固相萃取-高效液相色譜法測定綠茶中微量鄰苯二甲酸酯

閆子龍

(保定市第三中學，河北 保定 071000)

固相萃取-高效液相色譜法測定綠茶中微量鄰苯二甲酸酯

閆子龍

(保定市第三中學，河北 保定 071000)

以C18-H為固相萃取柱，V(甲醇)：V(水)=77:23為流動相，建立了綠茶中鄰苯二甲酸二甲酯、鄰苯二甲酸二乙酯和鄰苯二甲酸二丁酯等3種鄰苯二甲酸酯的固相萃取-高效液相色譜分離方法。在最佳條件下3種鄰苯二甲酸酯在0.02～100 μg/mL范圍內線性良好，相關系數r≥0.9992。 平均加標回收率為85.79%～95.31%，相對標準偏差(RSD)≤ 6.0%。該方法可有效消除綠茶中的基體干擾，定量準確可靠，適用于飲料中微量塑化劑的測定和監控。

固相萃取；鄰苯二甲酸酯；綠茶；高效液相色譜法

鄰苯二甲酸酯(PAEs)，俗稱“塑化劑”，廣泛存在于塑料制品以及人們的生活、生產中。因鄰苯二甲酸酯易使人體生殖系統紊亂, 且具有潛在的致癌性[1]，因此被很多國家列為環境中重點控制監測的污染物之一。近年來，隨著生活水平的提高和人們對健康的日益關切，食品中塑化劑的監控和存在水平也備受消費者關注[2]，因此，對食品中塑化劑的高靈敏度檢測技術的需求越來越迫切。

目前，檢測鄰苯二甲酸酯的方法雖然已有高效液相色譜法[3]，氣質聯用法[4]，液質聯用法[5]等。但由于樣品中鄰苯二甲酸酯的含量常常處于微量級甚至是痕量級，且樣品本身基體復雜，干擾組分多，使得樣品前處理技術成為分析測定鄰苯二甲酸酯的關鍵環節。固相萃取技術是當前樣品前處理技術的主流技術[6]，其常用的吸附劑有C18-H、C60，磁性納米粒子等。但進一步發展新型吸附劑，提高吸附劑的凈化效果和應用范圍依然是長期以來研究的熱點之一。

本文以C18-H為吸附劑，探討了固相萃取-高效液相色譜法分離測定綠茶中鄰苯二甲酸二甲酯、鄰苯二甲酸二乙酯和鄰苯二甲酸二丁酯的固相萃取條件和測定方法，以期為飲料中塑化劑的檢測和有效監控提供技術支撐。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

島津LC-20A 高效液相色譜儀, USE-12C 固相萃取儀(北京優晟科技有限公司)； KQ-3200B 型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；DZF-6050 真空干燥箱(上海申賢恒溫設備廠)。C18-H固相萃取柱(500mg/mL，北京飛美斯科技有限公司)。

鄰苯二甲酸二甲酯(DMP, 純度99.5%)、鄰苯二甲酸二乙酯(DEP，純度,99%)、鄰苯二甲酸二丁酯(DBP, 純度99.5%)標準對照品(國家標準物質中心)，使用前配成所需濃度的標準溶液。甲醇(色譜純，天津市大茂化學試劑廠)，水為高純水。其它試劑均為分析純。

1.2 色譜條件

色譜柱：Kromasil C18色譜柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm；北京分析儀器廠)；流動相：V(甲醇)：V(水)=77:23，流速：1.0 mL/min；檢測波長：225 nm；進樣量:20 μL；柱溫：30 ℃。

1.3 樣品前處理

樣品來源：綠茶飲料購自當地超市。

取一C18-H固相萃取柱依次用2.0 mL甲苯，5.0 mL甲醇，10 mL超純水活化，然后準確移取2.00 mL綠茶樣品上樣，用1.5 mL水淋洗，再用2.0 mL乙腈洗脫。收集洗脫液于30 ℃真空干燥后，用0.50 mL流動相溶解，取20 μL進行色譜分析。

2 結果與討論

2.1 固相萃取條件的優化

2.1.1 淋洗溶液的選擇

淋洗溶液是影響固相萃取效率的一個重要因素，理想的淋洗溶液要具有合適的淋洗強度，既能夠有效除去基體雜質，又要盡可能不損失待測物。實驗分別考察了V(丙酮): V(水)=1:1，V(甲醇): V(水)=1:9，水，V(丙酮): V(水)=1:9，V(乙腈: V(水)=1:9等淋洗溶液對3種PAEs在C18-H柱上回收率的影響。由結果(圖1)可以看出以水和V(丙酮): V(水)=1:9為淋洗溶液可獲得較好的回收率?？紤]到有機溶劑對環境有污染，實驗選擇水做淋洗溶液。同時，實驗進一步考察了不同體積(0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 mL)的水對3種PAEs回收率的影響。結果表明，當水的體積大于1.5 mL時，3種PAEs的回收率會有所下降，綜合考慮凈化效果和回收率，實驗選擇1.5 mL水為淋洗溶液。

