虎杖藥材中蒽醌衍生物及其苷類(lèi)成分的測(cè)定探討

孫蘭鳳

DOI：10.16662/j.cnki.1674-0742.2017.16.175

[摘要] 目的 探討虎杖藥材中蒽醌衍生物及其苷類(lèi)成分的測(cè)定。方法 選擇高效液相色譜法對(duì)虎杖藥材中蒽醌衍生物及其苷類(lèi)成分進(jìn)行測(cè)定，并分析總結(jié)所獲各項(xiàng)數(shù)據(jù)。 結(jié)果 虎杖藥材中的蘆薈大黃素含量偏低，大黃素甲醚、大黃酸、大黃素含量偏高，蒽酯類(lèi)成分含量約為1.1%～2.8%；虎杖藥材中蘆薈大黃素、大黃素、大黃酸、大黃素甲醚水解后含量高于水解前。結(jié)論 測(cè)定虎杖藥材中蒽醌衍生物及其苷類(lèi)成分，可充分保證其藥用質(zhì)量。

[關(guān)鍵詞] 虎杖；蒽醌衍生物；苷類(lèi)成分

[中圖分類(lèi)號(hào)] R284.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-0742（2017）06（a）-0175-03

Study on Measurement of Quinone Derivatives and Glycosides in Rhizoma of Polygonum Cuspidatum

SUN Lan-feng

Department of Pharmacy， Zaozhuang Hospital of Traditional Chinese Medicine， Zaozhuang， Shandong Province， 277000 China

[Abstract] Objective To discuss the measurement of quinone derivatives and glycosides in rhizoma of polygonum cuspidatum. Methods The quinone derivatives and glycosides in rhizoma of polygonum cuspidatum were measured by the high efficiency liquid chromatography and various data were analyzed and summarized. Results The aloe-emodin content in the in the rhizoma of polygonum cuspidatum was low， and the contents of rheum emodin， rheinic acid and emodin monomethyl ether were high， and the content of quinone derivatives was about 1.1%～2.8%， and the contents of aloe-emodin， rheum emodin， rheinic acid and emodin monomethyl ether in rhizoma of polygonum cuspidatum after hydrolysis were higher than those before hydrolysis. Conclusion The measurement of quinone derivatives and glycosides in rhizoma of polygonum cuspidatum can fully ensure the medication quality.

[Key words] Polygonum cuspidatum； Quinone derivatives； Glycosides

虎杖為蓼科植物，性微溫、味甘并無(wú)毒，該味中藥材具有止咳化痰、散瘀定痛、活血通絡(luò)、祛風(fēng)利濕等效果，臨床上多用此味中藥治療女性瘀滯閉經(jīng)、跌打損傷或者風(fēng)濕痹痛、濕熱黃疸以及石淋等類(lèi)疾病?；⒄戎饕煞譃檩祯苌铮捍簏S酚、蘆薈大黃素與大黃素甲醚以及大黃酸等類(lèi)物質(zhì)。該次用高效液相色譜法對(duì)虎杖藥材中蒽醌衍生物及其苷類(lèi)成分進(jìn)行了測(cè)定，將所獲數(shù)據(jù)全面分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

該實(shí)驗(yàn)選擇了香港、廣州與廣西等地所購(gòu)置的虎杖藥材，所選藥材均符合2000年版中國(guó)藥典標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)及規(guī)定符合；并于中國(guó)藥品生物制品檢定所購(gòu)置大黃素甲醚、蘆薈大黃素、大黃酚、大黃酸、大黃素。

