基于化學表征和生物效價檢測的大黃配方顆粒質量評價研究

譚鵬　張海珠　張定堃　伍珊娜　牛明　王伽伯　肖小河

[摘要]該文嘗試將多指標成分同時定量分析和生物效價分析方法聯合使用的模式應用于中藥配方顆粒的質量評價，并以大黃配方顆粒為模式藥進行了示范性研究。采用超高效液相色譜法同時測定大黃配方顆粒中蘆薈大黃素8OβD葡萄糖苷等10個蒽醌類化學成分的含量；在復方地芬諾酯片致小鼠便秘模型上，測定不同批次大黃配方顆粒致瀉生物效價；在體外抗大鼠血小板聚集模型基礎上，測定不同批次大黃配方顆粒的活血生物效價；采用SPSS統計軟件對測定的10個蒽醌類化學成分與致瀉、活血生物效價之間的相關性進行統計學分析。多指標化學含量測定結果顯示10個批次間大黃配方顆粒的化學表征差異較大，與此同時，致瀉、活血生物效價均存在一定的差異性；相關性分析結果顯示大黃配方顆粒的致瀉生物效價強弱和其含有的結合型蒽醌糖苷類成分的含量有顯著相關性（P<001），活血生物效價的強弱和其含有的游離型蒽醌成分的含量有顯著相關性（P<001）。綜上，采用多組分化學表征和生物效價檢測聯用的模式可以客觀量化、更全面的反映不同批次大黃配方顆粒的整體質量差異。

[關鍵詞]大黃配方顆粒； 質量評價； 生物效價； 多組分化學表征； 相關性分析

[Abstract]This study attempts to evaluate the quality of Chinese formula granules by combined use of multicomponent simultaneous quantitative analysis and bioassay The rhubarb dispensing granules were used as the model drug for demonstrative study The ultrahigh performance liquid chromatography （UPLC） method was adopted for simultaneously quantitative determination of the 10 anthraquinone derivatives （such as aloe emodin8OβDglucoside） in rhubarb dispensing granules； purgative biopotency of different batches of rhubarb dispensing granules was determined based on compound diphenoxylate tabletsinduced mouse constipation model； blood activating biopotency of different batches of rhubarb dispensing granules was determined based on in vitro rat antiplatelet aggregation model； SPSS 220 statistical software was used for correlation analysis between 10 anthraquinone derivatives and purgative biopotency， blood activating biopotency The results of multicomponents simultaneous quantitative analysisshowed that there was a great difference in chemical characterizationand certain differences inpurgative biopotency and blood activating biopotency among 10 batches of rhubarb dispensing granules The correlation analysis showed that the intensity of purgative biopotency was significantly correlated with the content of conjugated anthraquinone glycosides （P<001）， and the intensity of blood activating biopotency was significantly correlated with the content of free anthraquinone （P<001） In summary， the combined use of multicomponent simultaneous quantitative analysis and bioassay can achieve objective quantification and more comprehensive reflection on overall quality difference among different batches of rhubarb dispensing granules

[Key words]rhubarb dispensing granules； quality evaluation； biopotency； multicomponent simultaneous quantitative analysis； correlation analysis

中藥配方顆粒是按照傳統中藥湯劑煎煮的方式，采用現代制藥技術將單味中藥飲片經提取、濃縮、干燥等工藝制成的單味中藥產品，具有不需煎煮、服用方便等優點[1]。但由于存在生產工藝不統一、質量標準與臨床療效脫節等問題[23]，導致中藥配方顆粒的質量良莠不齊，無法保障臨床療效，所以國家目前對中藥配方顆粒僅實行試點生產，究其主要原因是缺少一些可全面有效地評控中藥配方顆粒的質量的評價方法[45]。現有文獻顯示[67]，化學指紋圖譜法是目前中藥配方顆粒的主要評控方法，但是越來越多的藥學研究者意識到僅僅通過指標性成分含量測定或化學指紋圖譜方法無法全面表征其整體質量，也無法關聯其臨床療效。

近年來，生物活性評價方法已逐漸受到國內外學者的關注，尤其是2015年FDA發布的《植物藥研發行業指南》對植物藥及制劑的質量評控明確提出[8]：在只靠化學檢驗不足以確保質量和療效一致性的情況下，應在植物藥原料藥和/或藥品放行質量標準和穩定性方案中納入生物檢定，并以反映藥物已知或預期作用機制的生物檢定為首選。肖小河等指出[910]，生物活性檢測方法聯合多組分化學表征將是中藥及中藥相關產品質量評控的重要發展方向。

