絕經后女性膝骨性關節炎患者關節液中OPG，RANKL的表達及意義

梁志平++孫雁宇++何劍全

DOI：10.16662/j.cnki.1674-0742.2017.16.043

[摘要] 目的 探討絕經后女性膝關節骨性關節炎（OA）患者關節液中OPG、RANKL水平及其與關節軟骨損傷程度的關系。方法 2015年12月—2016年12月于廈門醫學院附屬醫院方便選取56例絕經后女性OA患者，采用K-L分級標準分為輕度OA組26例和重度OA組30例，另選取20名正常人為對照組；ELISA法檢測各組膝關節液中的OPG、RANKL表達水平。 結果 OPG的表達中，正常對照組（4.06±0.47）pg/mL與重度OA組（4.76±0.79）pg/mL比較（P=0.009）。RANKL表達中，重度OA組（4.35±0.79）pg/mL與正常對照組（3.33±0.45）pg/mL比較（P=0.001）；與輕度OA組（3.63±0.63）pg/mL比較（P=0.009）。OPG/RANKL比值在組間比較均差異無統計學意義（P>0.05）。結論 重度OA患者膝關節液OPG、RANKL表達均高于正常人，其中RANKL表達與OA病情嚴重程度成正比。

[關鍵詞] 絕經后女性；膝骨性關節炎；護骨素；核因子κB受體活化因子配體

[中圖分類號] R4 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2017）06（a）-0043-03

Expression of OPG and RANKL in Joint Fluid of Female Patients with Knee Osteoarthritis after Menopause and Significance

LIANG Zhi-ping1， SUN Yan-yu1， HE Jian-quan2

1.Department of Orthopedics， Affiliated Hospital of Xiamen Medical College（Xiamen Second Hospital）， Xiamen， Fujian Province， 361000 China；2.Department of Rehabilitation Medicine， Affiliated Hospital of Xiamen Medical College， Xiamen， Fujian Province， 361000 China

[Abstract] Objective To discuss the expression of OPG，RANKL in joint fluid of female patients with Knee Osteoarthritis after menopause and correlation with joint tissue injury. Methods 56 cases of OA female patients in our hospital from December 2015 to December 2016 were conveniently selected and divided into the mild OA group with 26 cases and severe OA group with 30 cases according to the K-L classification standards， and 20 cases of moral people were selected as the control group， and the expression levels of OPG，RANKL in joint fluid were tested by the ELISA test. Results The OPG expression in the normal control group and severe OA group was respectively （4.06±0.47）pg/mL and （4.76±0.79）pg/mL， （P=0.009）， the RANKL expression in the severe OA group and the normal control group was respectively（4.35±0.79）pg/mL and （3.33±0.45）pg/mL）， （P=0.001）， and the OPG/RANKL in the mild OA group was （3.63±0.63）pg/mL，（P=0.009）， and all differences had no statistical significance（P>0.05）. Conclusion The OPG and RANKL in joint fluid of severe OA patients are higher than those in the normal people， and the RANKL expression has a positive correlation with the severity of OA disease.

[Key words] Female after menopause； Knee osteoarthritis； OPG； RANKL

骨性關節炎（Osteoarthritis，OA）是多種因素共同作用下所致的關節軟骨變性、破壞等，以關節痛、壓痛、活動受限為臨床特征的關節退行性變，臨床中以絕經后女性常見[1]；骨保護素（Osteoprotegerin，OPG）和核因子κB受體活化因子（Receptor activator of nuclear factor-κB， RANK）及其配體（Receptor activator of nuclear factor-κB ligand， RANKL）組成的系統是調節骨重建最重要的信號通路之一，該系統與OA發病關系密切[2]。方便收集廈門醫學院附屬醫院2015年12月—2016年12月門診能獨立行動的絕經后OA患者56例及正常人20名，收集膝關節液，檢測OPG、RANKL的表達，初步探討OPG、RANKL在絕經后女性OA發病中的意義，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

