonosporacubensis)-biology, ecology, epidemiology, host-pathogen interaction and control [J]. European Journal Plant Pathology, 2011, 129(2): 157-192.

[2] 劉艷玲, 張艷菊, 蔡寧, 等. 黃瓜霜霉病病原與抗病性研究進展[J]. 東北農業大學學報, 2009, 40(4): 127-131.

[3] Wang Na, Ma Yajun, Yang Cuiyun, et al. rDNA-ITS sequence analysis of pathogens of cucumber downy mildew and cucumber powdery mildew [J]. Frontiers of Agriculture in China, 2008, 2(3): 317-320.

[4] Sarris P, Abdelhalim M, Kitner M, et al. Molecular polymorphisms between populations ofPseudoperonosporacubensisfrom Greece and the Czech Republic and the phytopathological and phylogenetic implications [J]. Plant Pathology, 2009, 58(5): 933-943.

[5] Quesada-Ocampo L M, Granke L L, Olsen J, et al. The genetic structure ofPseudoperonosporacubensispopulations [J]. Plant Disease, 2012, 96(10): 1459-1470.

[6] Polat L, Baysal ?, Mercati F, et al. Characterization ofPseudoperonosporacubensisisolates from Europe and Asia using ISSR and SRAP molecular markers [J]. European Journal of Plant Pathology, 2014, 139(3): 641-653.

[7] 劉艷玲, 張艷菊, 秦智偉, 等. 黃瓜霜霉菌卵孢子形成及rDNA-ITS序列分析[C]∥彭友良,朱有勇.中國植物病理學會2009年學術年會論文集. 北京：中國農業科學技術出版社,2009.

[8] 張艷菊, 張宏宇, 秦智偉, 等. 黃瓜霜霉菌毒性及分子多態性分析[J]. 東北農業大學學報, 2010(2): 25-30.

[9] Li G, Quiros C F. Sequence-related amplified polymorphism (SRAP), a new marker system based on a simple PCR reaction: its application to mapping and gene tagging inBrassica[J]. Theoretical and Applied Genetics, 2001, 103: 455-461.

[10]陳碧云, 伍曉明, 陸光遠, 等. 甘藍型油菜花瓣缺失基因的圖譜定位[J]. 遺傳, 2006, 28(6): 707-712.

[11]Tang Lihua, Xiao Yang, Li Li, et al. Analysis of genetic diversity among ChineseAuriculariaauricularcultivars using combined ISSR and SRAP markers [J]. Current Microbiology, 2010, 61(2): 132-140.

[12]Liu Jingyu, Ying Zenghe, Liu Fang, et al. Evaluation of the use of SCAR markers for screening genetic diversity ofLentinulaedodesstrains [J]. Current Microbiology,2012,64(4): 317-325.

[13]Zhang Qiusheng, Xu Binglian, Liu Linde, et al. Analysis of genetic diversity among ChinesePleurotuscitrinopileatusSinger cultivars using two molecular marker systems (ISSRs and SRAPs) and morphological traits [J]. World Journal of Microbiology and Biotechnology, 2012, 28(5): 2237-2248.

[14]Zhang Y, Kang Y, Qin Y, et al. Genetic diversity of endangeredPolyporusumbellatusfrom China assessed using a sequence-related amplified polymorphism technique [J]. Genetics and Molecular Research, 2012, 11(4): 4121-4129.

[15]Ma Dalong, Yang Guoting, Mu Liqiang, et al. Application of SRAP in the genetic diversity ofTricholomamatsutakein northeastern China [J]. African Journal of Biotechnology, 2010, 9(38): 6244-6250.

[16]王關林, 方宏筠. 植物基因工程[M]. 北京: 科學出版社, 2009.

[17]Zhang Yanju, Pu Zijing, Qin Zhiwei, et al. A study on the overwintering of cucumber downy mildew oospores in China [J]. Journal of Phytopathology, 2012, 160(9): 469-474．

[18]Cohen Y, Rubin A E, Liu X L, et al. First report on the occurrence of A2 mating type of the cucurbit downy mildew agentPseudoperonosporacubensisin China [J]. Plant Disease, 2013, 97(4): 559.

[19]張艷菊, 王瑩, 黨悅嘉, 等．黃瓜霜霉菌對嘧菌酯抗藥性的研究[J]. 東北農業大學學報, 2015(4): 23-28.

(責任編輯：楊明麗)

會 訊

第二十四屆國際果樹病毒及嫁接傳播病害研究理事會(International Council for the Study of Virus and other Graft Transmissible Diseases of Fruit Crops，ICVF)于2017年6月4-9日在希臘瑟薩洛尼基召開。來自世界各地的近100位學者參加了會議。中國大陸有兩人參加了此次會議，分別是華中農業大學的王國平教授以及中國農業科學院植物保護研究所的李世訪研究員。該次大會包括40個口頭報告以及37個墻報，內容涉及植物病毒、類病毒和植原體等方面。其中6位學者作了特邀大會報告，題目分別為：

1、希臘果樹的栽培生產現狀及展望

2、希臘果樹病毒研究概況介紹

3、侵染果樹的類病毒：從接種到高通量測序(NGS)

4、NGS技術在植物病毒研究中的應用以及對果樹無病毒種苗調運產生的影響

5、果樹植原體病害

6、通過抑制寄主植物DICER的表達打破植物的防御系統

此次大會的一個顯著特點就是NGS技術在果樹病毒及果樹病毒病害研究中的廣泛應用。近乎一半的報告不論是口頭報告還是墻報中都提到了NGS技術，說明該技術在研究果樹病毒上的應用空間還很大。會議期間參觀了希臘瑟薩洛尼基附近的果園，考察了李痘病毒和桃潛隱花葉類病毒的發生分布以及危害狀況。會后對ICVF的學術委員會進行了改選，新增委員5人。經過投票確定，第25屆ICVF會議將于2020年在荷蘭召開。

(李世訪,中國農業科學院植物保護研究所 北京 100193)

Genetic diversity ofPseudoperonosporacubensisbased on SRAP markers

Bai Lingling1, Liu Xingfeng1, Chen Zhengyu1, Zhou Yingying2, Liu Li1, Zhang Yanju1, Zhang Ao1, Yang Sen1

(1.CollegeofAgriculture,NortheastAgriculturalUniversity,Harbin150030,China; 2.SeedServiceCenterofAchengDistrictinHarbin,HeilongjiangProvince,Harbin150039,China)

The genetic diversity ofPseudoperonosporacubensisisolates sampled from diseased cucumber plants in 12 major cucumber-producing regions of 5 provinces, including Heilongjiang, Liaoning, Hebei, Shandong, and Jiangsu in China, was analyzed by sequence-related amplified polymorphism (SRAP). Ten out of 35 SRAP primers used in the present study produced genomic DNA polymorphism in 77P.cubensisisolates, amplifying a total of 9 554 bands, 9 132 of which were polymorphic, accounting for 95.6%. The genetic distance of the 77P.cubensisisolates ranged from 0.60 to 1.00 based on analyses of the SRAP markers. The results showed that theP.cubensispopulations presented a high genetic diversity and 77 isolates could be classified into 8 groups. Most of the isolates from the same area were clustered in the same group by using the UPGMA method, suggesting that the genetic diversity ofP.cubensisisolates was related to their geographical origins.

cucumber downy mildew; molecular marker; SRAP; population genetics

2017-02-19

2017-04-05

國家自然科學基金 (31171792);黑龍江省自然科學基金重點項目(ZD2016003)

S 436.421.11

A

10.3969/j.issn.0529-1542.2017.04.027

* 通信作者 E-mail: zhangyanju1968@163.com