1.2 方法

1.2.1 測(cè)定儀器 所選光度計(jì)為U-3010紫外分光光度計(jì)；高效液相色譜儀為L(zhǎng)C-10A；

1.2.2 測(cè)定方法 波長(zhǎng)選擇：選擇大黃素甲醚與蘆薈大黃素、大黃酚為對(duì)照品，再將其以甲醇制備為溶液，保證其含有20 μg/L，波長(zhǎng)于200～400 nm之間對(duì)樣品進(jìn)行掃描測(cè)定，其中大黃最大吸收為289.6 nm、蘆薈大黃素225.6 nm、大黃酸257.8 nm、大黃酚348.8 nm、大黃素甲醚262.2 nm，波長(zhǎng)控制于220 nm[1]。色譜條件：柱溫設(shè)置為38℃，流動(dòng)相應(yīng)是甲醇-1%高氯酸水溶液，波長(zhǎng)為200 nm。重現(xiàn)性試驗(yàn)：將同個(gè)樣品分為6份，將其制作為溶液后測(cè)定相關(guān)結(jié)果。樣品測(cè)定：將2 g虎杖研制成粉末狀，對(duì)其行精密測(cè)定，將80 mL甲醇置入其中，再將其置于水浴上加熱回流30 min，并將其放冷后進(jìn)行過(guò)濾，置于甲醇洗滌儀器中稀釋至100 mL，將其作為溶液A；再選取10 mL溶液把大部分甲醇揮發(fā)掉后，將5%硫酸溶液20 mL置入殘留液中，再將其放進(jìn)沸水中加熱并回流1 h，放冷后給分液漏斗中加入水溶液，之后便以氯仿進(jìn)行萃取4次，1次萃取25 mL，將其與氯仿萃取液結(jié)合后水洗2次，1次水洗15 mL，再分取氯仿萃取液并行揮干[2]。之后再用甲醇將所剩殘?jiān)芙夂笾糜?0 mL量瓶中定容，將該溶液作為B；再選取大黃素甲醚與大黃素等相關(guān)對(duì)照品，并對(duì)其進(jìn)行配置，確保其中具有15 μg溶液，再根據(jù)規(guī)定方法測(cè)定。endprint

2 結(jié)果

經(jīng)測(cè)定得出：樣品1水解前的蘆薈大黃素微量0.015mg/g、大黃素0.37 mg/g、大黃酸3.95 mg/g、大黃素甲醚1.61 mg/g，水解后的蘆薈大黃素0.302 mg/g、大黃素2.02 mg/g、大黃酸9.01 mg/g、大黃素甲醚2.34 mg/g；樣品2水解前的蘆薈大黃素0.040 3 mg/g、大黃素0.55 mg/g、大黃酸3.49 mg/g、大黃素甲醚1.55 mg/g，水解后的蘆薈大黃素0.341 mg/g、大黃素2.16 mg/g、大黃酸9.98 mg/g、大黃素甲醚3.65 mg/g；樣品3水解前的蘆薈大黃素0.0361 mg/g、大黃素0.53 mg/g、大黃酸3.22 mg/g、大黃素甲醚2.24 mg/g，水解后的蘆薈大黃素0.343 mg/g、大黃素1.35 mg/g、大黃酸6.41 mg/g、大黃素甲醚3.32 mg/g；樣品4水解前的蘆薈大黃素微量0.035 mg/g、大黃素1.08 mg/g、大黃酸2.74 mg/g、大黃素甲醚0.33 mg/g，水解后的蘆薈大黃素0.350 mg/g、大黃素1.51 mg/g、大黃酸7.02 mg/g、大黃素甲醚3.11 mg/g?？梢?jiàn)：虎杖藥材中的蘆薈大黃素含量偏低，大黃素甲醚、大黃酸、大黃素含量偏高，蒽酯類(lèi)成分含量約為1.1%～2.8%；虎杖藥材中蘆薈大黃素、大黃素、大黃酸、大黃素甲醚水解后含量高于水解前。

3 討論

虎杖歸肝、膽、肺這三經(jīng)，其根莖藥用時(shí)具有活血散痰、祛風(fēng)解毒、消炎止痛、去濕熱黃疸等功效，并可有效治療慢性氣管炎與降低血脂[3]；虎杖全草可用作獸藥，以治療牛鼓脹癥或者黃蜂胃?。粚⑵渥鞒赊r(nóng)藥時(shí)可有效預(yù)防螟蟲(chóng)與蚜蟲(chóng)[4]；因此，探討虎杖藥材中蒽醌衍生物及其苷類(lèi)成分測(cè)定，對(duì)其藥用質(zhì)量保證有著極大現(xiàn)實(shí)意義。

