畜禽產(chǎn)品中腸出血性大腸桿菌O157：H7的檢測

黃梅清 蔡羲 鄭敏 吳南洋＊

（1.福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所福州350013；2.福建省畜禽疫病防治工程技術(shù)研究中心福州350013）

畜禽產(chǎn)品中腸出血性大腸桿菌O157：H7的檢測

黃梅清1，2蔡羲1，2鄭敏1，2吳南洋1，2＊

（1.福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所福州350013；2.福建省畜禽疫病防治工程技術(shù)研究中心福州350013）

為了解大腸桿菌O157：H7在畜禽產(chǎn)品中的帶菌情況，采集2個屠宰場、福州市部分超市及農(nóng)貿(mào)市場上的畜禽產(chǎn)品（豬肉、禽肉、蛋、內(nèi)臟）631份。采集的樣品經(jīng)改良EC新生霉素增菌肉湯增菌后，增菌液用快速檢測試紙條和酶聯(lián)免疫反應(yīng)測試盒進(jìn)行檢測；菌液涂抹于山梨醇麥康凱瓊脂平板和大腸桿菌O157顯色培養(yǎng)基平板，選取可疑菌落用乳膠凝集試劑盒進(jìn)行檢測，結(jié)果均未檢出大腸桿菌O157:H7。

大腸桿菌O157：H7動物產(chǎn)品檢測分析

大腸桿菌O157：H7是腸出血性大腸桿菌（Enterohem-orrhagic Escherichia coli，EHEHC）的一個主要菌型，是一種新型腸道致病菌[1]。大腸桿菌O157：H7是目前世界公認(rèn)的引起食源性疾病的重要致病菌和人獸共患病病原微生物，主要通過食物及飲食、肉及肉制品傳播。由于O157：H7大腸桿菌寄生在牛、豬、雞等動物腸道內(nèi)，因此，隨糞便排出體外后引起周圍環(huán)境及食物的污染。為了調(diào)查福州和漳州地區(qū)部分屠宰場、超市及農(nóng)貿(mào)市場上畜禽產(chǎn)品（豬肉、禽肉、蛋、內(nèi)臟）O157：H7的污染情況，共采集631份樣品并進(jìn)行檢測，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 菌株大腸桿菌O157標(biāo)準(zhǔn)菌（菌種編號：NCTC12900），6株大腸桿菌菌株保存于本實驗室。

1.2 試劑大腸桿菌O157：H7酶聯(lián)免疫反應(yīng)測試盒、快速檢測試紙條購自美國REAGEN，大腸桿菌O157：H7乳膠凝集試劑盒購自英國Microgen。改良EC新生霉素增菌肉湯、山梨醇麥康凱瓊脂平板、大腸桿菌O157顯色培養(yǎng)基平板均購自廣東環(huán)凱微生物科技有限公司。

1.3 儀器上海精宏隔水式恒溫培養(yǎng)箱（型號GNP-9080），上海一恒恒溫培養(yǎng)搖床（型號THZ-300）。

1.4 樣品采集從屠宰場、超市、農(nóng)貿(mào)市場等地方采集631份樣品，包括383份豬肉及豬內(nèi)臟樣品、128份鴨肉及鴨內(nèi)臟樣品、120份蛋樣品。采樣地點及數(shù)量如下：從福州永輝超市、農(nóng)貿(mào)市場采集樣品270份（120份豬肉樣、30份鴨肉樣、120個蛋樣）；從福州生豬屠宰場采集樣品106份（豬胴體體表棉拭子70份、內(nèi)臟表面棉拭子16份、肉樣20份）；從漳州生豬屠宰場（漳州祥泰食品有限公司）采集樣品157份（豬胴體體表棉拭子85份、肉樣72份）；從漳州昌盛食品有限公司采集肉鴨體表及內(nèi)臟棉拭子98份。

1.5 樣品的處理無菌操作取樣品25 g加入225 mL改良EC新生霉素增菌肉湯中（采集的體表棉拭子直接放入改良EC新生霉素增菌肉湯中進(jìn)行增菌），37℃培養(yǎng)20 h。取增菌后的肉湯劃線于山梨醇麥康凱瓊脂平板和大腸桿菌O157顯色培養(yǎng)基平板。

1.6 檢測方法將訂購的試劑盒對目前分離保存的6株大腸桿菌及O157：H7標(biāo)準(zhǔn)菌株按照試劑盒的說明書進(jìn)行檢測。

2 結(jié)果與分析

2.1 檢測方法將訂購的試劑盒對實驗室分離保存的6株大腸桿菌及O157：H7標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行檢測，用乳膠凝集試劑盒對可疑菌落進(jìn)行檢測，用快速檢測試紙條和酶聯(lián)免疫反應(yīng)測試盒對臨床肉、蛋樣進(jìn)行檢測。各檢測試劑盒的檢測特點與檢測結(jié)果見表1。由表1可見，本次調(diào)查選用的檢測方法與試劑是可靠的。

