2株耐熱真菌的分離鑒定及其產(chǎn)酶活性研究

楊紅梅，殷亞蘭，史應(yīng)武，高雁，林青，張濤，楚敏，婁愷

(新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院微生物應(yīng)用研究所/新疆特殊環(huán)境微生物實(shí)驗(yàn)室，烏魯木齊 830091)

2株耐熱真菌的分離鑒定及其產(chǎn)酶活性研究

楊紅梅，殷亞蘭，史應(yīng)武，高雁，林青，張濤，楚敏，婁愷

(新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院微生物應(yīng)用研究所/新疆特殊環(huán)境微生物實(shí)驗(yàn)室，烏魯木齊 830091)

【目的】對(duì)新疆瑪納斯火燒洼熱氣泉土壤樣品中，分離出的2株耐熱真菌MHS7和MHS9進(jìn)行鑒定，并研究其產(chǎn)酶活性。【方法】利用平板稀釋涂布法分離篩選耐熱真菌，基于菌株形態(tài)學(xué)特征和rDNA ITS序列分析，對(duì)分離得到的耐熱真菌菌株進(jìn)行初步分類鑒定；分別測(cè)定各菌株產(chǎn)淀粉酶、蛋白酶、纖維素酶、脂肪酶、木聚糖酶和糖苷酶的能力。【結(jié)果】得到2株耐熱真菌MHS7和MHS9，初步鑒定菌株MHS7屬于小裸囊菌屬(Gymnascella)，菌株MHS9屬于曲霉屬(Aspergillus)。產(chǎn)酶活性檢測(cè)表明，菌株MHS7和MHS9均能產(chǎn)淀粉酶、蛋白酶、纖維素酶和脂肪酶，其中，菌株MHS9產(chǎn)淀粉酶和蛋白酶的活性相對(duì)較高。【結(jié)論】耐熱真菌MHS7和MHS9均能同時(shí)產(chǎn)四種酶，具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。