根據2015年版《中國藥典》，大黃配方顆粒的原藥材有3個基原：蓼科植物掌葉大黃Rheum palmatum L、唐古特大黃R tanguticum Maximex Balf或藥用大黃R officinale Baill的干燥根和根莖[11]，具有瀉下通便、活血化瘀、利濕退黃等多種功效。作為典型的多基原、多功效中藥，如何全面、有效地評價大黃配方顆粒在不同功效用途中的品質優劣，將關乎其臨床療效的有效性和穩定性。在課題組前期研究基礎上[1214]，本研究嘗試將多組分化學表征和生物效價檢測聯用模式示范性應用于大黃配方顆粒的質量評價，以期為中藥配方顆粒的質量評價提供一種參考研究模式和分析方法。

1材料

11儀器

Waters Acquity超高效液相色譜儀（Waters，USA），配備自動進樣器，光電二極管陣列檢測器，Empower 2色譜工作站；XS205電子天平（Mettler Toldeo，Switzerland），AL204電子天平（Mettler Toldeo，Switzerland），超聲儀（南京新辰生物科技有限公司，500 W，40 KHz），MilliQ超純水制備系統（Millipore，USA）；Aggram血小板聚集分析儀（Helena，USA）；配備鐳射光學系統，四通道，鍍硅的硼硅玻璃比色管（767 mm×60 mm）；臺式低速大容量離心機（L550，湖南湘儀離心機儀器有限公司），27 mL一次性真空采血管（含有0109 mol·L-1枸櫞酸鈉，美國BD公司）；采血針（批號150809，天津哈娜好醫材有限公司）。

12動物

ICR雄性小鼠，SPF級，體重19～22 g；SD雄性大鼠，SPF級，體重240～260 g，動物許可證號：SCXK（軍）20120004，由中國人民解放軍軍事醫學科學院實驗動物中心提供。

13試藥

蘆薈大黃素8OβD葡萄糖苷（純度9861%），大黃酸8OβD葡萄糖苷（純度9835%），大黃酚8OβD葡萄糖苷（純度9842%），大黃素8OβD葡萄糖苷（純度9845%），大黃素甲醚8OβD葡萄糖苷（純度9841%），蘆薈大黃素（純度9849%），大黃酸（純度9908%），大黃素（純度9911%），大黃酚（純度9987%），大黃素甲醚（純度9920%），番瀉苷A（純度9901%），均由成都普菲德生物科技有限公司提供。色譜級甲醇、色譜級磷酸（85%，Thermo Fisher Scientific，USA），ACS級Dimethyl sulfoxide （DMSO，AMRESCO）。苯巴比妥鈉（Sigma公司），腺苷二磷酸（ADP，購買于美國Helena Lab，批號215551189）。復方地芬諾酯片（批號1406001，常州康普藥業有限公司），10批次大黃配方顆粒由北京康仁堂提供，具體信息見表1。

2方法與結果

21大黃配方顆粒中10個蒽醌類化學成分含量測定[12]

211色譜條件

Waters BEH C18色譜柱 （21 mm×100 mm，17 μm），以甲醇（A）和01%磷酸水溶液（B）的混合溶液為流動相，梯度洗脫（000～500 min，39%～42% A；501～700 min，42%～51% A；701～1200 min，51%～56% A；1201～1500 min，56%～70% A；1501～1700 min，70%～77% A；1701～2100 min，77%～78% A；2101～2500 min，78%～88% A）；體積流量為020 mL·min-1，檢測波

長410 nm，進樣量2 μL，柱溫30 ℃，柱平衡時間 5

min，理論塔板數以大黃素峰計算不得低于7 000。

212對照品溶液的制備

精密稱取蘆薈大黃素8OβD葡萄糖苷等10個對照品適量，置于50 mL棕色量瓶中，先用40 mL DMSO溶解，再用色譜級甲醇稀釋至刻度，配制成濃度為700～3500 mg·L-1的混合對照品溶液，4 ℃儲存備用。

213供試品溶液的制備

準確稱取大黃配方顆粒細粉（過4號篩）050 g，置于50 mL棕色量瓶中，精密加入甲醇30 mL，稱定質量，超聲處理60 min，再稱定質量，用甲醇補足失重，搖勻，用022 μm微孔濾膜過濾，取續濾液作為供試品溶液。

