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PP333對庫爾勒香梨抗寒性的影響研究

2017-09-06 06:29:25周偉權楊文莉楊花花趙世榮齊延巧李超海董勝利廖康
新疆農業科學 2017年7期

周偉權,楊文莉,楊花花,趙世榮,齊延巧,李超海,董勝利,廖康

(1.新疆農業大學特色果樹研究中心,烏魯木齊 830052;2.新疆農業科學院輪臺果樹資源圃,新疆輪臺 841600)

PP333對庫爾勒香梨抗寒性的影響研究

周偉權1,楊文莉1,楊花花1,趙世榮1,齊延巧1,李超海2,董勝利2,廖康1

(1.新疆農業大學特色果樹研究中心,烏魯木齊 830052;2.新疆農業科學院輪臺果樹資源圃,新疆輪臺 841600)

【目的】研究不同濃度的多效唑對庫爾勒香梨抗寒性的影響,為庫爾勒香梨栽培提供理論基礎。【方法】在新梢快速生長期(4月30日),對庫爾勒香梨新梢噴施不同濃度的PP333,在休眠期,選取一年生枝條為試材,并進行人工低溫處理。測定枝條中各抗寒生理指標,并擬合Logistic曲線方程,計算低溫半致死溫度(LT50),分析多效唑對枝條抗寒性的影響。【結果】與CK相比,噴施1 500 mg/L的多效唑可以有效減緩枝條中相對電導率和丙二醛的含量,減緩低溫脅迫對植物細胞膜的破壞;同時促進枝條中游離脯氨酸含量、可溶性蛋白含量、可溶性糖含量SOD活性和提高恢復生長萌芽率。通過Logistic拐點確定半致死溫度(LT50),1 500 mg/L多效唑處理的低溫半致死溫度為-28.80℃,而噴清水處理(對照 CK)的低溫半致死溫度為-25.21℃。【結論】噴施1 500 mg/L的PP333可有效減緩低溫對枝條的傷害,提高庫爾勒香梨枝條的抗寒性。

多效唑;庫爾勒香梨;枝條;抗寒性

0 引 言

【研究意義】庫爾勒香梨因其肉質酥脆多汁,味道獨特,是當地農民增收的支柱性產業之一。但庫爾勒香梨的缺點也較明顯,庫爾勒香梨樹勢生長較旺,樹冠上部的枝條易徒長,造成樹體養分過度的消耗,影響花芽的形成及發育,同時明顯降低庫爾勒香梨枝條的抗寒性。凍害已成為庫爾勒香梨健康發展的第一大障礙,20世紀90年代以來,共發生了4次大范圍的凍害,基本是3~4年一遇[1-3],凍害對香梨生產的破壞巨大,不僅花芽凍死而大量減產,還能造成枝干凍死,甚至整株凍死或毀園。研究庫爾勒香梨的抗寒性,對庫爾勒香梨栽培中解決凍害問題有現實意義。【前人研究進展】多效唑(PP333)又稱氯丁唑,在果樹上使用較多,多效唑是一類赤霉素抑制劑,它能直接或間接抑制樹枝內源生長,能夠使樹體矮化、枝條變短,提高通風透光,提高果實產量,改善品質,同時提高了果樹的抗寒性[4-6]。PP333在植物上提高抗寒性方面使用較多,許多研究者通過使用PP333提高植物的抗寒能力以減少凍害取得了大量成果。張美勇[7]、馬翠蘭[8]、劉靜雅[9]等分別在核桃、柚、紫穗槐上進行了有關研究,結果表明,多效唑均顯著提高了植株的抗寒性。【本研究切入點】針對提高庫爾勒香梨抗寒性的研究有很多,肖坤[10]、何香[11]、王一靜[12]等分別對庫爾勒香梨噴施或注射Ca2+、磷鉀肥、氮肥和硼肥和外源脫落酸來提高庫爾勒香梨的抗寒性。但PP333在庫爾勒香梨抗寒性方面的研究未見報道。研究不同濃度的多效唑對庫爾勒香梨抗寒性的影響。【擬解決的關鍵問題】試驗在新梢快速生長期對新梢噴施不同濃度的PP333,休眠期采集一年生枝條,采用人工低溫脅迫處理后測定枝條的抗寒相關生理指標,研究PP333對庫爾勒香梨抗寒性的影響,為提高庫爾勒香梨栽培提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材 料