耐熱真菌；熱氣泉；酶活性

0 引 言

【研究意義】耐熱真菌屬于一類特殊的高溫真菌類群，最低生長(zhǎng)溫度低于20℃，最高生長(zhǎng)溫度在50℃左右(一般為40℃或40℃以上)[1,2]。耐熱真菌既能在一般高溫條件下生長(zhǎng)，也能在常溫條件下自然生長(zhǎng)，具有很強(qiáng)的競(jìng)爭(zhēng)力，在堆肥、溫泉、熱泉、沙漠、草堆、自熱垃圾堆等高溫環(huán)境中都廣泛存在。熱氣泉(60～300℃)是一類天然的熱汽釋放口，通常存在于地下煤層蘊(yùn)藏量豐富的地區(qū)。它是由于長(zhǎng)時(shí)間地下煤層自燃，加熱地下水形成大量蒸汽，沿巖層節(jié)理、裂縫、斷裂處或煤層燃燒塌陷處噴出所致，并在局部形成高氡、高溫、高濕的微小氣候[3,4]。此極端環(huán)境為耐熱菌的生長(zhǎng)、繁殖提供了理想的條件，因其生境的特殊性而具有較大的研究潛力。對(duì)熱氣泉這一獨(dú)特地?zé)嵘衬蜔峋陌l(fā)掘及其產(chǎn)酶研究，是降低高溫酶生產(chǎn)成本的一個(gè)可能途徑。【前人研究進(jìn)展】耐熱真菌的研究日益引起人們的重視。國(guó)外已描述和報(bào)道89種耐熱真菌[5,6]；《中國(guó)真菌總匯》和《中國(guó)菌種目錄》中共收集、記載了35種此類真菌[7,8]，但并沒(méi)有進(jìn)一步明確鑒定它們是否屬于耐熱真菌；Chen等[9]報(bào)道了1個(gè)中國(guó)耐熱真菌新種；張勇等[10,11]系統(tǒng)調(diào)查研究了我國(guó)不同生態(tài)類型耐熱真菌的種類及多樣性，報(bào)道了8個(gè)中國(guó)耐熱真菌新記錄種；梁茵等[12]明確鑒定出28種中國(guó)耐熱真菌，其中包括2個(gè)中國(guó)新記錄種，分屬于接合菌門(mén)、子囊菌門(mén)和擔(dān)子菌門(mén)；殷亞蘭等[13]從新疆吐魯番分離得到129株耐熱真菌，并對(duì)其功能酶進(jìn)行了篩選，發(fā)現(xiàn)該地區(qū)耐熱真菌資源豐富，產(chǎn)酶種類多樣。【本研究切入點(diǎn)】前期通過(guò)免培養(yǎng)技術(shù)對(duì)新疆瑪納斯火燒洼熱氣泉土壤細(xì)菌和古菌多樣性進(jìn)行了分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該生境下的細(xì)菌、古菌群落組成與其它地?zé)嵬寥牢⑸锵嗨疲⑶掖嬖谥罅繚撛诘募?xì)菌新物種、高溫硫代謝菌及氮循環(huán)菌[14,15]。但是此生境下耐熱真菌及產(chǎn)酶活性的相關(guān)研究，還未見(jiàn)報(bào)道。研究對(duì)新疆瑪納斯火燒洼一眼熱氣泉土壤樣品中分離出的2株耐熱真菌MHS7和MHS9進(jìn)行鑒定，并研究其產(chǎn)酶活性。【擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題】以新疆瑪納斯火燒洼一眼熱氣泉土壤為研究對(duì)象，分離、篩選可培養(yǎng)耐熱真菌，確定其分類地位，對(duì)獲得的耐熱真菌菌株進(jìn)行產(chǎn)酶(蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纖維素酶、木聚糖酶、糖苷酶)定性研究，為該生境下耐熱真菌的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 樣品采集

土壤樣品采自新疆瑪納斯火燒洼一眼熱氣泉(洞口溫度65℃)。沿?zé)釟馊纯趦?nèi)表面均勻采集0～5 cm土壤，混勻后裝入無(wú)菌聚乙烯袋，4℃避光保存運(yùn)至實(shí)驗(yàn)室，立即進(jìn)行耐熱真菌的分離。

1.1.2 培養(yǎng)基

1.1.2.1 分離培養(yǎng)基

PDA培養(yǎng)基(g/L)：去皮馬鈴薯 200，葡萄糖 20，瓊脂 20，pH 6.5。

1.1.2.2 產(chǎn)酶篩選培養(yǎng)基

淀粉酶篩選培養(yǎng)基(g/L)：可溶性淀粉 20，氯化鉀 0.5，硝酸鈉 2，磷酸鉀1，硫酸鎂0.5，瓊脂 18，蒸餾水1 000 mL，pH 自然。

蛋白酶篩選培養(yǎng)基(g/L)：蛋白胨 10，葡萄糖 1，氯化鈉 5，氯化鈣0.1，酪氨酸 0.1，酪素 5，瓊脂 22，蒸餾水1 000 mL，pH 7.0。

纖維素酶篩選培養(yǎng)基(g/L)：羧甲基纖維素 8，硝酸鈉 3，氯化鉀 0.5，磷酸氫二鉀1，硫酸鐵 0.01，硫酸鎂0.5，瓊脂 20，氯霉素 0.05，蒸餾水1 000 mL， pH 6.0。

脂肪酶篩選培養(yǎng)基(g/L)：酵母膏 10，磷酸氫二鈉 1 ，磷酸二氫鉀 1.5，氯化鈉 0.5，硫酸鎂0.5，硫酸銨 5，三丁酸甘油酯乳化液，去氧膽酸鈉1，瓊脂 18，蒸餾水1 000 mL，pH自然。