圖1 不同淋洗溶液對PAEs回收率的影響

圖2 不同洗脫劑對PAEs回收率的影響

2.1.2 洗脫劑的選擇

洗脫劑的種類和體積也是影響回收率的一個關鍵因素。實驗系統考察了乙腈、丙酮、V(甲醇)：V(水)=77:23、V(乙腈): V(水)=9:1，甲醇、二氯甲烷、環己烷、甲苯等洗脫劑對3種PAEs回收率的影響。實驗結果(圖2)表明，以乙腈為洗脫劑可以得到較好的回收率。進一步洗脫劑的體積(1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 mL)考察顯示，當乙腈的體積小于2.0 mL時，隨著乙腈體積逐漸的增加，回收率逐漸增加，但當乙腈體積增加至2.0 mL時，繼續增大乙腈體積，3種PAEs的回收率基本保持不變。綜合考慮回收率、萃取效果及乙腈的毒性，實驗選擇2.0 mL乙腈為洗脫劑。

2.1.3 樣品酸度和上樣體積

樣品酸度對固相萃取效率的影響是不可忽略的。實驗考察了樣品酸度在pH值4～9范圍內對3種PAEs的回收率的影響，結果表明(圖3)，當樣品酸度在pH為7時可獲得較好的回收率。同時，實驗進一步考察了不同體積的6.0 μg/mL 三種PAEs溶液在C18-H柱上回收率的情況，以此衡量固相萃取柱對樣品承載量的大小。由結果(圖3)可以看出，隨著樣品體積的增加三種PAEs的回收率逐漸下降，當樣品體積大于2.0 mL時，樣品嚴重損失，回收率顯著下降。綜合考慮回收率和實際樣品中待測物的濃度水平，實驗選擇樣品的上樣體積為2.0 mL。

pH值

圖4 三種PAEs色譜分離圖

2.2 方法特性與樣品分析

在選定的色譜和固相萃取條件下，3種鄰苯二甲酸酯(DMP、DEP、DBP)可達到完全分離(圖4)，且在0.02～100 μg/mL范圍內線性良好，相關系數r≥0.9992。DMP、DEP、DBP三種塑化劑的檢出限分別為0.030，0.035，0.051 μg/mL。實際樣品分析結果表明，某品牌綠茶中DMP的含量水平為0. 061 μg/mL，3種鄰苯二甲酸酯在三個加標水平下(0.2，1.0，10 μg/mL)的平均加標回收率為85.79%～95.31%，相對標準偏差(RSD)≤ 6.0%。

[1]李 蕾，宋乃寧，李海山,等. 鄰苯二甲酸脂類毒理學效應及其機制研究進展[J].中國藥理學與毒理學雜志，2014, 28(3): 467-474.

[2]Yang J, Li Y, Wang Y, et al. Recent advances in analysis of phthalate esters in foods[J]. Trends in Analytical Chemistry, 2015, 72: 10-26.

[3]林興桃，王小逸，夏定國，等. 固相萃取-高效液相色譜法測定 人體尿液中鄰苯二甲酸酯及其代謝物[J].分析化學，2011, 39(6): 877-881.

[4]Du L, Ma L, Qiao Y, et al. Determination of phthalate ester in teas and infusions by gas chromatography- mass spectrometry[J].Food Chemistry, 2016, 197: 1200-1206.

[5]湛社霞，匡耀求，李秀英，等. SPE-UPLC-MS/MS 測定環境水體中呋喃丹、莠去津、甲萘威及6種鄰二甲酸酯類[J].分析測試學報，2015, 34(8): 874-879.

[6]Fan H, Deng Z, Zhong H, et al. Development of new solid phase extraction techniques in the last ten years[J].Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences, 2013, 22 (4), 293-302.

(本文文獻格式：閆子龍.固相萃取-高效液相色譜法測定綠茶中微量鄰苯二甲酸酯[J].山東化工，2017，46(04)：73-74,77.)

Determination of Trace of Phathalate Eaters in Green Tea Using Solid Phase Extraction - High Performance Liquid Chromatography

YanZilong

(No.3 High School of Baoding, Baoding 071000, China)

Three types of phathalate eaters (Dimethyl phthalate, Diethyl phthalate and Dibutyl Phthalate) in green tea were extracted by solid phase extraction-high performance liquid chromatography method using C18-H column as the extraction column and methanol-water (77:23,V;V) as mobile phase. Under the optimized conditions, the linearity of the three kinds of phathalate eaters was ranged from 0.02 to 100 μg/mL with r≥0.9992. The recoveries at three spiked levels were ranged from 85.79% to 95.31% with RSD less than 6.0%. The proposed method can efficiently eliminate the matrix interferences with accurate results, and it can be applied for analysis of trace phathalate eaters in beverage samples.

solid phase extraction; phathalate eaters; green tea; high performance liquid chromatography

2017-01-10

閆子龍(2001—)，河北保定人， 現從事化學檢驗方面研究。

TS272.7;O657.72

A

1008-021X(2017)04-0073-02