試驗地位于新疆輪臺縣輪臺果樹資源圃,地處新疆巴音郭楞州輪臺縣城西2 km處。供試庫爾勒香梨樣株樹齡均為30 a,株行距為3 m×4 m,樹體健康,樹勢中庸,采用常規管理。試驗所用PP333為15%可濕性粉劑,由四川國光農化有限公司生產。

1.2 方 法

1.2.1 試驗設計

選取樹勢相近的單株,試驗于2016年4月30日,開花后25 d(新梢快速生長期)開始。對新梢噴施不同濃度的PP333,濃度分別為500、1 000、1 500、2 000和2 500 mg/L,對照(CK)為噴施清水處理。噴施時間為無風的傍晚,以葉面正反兩面全部濕潤且有液珠滴下為宜,每隔2 h噴施一次,共噴施3次。在休眠期2017年1月2日取樣,選取生長發育狀態比較一致的一年生枝條,用凡士林涂抹在剪口處,帶回實驗室測定相關指標。

1.2.2 低溫處理

用去離子水將枝條沖洗干凈后擦干,剪成10 cm左右小段,然后把枝條平均分成8份,用紗布包住試材,放入冷凍冰箱低溫處理。溫度設置為-15、-18、-21、-24、-27、-30和-33℃八個低溫梯度,以-12℃為對照(取樣時試驗地溫度)。以0℃為起點,3℃/h的速率降溫,到達設定溫度后保持10 h,取出后臨時置于4℃冷藏冰箱中,隨后取出,一部分用于測定相對電導率,剪取剩余部分保存于液氮中用于測定其它相關生理指標。每個梯度均3個重復。圖1

圖1 庫爾勒香梨枝條處理溫度梯度

1.2.3 測定指標

1.2.3.1 相對電導率與半致死溫度測定

測定時,稱樣品0.5 g放入試管中,加入10 mL蒸餾水,于室內靜置4 h,用DDS-11C型電導儀測得的電導值作為煮沸前電導值(S1)。然后將樣品煮沸10 min,靜置2 h,測得的電導值作為煮沸 后的電導值(S2)。用以下公式求出相對電導率:

相對電導率/%=(煮沸前的電導值/煮沸后的電導值)×100%。

對相對電導率以Logistic方程Y=K/(1+ae-bx)用擬合的Logistic方程的拐點溫度表示組織的半致死溫度LT50。式中:Y表示電導率,x表示處理溫度,K、a、b為常數,e為自然對數。

1.2.3.2 游離脯氨酸、可溶性糖、丙二醛、可溶性蛋白及SOD活性的測定

游離脯氨酸含量用酸性茚三酮法測定;可溶性糖含量用蒽酮比色法測定;丙二醛含量用硫代巴比妥酸(TBA)顯色法測定;可溶性蛋白質含量的測定采用考馬斯亮藍G-250染色法;SOD酶活性用氮蘭四唑(NBT)顯色法測定[13]。

1.2.4 恢復生長法

恢復生長法鑒定在低溫處理后立即進行,每個處理剪取10段枝條,以蛭石為基質在室溫(20℃左右)下扦插培養,一個月后統計花芽和葉芽的萌芽率。

萌芽率%=萌芽數/調查芽眼數×100%。

1.3 數據處理

采用Excel 2016及SPSS19.0軟件進行圖表繪制和統計分析。

2 結果與分析

2.1 PP333處理對庫爾勒香梨枝條相對電導率變化的影響

研究表明,在-12~-24℃,各處理的相對電導率隨溫度的降低緩慢遞增;從-24℃開始,各處理的相對電導率出現了急劇升高,在-27℃之后,各處理的相對電導率變化平緩。CK、500和2 500 mg/L處理的相對電導率普遍高于其它處理,1 500和2 000 mg/L PP333處理在各個溫度處理下均顯著低于其它處理。在-12~-33℃的降溫過程中,各處理的相對電導率增幅明顯不同,1 500 mg/L處理增幅最小,為66.08%,CK和500 mg/L增幅較大,為85.82%和85.84%,1 000、2 000和2 500 mg/L PP333處理增幅居中,分別為70.49%、68.96%和74.06%。圖2

圖2 低溫處理下庫爾勒香梨休眠枝條相對電導率變化

根據枝條在不同低溫處理下的相對電導率求得Logistic方程、半致死溫度和相關系數(r)。不同PP333處理的半致死溫度(LT50)在-25.21℃與-28.80℃,1 500 mg/L PP333處理的半致死溫度最低,為-28.80℃。從Logistic方程擬合統計結果來看,各處理的相關系數r均在0.95以上,呈極顯著水平差異。表1