木聚糖酶篩選培養(yǎng)基(g/L)：木聚糖 10，硝酸鈉 2，磷酸二氫鉀 2， 磷酸氫二鉀 1，氯化鈉 0.5，硫酸鎂 0.5，瓊脂 20，蒸餾水1 000 mL，pH值自然。

糖苷酶篩選培養(yǎng)基(g/L)：乳糖10，硝酸鈉 3，磷酸氫二鉀 1， 氯化鉀 0.5，硫酸鎂0.5，硫酸鐵 0.01，瓊脂 15，蒸餾水1 000 mL，pH自然。

1.2 方 法

1.2.1 菌株的分離和純化

取10 g研磨的土壤樣品置于盛有90 mL無(wú)菌水的三角瓶中，加入直徑為0.2 mm的玻璃珠，200 r/min搖勻1 h。搖勻后的樣品進(jìn)行系列稀釋(10-2、10-3、10-4)，每個(gè)梯度各取200 μL涂布于分離培養(yǎng)基上，每個(gè)培養(yǎng)基每個(gè)稀釋度均設(shè)置3個(gè)平行，每種培養(yǎng)基設(shè)一個(gè)空白，40℃培養(yǎng)3～8 d。根據(jù)平板上菌落生長(zhǎng)的不同形態(tài)特征，挑取單菌落進(jìn)行分離與純化。得到的純化真菌菌株轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基中，于19℃培養(yǎng)3 d 以上，將生長(zhǎng)菌株確定為耐熱真菌[1,2]。

1.2.2 菌株的分類鑒定

挑取不同菌落形態(tài)的菌株，使用真菌基因組提取試劑盒提取菌株DNA，采用真菌ITS基因通用引物ITS1：5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′和ITS4：5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′進(jìn)行rDNA ITS基因PCR擴(kuò)增。反應(yīng)條件為: 94℃ 5 min；94℃ 30 s、54℃ 30 s、72℃ 50 s，35個(gè)循環(huán)；72℃ 10 min。擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物送至上海生物工程有限公司進(jìn)行rDNA ITS基因序列測(cè)定；使用Blast搜索程序從GenBank核酸數(shù)據(jù)庫(kù)(http://www.ncbi.nlm.nih.gov)中調(diào)出與測(cè)定序列相似性較高的基因序列，用CLUSTAL X軟件進(jìn)行多重序列比對(duì)，運(yùn)用MEGA 5.1軟件采用鄰接法進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)構(gòu)建。研究中得到的序列已提交至GenBank，收錄號(hào)分別為：KY629638，KY629639。

1.2.3 菌株產(chǎn)酶活性篩選

采用透明圈法，將純化后的單菌落分別點(diǎn)接于上述6種產(chǎn)酶篩選培養(yǎng)基中，每個(gè)菌落設(shè)置3個(gè)重復(fù)，40℃恒溫培養(yǎng)3～7 d。測(cè)量不同菌株產(chǎn)生的透明圈直徑和菌落直徑，酶活大小用透明圈直徑與菌落直徑的差值(D)表示，D值越大，表明酶活越強(qiáng)。采用DPS 9.5進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌株MHS7和MHS9的菌落形態(tài)特征

新疆瑪納斯火燒洼熱氣泉土壤樣品中分離獲得2株耐熱真菌，分別命名為MHS7和MHS9。菌株MHS7在PDA平板培養(yǎng)基上生長(zhǎng)較慢，菌落呈卵形至球形，中部白色凸起，有放射狀溝紋，邊緣光滑；菌落反面呈淺黃色。菌株MHS9在PDA平板培養(yǎng)基上生長(zhǎng)較快，菌落正面銹紅色，外觀似絨毛狀；菌落反面呈暗紅褐色。圖1

圖1 耐熱真菌菌株MHS7和MHS9在PDA培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)