214方法學驗證

按照2015年版《中國藥典》四部關于藥品質量標準分析方法驗證指導原則和國際藥品技術要求協調組織的指導方針（International Conference on Harmonization of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Huaman Use，ICH Q2B）進行方法學考察[1516]。

2141線性關系考察精密吸取上述混合對照品溶液02，04，08，10，20，40 μL注入超高效液相色譜儀進行測定，記錄色譜峰面積。以峰面積為縱坐標（y），進樣量（μg）為橫坐標（x），繪制標準曲線。結果表明10個化學成分在一定濃度范圍內的線性關系較好，結果見表2。

表2線性關系和靈敏度分析

Table 2Linearity and sensitivity of the UPLC analysis

化學成分線性方程R2線性范圍/mg·L-1檢測限/mg·L-1定量限/mg·L-1

蘆薈大黃素8OβD葡萄糖苷y=53×106x-24 0650999 2400～8000050200

大黃酸8OβD葡萄糖苷y=54×106x-30 7720999 1480～12000060240

大黃酚8OβD葡萄糖苷y=49×106x-2 9840999 3672～8400084336

大黃素8OβD葡萄糖苷y=48×106x-5 6930999 4600～4000100300

大黃素甲醚8OβD葡萄糖苷y=55×106x-4 0190999 1400～4000080200

蘆薈大黃素y=99×106x-9 9730999 6400～4000080200

大黃酸y=89×106x-9 2440999 5400～4000080200

大黃素y=75×106x-5 7120999 4600～7200100300

大黃酚y=10×107x+4091000600～6400103300

大黃素甲醚y=92×106x-1 4371000540～3000090270

2142檢測限和定量限考察檢測限和定量限用來評估方法的靈敏性，本實驗中采用直觀法。用上述已知濃度的對照品溶液不斷稀釋，直至試驗出能被可靠地檢測出和定量檢測的最低濃度，結果見表2。

2143精密度考察取上述混合對照品溶液，連續進樣6次，進樣量為2 μL，記錄目標化合物的色譜峰面積，計算RSD。結果顯示蘆薈大黃素8OβD葡萄糖苷，大黃酸8OβD葡萄糖苷等10個化學成分峰面積的RSD為14%，16%，19%，19%，30%，21%，12%，24%，10%，15%，表明儀器的精密度良好。

2144穩定性考察取同一供試品溶液，分別于制備后0，2，4，8，16，24 h時進樣測定，記錄各目標化合物的峰面積，計算RSD。結果顯示，蘆薈大黃素8OβD葡萄糖苷，大黃酸8OβD葡萄糖苷等10個化學成分在24 h內色譜峰面積的RSD分別為20%，24%，19%，25%，19%，14%，20%，25%，24%，17%，表明在24 h內供試品溶液的穩定性良好。

2145重復性考察取同一批次（批號14009802）的大黃配方顆粒粉末，共稱取6份，每份050 g，精密稱定，按照上述方法制備供試品溶液。精確吸取6份供試品溶液各20 μL注入超高效液相色譜儀進行測定，平行測定2次，記錄目標化合物色譜峰面積，計算含量。結果顯示6份供試品中10個化學成分質量分數平均值為109，025，326，025，036，022，019，013，049，011 mg·g-1，表明方法的重復性良好。

2146準確度考察取同一批次（批號14009802）已知含量的大黃配方顆粒樣品粉末025 g，置于50 mL棕色量瓶中，分別加入相等質量的對照品物質（以各化合物的對照品單標溶液形式加入），最后加入一定量甲醇溶液至總量為25 mL，按照上述法制備供試品溶液，進樣測定，計算含量和回收率，結果見表3。結果表明10個化學成分的回收率在9613%～1049%；表明方法的準確性較好。

215供試品溶液的分析

精密吸取對照品溶液和供試品溶液20 μL注入超高效液相色譜儀分析，記錄色譜峰面積，按照外標法計算各目標化學成分的含量。典型UPLCUV見圖1，測定結果見表4。

22大黃配方顆粒致瀉效價的測定[1213]