表1 不同PP333處理相對電導率Logistic方程和LT50

注:表中**表示α=0.01水平差異顯著

Note:**represent the significant difference at α=0.01

2.2 PP333處理對庫爾勒香梨枝條游離脯氨酸含量變化的影響

研究表明,枝條內游離脯氨酸的含量隨著溫度的降低呈現“先上升后下降”的變化趨勢。在-12~-27℃,游離脯氨酸含量呈逐漸增加的趨勢,各處理的增加幅度均有差異,1 500和2 000 mg/L PP333處理增幅較大,分別為122.55%和122.89%。從-27℃以后,枝條內游離脯氨酸含量呈緩慢下降的變化趨勢。在-24~-33℃,1 500和2 000 mg/L處理的游離脯氨酸含量明顯高于其他處理。圖3

2.3 PP333處理對庫爾勒香梨枝條丙二醛含量變化的影響

研究表明,在-12~-27℃,各處理MDA含量隨著溫度的降低逐漸增加,且增加幅度均不相同,其中,CK增幅最大,為52.51%,1 500 mg/L PP333處理增幅最小,為27.97%。各處理MDA含量在-27℃之后趨于平緩。圖4

圖4 低溫處理下庫爾勒香梨休眠枝條MDA含量變化

2.4 PP333處理對庫爾勒香梨枝條可溶性蛋白含量變化的影響

研究表明,枝條中可溶性蛋白的含量隨著溫度的降低呈逐漸上升的變化趨勢,在-12~-27℃時,可溶性蛋白含量有明顯的上升,在-27℃之后,可溶性蛋白含量上升較為緩慢。1 500和2 000 mg/L PP333處理后,枝條中可溶性蛋白含量明顯高于CK。圖5

圖5 低溫處理下庫爾勒香梨休眠枝條可溶性蛋白含量變化

2.5 PP333處理對庫爾勒香梨枝條可溶性糖含量變化的影響

研究表明,在-12~-24℃,各處理的可溶性糖含量隨溫度的降低緩慢增加;從-24℃開始,各處理的可溶性糖含量出現了急劇升高,在-27℃之后,各處理的可溶性糖含量變化平緩或降低。1 500和2 000 mg/L PP333處理可溶性糖含量在各個溫度處理下均明顯高于CK。圖6

圖6 低溫處理下庫爾勒香梨休眠枝條可溶性糖含量變化

2.6 PP333處理對庫爾勒香梨枝條SOD活性的影響

研究表明,在-12~-24℃,各處理SOD活性隨溫度的降低緩慢升高;在24℃時,各處理SOD活性達到峰值,在-24℃之后,各處理SOD活性迅速下降,溫度為-33℃時酶活性降至最低。1 500和2 000 mg/L處理SOD活性一直處于較高的水平。圖7

圖7 低溫處理下庫爾勒香梨休眠枝條SOD活性變化

2.7 PP333處理對庫爾勒香梨枝條萌芽率的影響

隨著處理溫度的降低,各處理的萌芽率呈逐漸降低的趨勢。當處理溫度為-27℃時,相比其它處理,1 000和1 500 mg/L PP333處理的萌芽率較高,分別為33.33%和30.00%,500 mg/L處理的萌芽率最低,為11.11%。當溫度繼續下降至-30℃時,CK和500 mg/L處理的花芽和葉芽萌發率均為0,而1 500 mg/L處理的花芽和葉芽萌發率最高,分別為11.11%和25.00%。溫度繼續下降至-33℃時,各處理的花芽萌發率均為0,而1 500、2 000和2 500 mg/L處理有少量葉芽萌發,其中1 500 mg/L處理的葉芽萌發率最高,為14.29%。葉芽的抗寒性高于花芽的抗寒性。表2

3 討 論

低溫脅迫后植物細胞膜的結構遭受破壞,且破壞程度隨脅迫溫度的降低而增大。細胞內電解質外滲率的大小能夠反映細胞膜結構的被破壞程度,比較相同脅迫水平下電解質的外滲率,是間接評價植物應對低溫脅迫能力的一種有效途徑[14]。電解質滲出率和通過Logistic方程求得的半致死溫度是鑒定植物抗寒性強弱的常用方法,研究中已被廣泛應用[15]。研究發現,隨著脅迫溫度的降低,1 500 mg/L PP333處理后,相對電導率相對于CK有所降低,且其相對電導率增幅也最低,說明它可以減緩低溫脅迫對植物細胞膜的破壞,同時1 500 mg/L PP333處理后的半致死溫度為-28.8℃,說明它可以提高庫爾勒香梨枝條的抗寒性。