2.2 菌株MHS7和MHS9的rDNA ITS序列分析

對(duì)菌株MHS7和MHS9的rDNA ITS基因進(jìn)行序列測(cè)定，GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中ITS基因序列相似性比對(duì)結(jié)果表明，菌株MHS7與3株已知的小裸囊菌屬菌株的同源性為86%～99%，菌株MHS9與10株已報(bào)道的曲霉屬菌株ITS基因序列的同源性為85%～99%。其中，菌株MHS7與分離自突尼斯土壤中的嗜角蛋白真菌菌株SOIL-TUITS29 (Gymnascellaaurantiac，KP147985)[16]有99%的相似性，構(gòu)建的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析表明這兩個(gè)菌株形成一進(jìn)化簇。菌株MHS9與曲霉屬菌株NRRL 71 (Aspergillusglaucus，EF652047，有性態(tài)為Eurotiumherbariorum)、菌株NRRL 78 (Aspergilluschevalieri，AY373886，有性態(tài)為Aspergilluschevalieri)、菌株NRRL 90 (Aspergillusamstelodami，AY373885，有性態(tài)為Eurotiumamstelodami)、菌株UPM A14 (Aspergillusruber，HM152565，有性態(tài)為Eurotiumrubrum)有99%的相似性，構(gòu)建的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析表明菌株MHS9與以上4個(gè)菌株形成一進(jìn)化簇。圖2

2.3 耐熱真菌MHS7和MHS9的產(chǎn)酶活性研究

研究表明，菌株MHS7和MHS9均能同時(shí)產(chǎn)淀粉酶、蛋白酶、纖維素酶和脂肪酶4種酶，不產(chǎn)木聚糖酶和糖苷酶。方差檢驗(yàn)分析結(jié)果表明，菌株MHS7和MHS9產(chǎn)淀粉酶和蛋白酶的活性顯著高于產(chǎn)纖維素酶和脂肪酶的活性(P<0.01)。與菌株MHS7相比，菌株MHS9產(chǎn)淀粉酶和蛋白酶的活性明顯較高，差異顯著(P<0.01)。表1

圖2 菌株MHS7和MHS9基于rDNA ITS序列同源性構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)

菌株編號(hào)No.淀粉酶Amylase蛋白酶Protease纖維素酶Cellulase脂肪酶Lipase木聚糖酶Xylanase糖苷酶GlycosidaseMHS7+++cC++++bB++dD+eE--MHS9+++++aA+++++aA++dD+eE--

注：各組間不同大、小寫(xiě)字母分別表示在0.01、0.05水平上差異顯著，“+++++”表示透明圈D值為20～25 mm；“++++”表示D值為15～20 mm；“+++”表示D值為10～15 mm；“++”表示D值為5～10 mm；“ +”表示D 值為0～5 mm；“-”表示不產(chǎn)生透明圈，其中糖苷酶篩選中“-”表示為陰性

Note: Different uppercase and lowercase letters indicate significant difference at 0.01 or 0.05 level, respectively, "+++++": 20-25 mm; "++++": 15-20 mm; "+++": 10-15 mm; "++ ": 5-10 mm; "+ ": 0-5 mm; "-": No transparent circle