221參照物溶液的制備

準確稱取番瀉苷A對照品130 mg，準確加入溫度為37 ℃的01%NaHCO3熱水52 mL溶解備用，保持藥液溫度37 ℃，給藥時搖勻。

222供試品溶液的制備

準確稱取各批次大黃配方顆粒10 g，用50 mL 37 ℃熱水溶解，超聲處理5 min，按照劑間比08進行稀釋，得到4個不同給藥濃度。

223供試品致瀉效價的測定

取復方地芬諾酯片60片置于研缽研為細粉，加37 ℃熱水90 mL溶解，超聲20 min，備用，給藥時搖勻。ICR雄性小鼠130只，體重（20±3）g，分為13組，每組10只，實驗前12 h禁食不禁水。其中第1組作為正常組，不給與任何造模和給藥；第2組作為模型對照組，僅僅給與復方地酚諾酯片造成便秘模型；第3組作為陽性對照組，給與復方地酚諾酯片混懸液造成便秘模型，再給與番瀉苷A水溶液灌胃；其余10組分別對應10批次配方顆粒水溶液給藥。先用復方地酚諾酯片混懸液（劑量60 mg·kg-1）灌胃進行造模，造模1 h后灌胃給藥，給藥量04 mL/只，給藥后禁食不禁水，8 h后收集糞便質量，置于干燥潔凈EP管內，準確稱定質量。根據簡化概率

單位法原理計算致瀉效價[17]。將給藥劑量和糞便質量輸入生物效價量反應計算軟件，計算致瀉效價和效價的可信限率（FL），結果見表5。

測定結果顯示，10個批次大黃配方顆粒的致瀉生物效價在371～1301 U·g-1，后者是前者的35倍，表明不同批次大黃配方顆粒致瀉生物效價差異較大。

23大黃配方顆粒活血效價的測定[18]

231乏血小板血漿（PPP）和富血小板血漿（PRP）的制備

取體重為240～260 g的SD雄性大鼠，先用苯巴比妥鈉（60 mg·kg-1）麻醉，再用真空采血管從腹主動脈取血。采血管立即置于離心機內，在轉速為800 r·min-1、溫度為20 ℃模式下離心15 min，小心吸取上清液置于潔凈的5 mL EP管內；剩余血液重復操作1次，小心吸取上清液置于前述EP管內，得到富血小板血漿（plateletrich plasma，PRP）；剩余血液在轉速為3 000 r·min-1、溫度為20 ℃模式下離心30 min，小心吸取上清液置于另一支5 mL EP管內，得到乏血小板血漿（plateletpoor plasma，PPP），備用。PRP和PPP需要保持在18～25 ℃，并盡量不要擾動。

232誘導劑的制備

每瓶含有200 μmol·L-1的腺苷二磷酸（ADP），準確加入去離子水1 mL溶解，輕輕搖勻，作為誘導劑儲備液。吸取適量儲備液用生理鹽水按照1∶3的比例稀釋儲備液，作為誘導劑工作液。復溶后的儲備液保存在2～6 ℃可穩定一周或在-80 ℃下可保存3個月。工作液應在制備后2 h內使用。

233對照品溶液和供試品溶液的制備

準確稱取編號為yp8的大黃配方顆粒10 g，分別用50 mL 37 ℃熱水溶解，超聲處理5 min，作為對照品溶液備用。同法制備其他批次的溶液，作為供試品溶液備用。

234血小板聚集率的測定

大黃配方顆粒對照品溶液和供試品溶液按劑間比08用空白PPP進行稀釋，得到4個不同給藥濃度。按照（4，4）法分別測定對照品組和供試品組的血小板最大聚集率（Max），每組平行測定2次。具體操作如下：血小板聚集儀提前開機預熱30 min，待預熱完成后，先用PPP樣本400 μL進行透光度調零，每根玻璃比色管分別加入PRP 125 μL和含藥PPP 100 μL混勻（空白組加入不含藥的PPP），加入一粒攪拌子，把比色管放入預熱通道內37 ℃環境下預熱3 min，再將玻璃比色管放入經過調零后的檢測通道內，準確加入ADP誘導劑工作液25 μL，迅速按下檢測按鈕進行檢測，記錄聚集波形和最大聚集率。檢測時限應在血液采集后2 h內完成，檢測室溫環境應保持在18～25 ℃。

235大黃配方顆粒活血效價的計算

由于有拮抗血小板聚集的藥物存在，相對于空白組而言，含藥組血小板最大聚集率會降低，由此可以計算得到測試藥物對血小板聚集過程的最大抑制程度，即抑制率。抑制率=（空白組最大聚集率-給藥組最大聚集率）/空白組最大聚集率×100%。