游離脯氨酸的含量反映了植物抗寒性的強弱,抗寒性較強的植物體內脯氨酸含量比抗寒性弱的植物體積累較多;同時游離脯氨酸還作為滲透調節物質、活性氧的清除劑以及能源物質。游離脯氨酸在植物遭受低溫脅迫時,能增強植物的保水能力,從而提高植物的抗寒性[16]。根據實驗結果可知,隨著脅迫溫度的降低,游離脯氨酸的含量發生階段性的增加,說明游離脯氨酸的大量積累,在一定程度上緩解了植物體的脫水,有效地維持了細胞膜結構的完整性和細胞內環境的穩定性。研究發現,當用1 500和2 000 mg/L的PP333處理后,枝條中游離脯氨酸含量增幅較大,說明這兩個濃度多效唑可以有效地促進枝條內游離脯氨酸的積累,有利于提高庫爾勒香梨枝條的抗寒性。

植物在處于逆境條件下時,細胞內自由基產生與清除的平衡遭到破壞,自由基的增加使膜系統首先受傷害,造成膜內離子外滲和膜脂過氧化作用,而膜脂過氧化的中間產物丙二醛,能使生物膜受到更嚴重的損害[17]。研究發現,隨著脅迫溫度的降低,丙二醛的含量持續增加,1 500 mg/L PP333處理后,枝條丙二醛含量明顯低于CK,說明該濃度多效唑處理后能減緩低溫脅迫對庫爾勒香梨細胞膜的損傷。

可溶性蛋白質的親水性強,可增加細胞保水力,并可調節基因表達;同時,植物在寒冷馴化期間,還合成了新蛋白質參與抗寒性的發育過程[7]。在脅迫溫度下,枝條中可溶性蛋白含量持續增加。當用1 500和2 000 mg/L PP333處理后,枝條中可溶性蛋白的含量明顯高于CK,說明該濃度的多效唑處理后能促進枝條中可溶性蛋白增加,提高細胞保水力。

在低溫脅迫下,植物體內可溶性糖的含量增加了植物細胞內的滲透勢,自由水的含量會隨之降低進而增加其抗寒性[18]。隨著脅迫溫度的降低,枝條中可溶性糖的含量出現階段性的增加,并且當用1 500和2 000 mg/L PP333處理后,枝條中可溶性糖的含量較CK明顯增加,說明這兩個濃度多效唑有效地增加了枝條中可溶性糖的含量,是提高庫爾勒香梨枝條抗寒性的抗寒指標之一。

SOD是防御膜脂過氧化作用的重要保護酶。通過增加植物體內清除自由基的保護酶活性,能夠減輕膜脂的過氧化的程度,降低低溫對植物的傷害[19]。研究發現,隨著脅迫溫度的降低,枝條中SOD活性在-24℃之后有明顯的下降,但經過各濃度多效唑處理之后SOD活性有所提高,且隨著多效唑濃度的增加SOD活性呈現先升高后下降的變化趨勢;當用1 500和2 000 mg/L PP333處理后,枝條中SOD活性明顯高于CK,說明該濃度多效唑促進枝條中SOD活性的增加,降低了低溫對庫爾勒香梨枝條的傷害。

越冬枝條上對凍害最敏感的部位是芽,通過恢復生長法測定休眠枝條萌芽率能夠直觀有效地反映枝條的受凍程度[20]。研究發現,隨著脅迫溫度的降低,庫爾勒香梨枝條的萌芽率均有所降低,當溫度下降到-33℃時除1 500、2 000和2 500 mg/L的PP333處理的花芽全部死亡,而葉芽有少量萌發外,其余各處理花芽和葉芽均沒有萌發。說明較高濃度多效唑處理促進芽體萌發,提高庫爾勒香梨枝條的萌芽率,1 500 mg/L PP333處理后萌發效果最好。

庫爾勒香梨的抗寒性可以通過相對電導率、半致死溫度直觀的反映,也可以通過與丙二醛、游離脯氨酸、SOD活性、可溶性糖、可溶性蛋白含量變化的相關性反映。試驗過程受當地氣候變化、實驗器材測定誤差、人工操作誤差等影響,不能準確地反應庫爾勒香梨的抗寒性。很多學者以相對電導率結合Logistic方程求得的半致死溫度為主,以其它生理指標為輔來評價其抗寒性的強弱[21-25]。研究也用同樣的方法來評價PP333對庫爾勒香梨抗寒性的影響,通過此方法更能準確地評價庫爾勒香梨枝條的抗寒性。