3 討 論

新疆是中國(guó)地下煤火重要分布區(qū)之一，形成了大量熱氣泉地?zé)峋坝^，是研究微生物的獨(dú)特模型。前期以新疆瑪納斯火燒洼熱氣泉為研究對(duì)象，通過(guò)構(gòu)建16S rDNA基因克隆文庫(kù)和T-RFLP技術(shù)，對(duì)火燒洼熱氣泉土壤細(xì)菌和古菌多樣性進(jìn)行了分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)該生境下的微生物群落組成與其它地?zé)嵬寥牢⑸锵嗨疲⑶掖嬖谥罅繚撛诘募?xì)菌、古菌新物種以及高溫硫代謝菌和氮循環(huán)菌[14,15]。對(duì)新疆瑪納斯火燒洼1眼熱氣泉土壤中的耐熱真菌進(jìn)行研究，對(duì)其中的兩株真菌進(jìn)行了初步鑒定。其中，菌株MHS7初步鑒定為小裸囊菌屬(Gymnascella)菌株，與分離自突尼斯土壤中的嗜角蛋白真菌菌株SOIL-TUITS29[22]有99%的相似性。有研究表明小裸囊菌屬菌株可以產(chǎn)生角蛋白酶，具有降解角蛋白的能力[17]。微生物(真菌、放線菌、細(xì)菌等)分泌的角蛋白酶是酶研究的熱點(diǎn)之一，在飼料、有機(jī)肥料、制革、食品加工、醫(yī)藥、化妝品及環(huán)境保護(hù)等方面具有很大的應(yīng)用潛力。分析表明，新疆瑪納斯火燒洼熱氣泉土壤中含有重要、新穎、具潛在應(yīng)用價(jià)值的微生物資源，值得進(jìn)一步研究。

耐熱真菌所產(chǎn)生的熱穩(wěn)定多聚物降解酶(蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶等)在飼料制造加工、食品釀造業(yè)、醫(yī)藥工業(yè)、洗滌劑行業(yè)、廢水廢料的處理、生物能源等開(kāi)發(fā)利用上均有很大的應(yīng)用價(jià)值，并有可能會(huì)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)效益[18-21]。目前，在熱氣泉生境下，尚未有其它研究發(fā)現(xiàn)產(chǎn)多種酶活性的耐熱真菌；研究發(fā)現(xiàn)，耐熱真菌菌株MHS7和MHS9均能同時(shí)產(chǎn)淀粉酶、蛋白酶、纖維素酶和脂肪酶。關(guān)于產(chǎn)酶條件的進(jìn)一步優(yōu)化及酶學(xué)特性正在研究中，為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和利用功能酶提供良好的研究材料。

4 結(jié) 論

研究對(duì)新疆瑪納斯火燒洼熱氣泉土壤中的耐熱真菌及產(chǎn)酶活性進(jìn)行研究，得到2株耐熱真菌MHS7和MHS9，初步鑒定MHS7屬于小裸囊菌屬(Gymnascella)，與菌株SOIL-TUITS29 (Gymnascellaaurantiac)有99%的相似性；MHS9屬于曲霉屬(Aspergillus)，與菌株NRRL 71 (Aspergillusglaucus)、菌株NRRL 78 (Aspergilluschevalieri)、菌株NRRL 90 (Aspergillusamstelodami)、菌株UPM A14 (Aspergillusruber)有99%的相似性。產(chǎn)酶活性研究表明，菌株MHS7和MHS9均能同時(shí)產(chǎn)淀粉酶、蛋白酶、纖維素酶和脂肪酶4種酶。其中，這兩株真菌產(chǎn)淀粉酶和蛋白酶的活性顯著高于產(chǎn)纖維素酶和脂肪酶的活性(P<0.01)；與菌株MHS7相比，菌株MHS9產(chǎn)淀粉酶和蛋白酶的活性明顯較高(P<0.01)。研究為該特殊生境下耐熱真菌的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供菌種資源和技術(shù)支撐。

References)

[1] Cooney, D. G., & Emerson, R. (1965). Thermophilic fungi. an account of their biology, activities, and classification.TheQuarterlyReviewofBiology, 40(3): 292.

[2] Mouchacca, J. (1997). Thermophilic fungi - biodiversity and taxonomic status [review] [french].CryptogamieMycologie, 18(1): 19-69.

[3] 張建民, 管海燕, 曹代勇, 等. 中國(guó)地下煤火研究與治理[M]. 北京: 煤炭工業(yè)出版社, 2008.