根據簡化概率單位法原理計算活血效價[17]。由于目前尚無用于活血生物效價檢測的大黃配方顆粒對照品，實驗中對大黃配方顆粒標準參照物（yp1）進行原始效價賦值，定義其效價為1萬 U·g-1，計算不同批次大黃配方顆粒的活血效價和效價的可信限率（FL），結果見表6。

測定結果顯示，10個批次大黃配方顆粒的活血生物效價在6 329～13 928 U·g-1，后者是前者的22倍，表明不同批次間大黃配方顆粒的活血生物效價存在一定的差異。

24相關性分析

為了探究大黃配方顆粒中10個蒽醌類化學成分與實際測得瀉下、活血效價強弱的相關性，采用統計學軟件SPSS 220對測得的10個化學成分含量和大黃配方顆粒的實際測得瀉下、活血效價作相關性分析，以相關系數（r）作為評價指標，相關性分析結果見圖2。

相關性分析結果顯示，大黃配方顆粒中的結合型蒽醌糖苷的含量多寡與瀉下生物效價的高低具有較好的相關性（r=083），而總游離蒽醌的含量與瀉下生物效價的高低幾乎沒有相關性（r=007）；與之相反，大黃配方顆粒中游離蒽醌的含量多寡與活血生物效價的高低具有較好的相關性（r=078），而總蒽醌糖苷的含量與活血生物效價高低的相關性較小（r=018）。結果表明了結合型蒽醌糖苷類成分對大黃配方顆粒的瀉下通便作用貢獻較大，而游離蒽醌類成分對活血化瘀作用的貢獻較大，這與課題組前期研究結果相符合[18]。相關性分析結果提示，利用多指標化學表征方法評控大黃配方顆粒的質量，應選擇與功效相關（以臨床功效為導向）的藥效物質作為評價指標。

3討論

現代研究表明，活血化瘀中藥主要通過抑制血栓形成、改善血流動力學、血液流變學等過程發揮其活血化瘀作用[19]。不可否認，拮抗血小板聚集只是藥物發揮活血化瘀功效的一部分作用機制，不能完全代表活血化瘀的整體作用，但血小板聚集功能是線性擬合曲線；95%置信區間；預測區間。

影響機體止血/活血過程的重要因素之一，而血小板聚集性是反應血小板功能的重要指標。比濁法作為一種體外評價血小板聚集功能的檢測方法，已經廣泛應用于臨床檢驗，被認可為檢測血小板聚集作用的“金標準”[2021]。利用體外抗血小板聚集已經應用于川芎、赤芍、三七、舒絡膠囊等中藥及中藥復方制劑的活血化瘀作用的評價[2223]。本實驗在體外抗血小板聚集的基礎上，進一步引入質反應計算軟件，定量計算拮抗活血效價值，可更加直觀的表征不同藥物拮抗血小板聚集作用的強弱。

由于大黃配方顆粒的原材料來源各異，對其進行質量一致性評價對于臨床用藥的療效一致性和有效性具有重要意義。在本實驗中，從多組分化學定量測定結果來看，化學表征存在一定的差異性；從生物效價測定結果來看，不同批次間大黃配方顆粒的致瀉生物效價和活血生物效價也存在較大的差異。這就表明了，化學定量測定僅僅只是對大黃配方顆粒在某一特定紫外吸收波段下的化學表征，并不能全面表征其質量差異，而致瀉生物效價和活血生物效價從2個不同的功效作用強度反映其質量差異，是對大黃配方顆粒質量直接關聯臨床功效的整體表征。從相關性分析結果來看，致瀉生物效價的強弱和大黃配方顆粒中的結合型蒽醌糖苷的含量多寡具有顯著相關性（P<001），而活血生物效價的強弱和游離型蒽醌的含量多寡有顯著相關性（P<001），這表明了在現階段以化學成分定量測定為主要評控手段和模式下，盡可能多的定量測定配方顆粒中關聯功效的活性成分對其質量一致性控制具有重要意義。