4 結 論

通過低溫處理后測定庫爾勒香梨枝條的相對電導率、游離脯氨酸含量、丙二醛含量、可溶性糖含量、可溶性蛋白含量、SOD活性并結合Logistic方程求得的半致死溫度以及恢復生長試驗的測定可知,噴施1 500 mg/L的多效唑可以有效減緩枝條中相對電導率和丙二醛的含量,減緩低溫脅迫對植物細胞膜的破壞;同時促進枝條中游離脯氨酸含量、可溶性蛋白含量、可溶性糖含量,SOD活性和提高了恢復生長萌芽率。低溫半致死溫度為-28.80℃,而CK的低溫半致死溫度為-25.21℃。1 500 mg/L PP333處理后可明顯提高庫爾勒香梨枝條的抗寒性。

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Effect of PP333on Cold Resistance in Korla Fragrant Pear

ZHOU Wei-quan1, YANG Wen-li2, YANG Hua-hua1, ZHAO Shi-rong1, QI Yan-qiao1, LING Chao-hai2, DONG Sheng-Li2, LIAO Kang1

(1. Research Center of Featured Fruit Trees, Xinjiang Agricultural University, Urumqi 830052, China; 2. Luntai National Fruit Germplasm Resources Garden of Xinjiang Acamedy of Agricultural Sciences, Luntai Xinjiang 841600, China)

【Objective】 To explore effects of different concentrations of paclobutrazol on cold resistance of Korla fragrant pear and lay the foundation for the cultivation and regulation of the fruit.【Method】 In the shoot rapid growth period (April 30th), different concentrations of PP333were sprayed on the new shoots of Korla fragrant pear; The sleeping branches of 1a Korla fragrant pear were selected as test materials and subjected to artificial low temperature treatment. The cold resistance index was measured and the logistic curve equation was fitted to calculate the critical semi-lethal temperature (LT50). Finally, the effect of paclobutrazol on cold resistance of shoots was analyzed. 【Result】Compared with CK, spraying 1,000 mg/L of paclobutrazol could effectively reduce the relative conductivity and malondialdehyde content in the shoots, slow down the damage of plant cell membrane under low temperature stress, and promote the content of proline and soluble in the shoot protein content, soluble sugar content, SOD activity and increased recovery germination rate. The semi-lethal temperature (LT50) was determined by Logistic inflection point and the semi-lethal temperature of 1,500 mg/L paclobutrazol was determined to be -28.80℃, while the semi-lethal temperature of CK was -25.21℃. 【Conclusion】Spraying 1,500 mg/L paclobutrazol can effectively reduce the damage of shoots and improve the cold resistance of Korla fragrant pear.

paclobutrazol;Korla fragrant pear;cold resistance;cold index

LIAO Kang(1962-),male, native place: Zitong, Sichuan. Professor, research field: Fruit germplasm resource and cultiva-tion physology,(E-mail)13899825018@163.com

10.6048/j.issn.1001-4330.2017.07.011

2017-06-07

國家“十二五”科技支撐計劃項目“果樹優質高效生產關鍵技術研究與示范”(2014BAD16B07);中央財政林業科技推廣項目(ZYLTKJTG2015017);新疆維吾爾自治區園藝學重點學科基金、國家特色果樹砧木種質資源平臺(輪臺NICGR2017-60)

周偉權(1992-),男,甘肅武威人,碩士研究生,研究方向為果樹生理與栽培,(E-mail)364705428@qq.com

廖康(1962-),男,四川梓橦人,教授,博士生導師,研究方向為果樹種質資源及栽培生理,(E-mail)13899825018@163.com

S661.2

A

1001-4330(2017)07-1259-10

Supported by: Science and Technology Planning Program of China during the 12th Five-Year Plan Period "Key Techniques for High Quality and High Efficiency Production of Fruit Trees" (2014BAD16B07); Central Government Forestry Science and Technology Extension Project (ZYLTKJTG2015017); Key Discipline (Horticulture) Fund of Xinjiang Uyghur Autonomous Region and National Featured Fruit Trees Root Stock Germplasm Resources Platform (Luntai) ( NICGR2017-60)

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