ZHANG Jian-min, GUAN Hai-yan, CAO Dai-yong, et al. (2008).UndergroundcoalfiresinChina:origin,detection,fire-fighting,andprevention[M]. Beijing: China Coal Industry Publish House. (in Chinese)

[4] 吳繼堯, 姚華, 鄭玉建, 等. 新疆熱氣泉調(diào)查分析[J]. 新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào), 1994, 17(2): 93-96.

WU Ji-yao, YAO Hua, ZHENG Yu-jian, et al. (1994). A survey of heat-gas springs in Xinjiang [J].JournalofXinjiangMedicalUniversity, 17(2): 93-96. (in Chinese)

[5] Mouchacca, J. (2000). Thermotolerant fungi erroneously reported in applied research work as possessing thermophilic attributes.WorldJournalofMicrobiologyandBiotechnology, 16(8):869-880.

[6] Jean, M. (2007). Heat tolerant fungi and applied research: addition to the previously treated group of strictly thermotolerant species.WorldJournalofMicrobiologyandBiotechnology, 23(12): 1,755-1,770.

[7] 戴芳瀾. 中國(guó)真菌總匯[M]. 北京: 科學(xué)出版社, 1979.

DAI Fang-lan. (1979).SyllogeFungorumSinicorum[M]. Beijing: Science Press. (in Chinese)

[8] 周宇光. 中國(guó)菌種目錄[M]. 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 2007.

ZHOU Yu-guang. (2007).Chinacatalogueofcultures[M]. Beijing: Chemical Industry Press.(in Chinese)

[9] Chen, G. Q., & Zheng, R. Y. (1999). A new thermophilic variety of absidia idahoensis from china.Mycotaxon, (69): 173-179.

[10] ZHANG Yong, LI Duochuan, (2013). Three new records of thermotolerant fungi from China.Mycosystema, 30(1): 116-122.

[11] 張勇, 李多川. 耐熱真菌五個(gè)中國(guó)新記錄種[J]. 菌物學(xué)報(bào), 2013, 32(1): 142-149.

ZHANG Yong, LI Duo-chuan. (2013). Five new records of thermotolerant fungi from China [J].Mycosystema, 32(1):142-149. (in Chinese)

[12] 梁茵, 王芳, 李安娜, 等. 耐熱真菌的分類鑒定及rDNA-ITS系統(tǒng)發(fā)育分析[J]. 菌物學(xué)報(bào), 2011, 30(4): 542-550.

LIANG Yin, WANG Fang, LI An-na, et al. (2011). Thermotolerant fungi and their phylogenetic analyses based on rDNA-ITS sequences [J].Mycosystema, 30(4): 542-550. (in Chinese)

[13] 殷亞蘭, 常瑋, 張濤, 等. 新疆吐魯番地區(qū)耐熱真菌多樣性及其功能酶的篩選[J]. 新疆農(nóng)業(yè)科學(xué), 2016,53(7): 1 288-1 296.

YIN Ya-lan, CHANG Wei, ZHANG Tao, et al. (2016). Thermotolerant fungi diversity and enzyme activities in Turpan prefecture, Xinjiang [J].XinjiangAgriculturalSciences, 53(7): 1,288-1,296. (in Chinese)

[14] 徐建華, 楊紅梅, 曾軍, 等. 新疆瑪納斯熱氣泉免培養(yǎng)土壤細(xì)菌多樣分析[J].微生物學(xué)報(bào), 2010, 50(5):568-573.

XU Jian-hua, YANG Hong-mei, ZENG Jun, et al. (2010). Bacterial diversity in a hot gas spring soil of MaNasi County, Xinjiang by culture-independent approach [J].ActaMicrobiologyicaSinica, 50(5):568-573. (in Chinese)

[15] Zhang, T., Xu, J., Zeng, J., & Lou, K. (2013). Diversity of prokaryotes associated with soils around coal-fire gas vents in manasi county of xinjiang, china.AntonievanLeeuwenhoek, 103(1): 23-36.