中藥配方顆粒由于已經經過提取、濃縮、制粒、干燥等加工工藝，其本身與原藥材已有很大差異，傳統的顯微鑒別、性狀鑒別等質量評控方法已經無法對其進行質量評控。化學指紋圖譜分析方法在一定程度上可以表征質量的波動，但這也僅僅是在某一紫外吸收波段下的化學表征，具有模糊性和不確定性的劣勢，也不能直接、客觀量化的表征其整體質量。生物活性評價方法既能關聯臨床功效，又具有實際可操作性，在中藥配方顆粒的質量評控中具有獨特的優勢。2015年12月24日國家食品藥品監督管理總局發布的《中藥配方顆粒管理辦法（征求意見稿）》第十四條中明確指出“中藥配方顆粒藥品標準的制定，加強專屬性鑒別和多成份、整體質量控制，充分反映現階段藥品質量控制的先進水平和質量源于設計的理念”。本文首次嘗試將多指標化學成分定量測定和關聯臨床功效的生物效價檢測聯用模式應用于中藥配方顆粒的質量評價，并以大黃配方顆粒為模式藥進行了示范性研究，對其他中藥配方顆粒的質量評控具有一定的參考價值。

[參考文獻]

[1]孫源源，施萍借助中藥配方顆粒推進中藥國際化的對策研究[J] 中草藥，2013，44 （8）：929

[2]李松林，宋景政，徐宏喜 中藥配方顆粒研究淺析[J] 中草藥，2009，40 （增刊）：1

[3]鹿巖，李妮，宋毅斐 2010—2013 年357 種中藥配方顆粒的臨床使用分析[J] 現代藥物與臨床，2014，29 （9）：1050

[4]劉暉暉，詹若挺，陳蔚文，等 中藥配方顆拉發展現狀與臨床推廣應用面臨的主要問題分析[J] 世界科學技術——中醫藥現代化，2011，13 （1）：9

[5]涂瑤生，畢曉黎，羅文匯 中藥配方顆拉的質量控制研究[J]. 世界科學技術——中醫藥現代化，2011，13 （1）：41

[6]張彥東，盧瑩瑩，鄭曉英，等 羅漢果配方顆粒質量標準研究[J] 中藥新藥與臨床藥理，2015，26 （5）：695

[7]鄭江萍，梁俊，黃良永甘草配方顆粒HPLC指紋圖譜研究[J] 中國藥師，2015，18 （12）：2053

[8]US Department of Health and Human Services， Food and Drug Administration Center for Drug Evaluation and Research （CDER）.Botanical drug development guidance for industry （draft guidance） [S] 2015

[9]肖小河 中醫藥轉化醫學中的關鍵科學問題：中藥質量生物評價與控制[J] 中藥與臨床，2010，1 （4）：1

[10]肖小河，王伽伯，鄢丹 生物評價在中藥質量標準化中的研究與應用[J] 世界科學技術——中醫藥現代化，2014，16 （3）：514

[11]中國藥典一部 [S] 2015：23

[12]王伽伯 中藥品質生物評價與控制的示例（大黃）研究[D] 成都：成都中醫藥大學，2008

[13]譚鵬 基于效應成分指數的中藥質量評價模式和方法研究：以大黃為例[D] 成都：成都中醫藥大學，2016

[14]Tan P， Xiao X H， Wang J B， et al A practical method for the simultaneous quantitative determination of twelve anthraquinone derivatives in rhubarb by a singlemarkerbased on ultraperformance liquidchromatography and chemometric analysis[J] Anal Method， 2016， 8：3927

[15]中國藥典四部[S]2015：374

[16]ICH Topic Q2B Validation of analytical procedures： methodology （CPMP/ICH/281/95） Step4 Consensus guideline[S] Geneva： the European agency for the evaluation of medicinal products， 1996

[17]周海鈞藥品生物檢定[M] 北京：人民衛生出版社，2005：127

[18]張海珠，譚鵬，肖小河，等基于活血生物效價和化學指紋圖譜的大黃品質評價研究[J] 藥學學報，2017，52 （3）： 436

[19]劉杰文，齊淑玲血瘀證實質和活血化瘀藥物作用機理的研究[J] 中醫藥通報，2003，2 （1）：2

[20]Gurbel P A， Becker R C， Mann K G， et al Platelet function monitoring in patients with coronary artery disease[J] J Am Coll Cardiol，2007， 50（19）：1822

[21]Harrison P Platelet function analysis[J] Blood Rev， 2005， 19（2）： 111

[22]項耀祖，商洪才，張伯禮 抗血小板中藥研究進展[J] 中草藥，2008，39（2）：290

[23]王鳳琴，陳岑，夏之寧，等 血小板在活血化瘀中藥研究中的應用[J] 中國中藥雜志，2014，39（16）：290

[責任編輯孔晶晶]