所有OA患者主訴均為膝關節疼痛，腫脹，關節活動受限，活動時可有彈響，上下樓梯困難，但晨僵<30 min。通過拍攝負重的膝關節正側位片，采用 K-L分級標準將膝骨性關節炎分5級[3]。將0級設為正常對照組，Ⅰ～Ⅱ級病例設為輕度OA組，Ⅲ～Ⅳ級病例設為重度OA組。排除標準：①排除關節液化驗有膿細胞者，全身有嚴重感染病史者；②3個月內使用過激素類藥物或伴有其他嚴重疾病者；③病歷資料缺失，拒絕簽署知情同意書者。所有研究對象均對該研究具有知情權，并簽署知情同意書。該研究方便選取研究對象76例，其中正常對照組20名，輕度OA組26例，重度OA組30例，3組在年齡、身高、體重、BMI組間比較差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性，見表1。

1.2 OPG、RANKL檢測方法

清晨8∶00-9∶00點無負重狀態下抽取膝關節液，置于-80 ℃保存待測。采用雙抗體夾心法檢測膝關節液中OPG，RANKL表達。具體檢測步驟依ELISA試劑盒要求標準進行。

1.3 統計方法

采用 SPSS 23.0統計學軟件進行數據分析。計量資料均用均數±標準差（x±s）表示，組間比較采用t檢驗及方差分析，方差不齊采用非參數檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

正常對照組、輕度OA組、重度OA組膝關節液 OPG、RANKL表達水平的比較，見表1。

3 討論

已有研究表明絕經后女性好發OA，這與血清雌二醇水平的下降可能有關[4]。因此，選取了平均年齡為（70.31±4.31）歲的絕經后女性作為研究對象。經 K-L分級標準分組后，正常對照組、輕度OA組和重度OA組在年齡、身高、體重、BMI的一般臨床資料的比較中差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

近年來，有研究說明OPG/RANK/RANKL系統與OA的發生、發展存在密切相關[5]。Logar等[6]證實股骨OA的病理表現與RANKLmRNA表達水平呈正相關，而OPGmRNA表達水平則相反。體外研究發現RANKL/OPG比值的從1：160升高至1：2.5時逐漸促進軟骨細胞MMP-13的表達[7]，說明OPG，RANKL在關節軟骨中均有表達，而該研究提示OPG、RANKL在OA患者與正常人的膝關節液中的也有表達。有研究測定膝OA患者的滑膜液中OPG（20.6±8.07）pmol/L、RANKL（0.96±0.71）pmol/L的表達，分析其與 K-L分級的相關性，發現OA患者關節液中OPG含量與嚴重程度成正比（r=0.771，P<0.001）[8]，而RANKL的表達無正相關，該研究并未檢測正常人膝關節液中的OPG、RANKL的表達。而重度OA膝關節OPG的表達為（4.76±0.79）pg/mL，高于正常人（P=0.009），說明重度OA患者與正常人膝關節液中OPG存在差異性。但OPG在輕度OA與重度OA組間并差異無統計學意義，并不能說明OPG與OA嚴重程度成正比，這可能與納入的病例的性別差異有關。但是該研究RANKL在重度OA組的表達同樣高于正常人（P=0.001），同時與輕度OA組的表達差異有統計學意義（P=0.009），提示隨著OA病情加重，RANKL在膝關節液中的表達可能逐步增高。

目前針對OA的臨床藥物均只能暫時性的對癥治療，并不能阻止病情的發生發展。Lv Y等[9]將抑制骨吸收藥物用于治療OA，通過對軟骨和軟骨下骨的研究發現其作用機制可能是提高OPG的表達，同時降低RANKL，MMP-9和TLR-4表達。該研究中OPG/RANKL的比值在OA與正常人的膝關節液中差異無統計學意義（P>0.05），然而有研究將單獨將OPG、RANKL的變化作為治療OA的關鍵靶點[10-11]，提示單獨測定OPG、RANKL的表達可作為治療OA的靶點之一。Sagar DR等[12]證實OPG可通過抑制骨吸收到達減輕OA疼痛的作用，說明OPG可用于治療OA。該研究中絕經后女性OA患者膝關節液中OPG、RANKL的表達均高于正常人，因此關節液中表達的OPG、RANKL對關節軟骨細胞的作用機制有待進一步研究。

綜上所述，該研究通過觀察絕經后女性膝關節OA關節液體中OPG、RANKL的表達，為藥物治療OA提供了新的思路。但由于該試驗納入的病例較少，有待于擴大樣本的臨床試驗來進一步驗證，為OPG/RANK/RANKL系統在絕經后女性OA的診療過程中的作用提供了理論基礎。

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（收稿日期：2017-03-03）