[16] Anane, S., Al-Yasiri, M. H., Normand, A. C., & Ranque, S. (2015). Distribution of keratinophilic fungi in soil across tunisia: a descriptive study and review of the literature.Mycopathologia, 180(1): 1-8.

[17] Currah, R. S. (1986). Taxonomy of the onygenales: arthrodermataceae, gymnoascaceae, myxotrichaceae and onygenaceae.Mycotaxon, (24): 1-216.

[18] Purwani, Suhartono, M. T., Rukayadi, Y., Hwang, J. K., & Yu, R. P. (2004). Characteristics of thermostable chitinase enzymes from the indonesian bacillus sp.13.26.Enzyme&MicrobialTechnology, 35(2-3): 147-153.

[19] Haki, G. D., & Rakshit, S. K. (2003). Developments in industrially important thermostable enzymes: a review.BioresourceTechnology,89(1): 1-34.

[20] Sharma, R., Chisti, Y., & Banerjee, U. C. (2001). Production, purification, characterization, and applications of lipases.BiotechnologyAdvances,19(8): 627-662.

[21] Atomi, H. (2005). Recent progress towards the application of hyperthermophiles and their enzymes.CurrentOpinioninChemicalBiology, 9(2): 166-173.

Isolation, Identification and Enzyme Activities of Two Thermotolerant Fungi

YANG Hong-mei, YIN Ya-lan, SHI Ying-wu, GAO Yan, LIN Qing, ZHANG Tao, CHU Min, LOU Kai

(Xinjiang Laboratory of Special Environmental Microbiology / Research Institute of Microbiology, Xinjiang Academy of Agricultural Sciences, Urumqi 830091, China)

【Objective】 This project aims to have a preliminary identification of the two thermotolerant fungi MHS7 and MHS9 isolated from a hot gas spring in Manasi County of Xining and study their enzyme activities.【Method】Thermotolerant fungi were isolated and screened by using a agar dilution method, and the primary identification was studied according to cultural characteristics and rDNA ITS (Internal Transcribed Spacer) sequences analysis. The amylase, protease, cellulose, lipase, xylanase and glycosidase were detected on six special selective media for thermotolerant fungus strains with the enzyme activity.【Result】Two strains of thermotolerant fungi named MHS7 and MHS9 were isolated. ITS sequence analysis identified that the strain MHS7 belonged toGymnascellasp., and the strain MHS9 wasEurotiumsp.. Studies on enzyme-producing activities of strains MHS7 and MHS9 indicated that both of them produced amylase, protease, cellulose, and lipase. Of the two, the strain MHS9 had higher levels of amylase and protease activities than the strain MHS7.【Conclusion】The thermotolerant fungi MHS7 and MHS9 had complex enzyme activities and might have potential application value.

thermotolerant fungi; hot gas spring; enzyme activities

LOU Kai (1968- ), male, native place: Henan. Professor, Ph.D, research field: Microbiology,(E-mail)loukai02@mail.tsinghua.edu.cn

10.6048/j.issn.1001-4330.2017.07.013

2017-03-30

新疆維吾爾自治區(qū)自然科學(xué)基金項(xiàng)目“新疆瑪納斯熱氣泉高溫菌分離鑒定及產(chǎn)酶研究”(2013211A044)

楊紅梅(1979- )，女，湖北人，副研究員，研究方向?yàn)槲⑸飳W(xué)，(E-mail)yhmzhyq@126.com

婁愷(1968-)，男，河南人，研究員，博士，研究方向?yàn)槲⑸飳W(xué)，(E-mail)loukai02@mail.tsinghua.edu.cn

S188

A

1001-4330(2017)07-1278-06

Supported by: Natural Science Foundation of Xinjiang Uygur Autonomous Region "Isolation, Identification and Enzyme Production of Thermophilic Strains from Hot Gas Springs in Manasi County, Xinjiang"(2013211A044)