2.2 樣品的檢測采集的631份樣品經(jīng)改良EC新生霉素增菌肉湯增菌后，增菌液用快速檢測試紙條進(jìn)行檢測，同時菌液涂抹于山梨醇麥康凱瓊脂平板和大腸桿菌O157顯色培養(yǎng)基，選取可疑菌落用乳膠凝集試劑盒進(jìn)行檢測，結(jié)果均未檢出大腸桿菌O157:H7。

2.3 結(jié)果分析大腸桿菌O157：H7是重要的食源性病原微生物，感染后會嚴(yán)重危害人體健康，甚至危及生命。畜禽產(chǎn)品在屠宰加工、儲存過程中都不同程度受到污染，在廣東東莞畜禽肉制品（凍肉）中大腸桿菌O157：H7檢出率，雞肉為25.93%、豬肉為11.76%、鴨肉為30.95%、羊肉為15.38%、牛肉為12.5%，采自屠宰場的1 868份豬肝中，陽性檢出率達(dá)23.61%[2]。青海省部分地區(qū)市售的352份羊肉、464份牛肉中各檢出O157：H7陽性1份[3]，江蘇省建湖地區(qū)50份肉制品中檢出1份陽性[4]，還有許多其他地區(qū)檢出陽性的報道。但是，也有陽性檢出率為0的報道，2005年廣東地區(qū)從各地屠宰場和肉菜市場采集的樣品中未檢測出大腸桿菌O157：H7[5]，可見大腸桿菌O157：H7檢出與否與地區(qū)無關(guān)、與季節(jié)無關(guān)、與年份無關(guān)，主要與動物產(chǎn)品在屠宰、運輸、儲存過程中是否污染病原菌有關(guān)。本次試驗未從采集的樣本中檢出陽性，表明福州地區(qū)屠宰場、超市、農(nóng)貿(mào)市場及漳州地區(qū)屠宰場的衛(wèi)生環(huán)境、屠宰運輸過程較規(guī)范，動物產(chǎn)品并未污染大腸桿菌O157：H7。但是，由于該病原的高致病性，仍要加強(qiáng)畜禽產(chǎn)品加工、運輸、銷售過程的衛(wèi)生監(jiān)管以及加強(qiáng)對宿主動物糞便的無害化處理監(jiān)管，防止帶菌動物糞便污染以及動物產(chǎn)品與其他食物之間的交叉污染，減少由此引起的食源性疾病暴發(fā)。

[1]Riley L W,Remis R S,Helgerson S D,et al.Hemorrhagic colitis associated with a rare Escherichia coli serotype.[J]. New England Journal of Medicine,1983,308(12):681-685.

[2]洪偉彬,李永福,張險朋,等.廣東東莞畜禽肉制品大腸桿菌O157:H7和沙門菌監(jiān)測結(jié)果分析[J].中國獸醫(yī)雜志,2013, 49(9):69-71.

[3]王曉紅,應(yīng)蘭,李增魁.牛羊肉中腸出血性大腸桿菌O157∶H7的檢測[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2012,40(32):15719-15721.

[4]朱根忠,吳芹.江蘇省建湖地區(qū)腸出血性大腸桿菌O157: H7監(jiān)測分析[J].徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2009,29(6):394-395.

[5]朱文冠,薛素強(qiáng),胥楚雄,等.廣東地區(qū)大腸桿菌O157∶H7的分離與鑒定[J].中國人獸共患病學(xué)報,2005,21(2):147-149.

Detection of Escherchia coli O157:H7 from animal products

Huang Meiqing1,2Zheng Min1,2Cai Xi1,2Wu Nanyang1,2*
（1.Institnte of Animal Husbandry and Veterinary Medicine,Fujian Academy of Agricultural Sciences,Fuzhou 350013; 2.Fujian Animal Diseases Control Technology Development Center,Fuzhou 350013）

To detect the Escherchia coli O157:H7 from animal products,six hundred and thirty-one animal products were collected from slaughterhouse,supermarket and farmers market in Fuzhou city.The collected samples were cultured in modified EC neonatal broth,at 37℃for 20 hours,and the enriched cultures were cultivated on Sorbitol Maconkey Agar Plate and Escherichia coli O157 chromogenic medium plate.The cultures were detected by rapid test strip and ELISA kits.Escherichia coli O157:H7 was not detected from those animal products.

Escherchia coli O157:H7 Animal products Detection Analysis

表1 大腸桿菌檢測試劑盒的檢測結(jié)果

A

1003-4331（2017）04-0019-02

福建省重大研發(fā)平臺子課題（2014N2003-7）資助。

黃梅清(1980-)，女，漢族，福建福州人。助理研究員，碩士，從事臨床獸醫(yī)學(xué)研究。

＊通信作者：吳南洋。E-mail：wunanyang@vip.sina.com。