虎杖極具藥用價(jià)值，臨床上常用虎杖煎以虎杖根治療腹內(nèi)積聚或者月經(jīng)不通的患者，亦或者用虎杖散以苦杖研末治療五淋，亦可用虎杖酒以虎杖根、川牛膝、川加皮、防風(fēng)、桂枝、木瓜泡酒喝，以此治療手足麻木與筋骨瘺軟?；⒄戎泻休祯?lèi)大黃素以及芪類(lèi)衍生物白藜蘆醇等，其中蒽醌類(lèi)衍生物主要是大黃素、大黃酸、大黃酚、大黃素-6-甲醚以及大黃素-8-氧-D葡萄糖苷等類(lèi)成分，再者是芪類(lèi)衍生物，包括白藜蘆醇3、4、5-三羥基芪以及白藜蘆醇苷；亦含有各種苷類(lèi)，比如7-羥基-4甲氧基香豆素與決明松-8-氧-D-葡萄糖苷、瑞諾苷、黃酮醇以及黃酮醇、異槲皮苷、葡萄糖歐鼠李苷和黃酮類(lèi)化合物等；同時(shí)此味中藥中亦含有多糖、游離氨基酸、維生素C與β-谷甾醇以及原兒茶酸、（+）-兒茶酸及草酸、無(wú)機(jī)鹽鈣/鐵/錳等成分。

虎杖中的蒽醌類(lèi)物質(zhì)細(xì)胞毒作用較強(qiáng)，可有效抑制HL-60細(xì)胞生長(zhǎng)，尤其是大黃素的細(xì)胞毒作用最強(qiáng)，并可有效抑制環(huán)磷酰胺造成的人體內(nèi)白細(xì)胞減少的問(wèn)題，亦能參與人體燒傷后體內(nèi)中性粒細(xì)胞釋放H2O2，其具有良好的抗氧化效果，可抑制體內(nèi)溶酶體的分泌，從而有效改善補(bǔ)體過(guò)度活化的情況，此為虎杖關(guān)于免疫的藥理作用。虎杖中白藜蘆醇可有效阻止誘導(dǎo)血小板聚集，通過(guò)阻滯血小板α2-受體而抑制人體內(nèi)鈣內(nèi)流，促使PGl2充分釋放，阻止TXA2生成，從而達(dá)到血小板聚集抑制的效果，并防止血栓形成；同時(shí)白藜蘆醇靜注后能夠抑制皮瓣淤血后靜脈內(nèi)血栓形成，并降低內(nèi)皮細(xì)胞損傷程度，具有良好的緩解脂質(zhì)過(guò)氧化及纖維蛋白原造成的組織學(xué)損害；其間白藜蘆醇以及白藜蘆醇苷可有效降低血清及肝臟脂質(zhì)，比如血清膽固醇與甘油三酯、低密度脂蛋白，亦可充分提高高密度脂蛋白，此為虎杖抗凝血與降脂的藥理作用。虎杖中的白藜蘆醇苷可對(duì)工作心臟產(chǎn)生正性肌力作用，并不會(huì)加快心率，提高心臟收縮振幅，以達(dá)到強(qiáng)化心肌收縮力且改善其循環(huán)，使冠脈流量得以增強(qiáng)；亦可與氨茶堿聯(lián)合使用， 促使心肌營(yíng)養(yǎng)性血流量充分增強(qiáng)；同時(shí)具有良好的微血管擴(kuò)張效果，若人體處于重癥失血性休克狀態(tài)，則可為患者注射白藜蘆醇苷，促使已收縮的三級(jí)動(dòng)靜脈管徑恢復(fù)，使血壓快速回升，確保脈壓恢復(fù)正常。人體毛細(xì)血管開(kāi)口位置發(fā)生動(dòng)脈血流時(shí)，便可以此促使已停滯的血流流動(dòng)恢復(fù)，達(dá)到改善休克微循環(huán)紊亂的效果；白藜蘆醇苷亦具有良好的抗心律失常效果，若人的心動(dòng)過(guò)速，則以虎杖煎劑及白藜蘆醇苷促使竇性心率于短時(shí)間內(nèi)恢復(fù)，此為虎杖對(duì)心血管的藥理作用?；⒄戎械陌邹继J醇及白藜蘆醇苷均可有效抑制微粒體脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，避免其損傷或者破壞肝細(xì)胞，可快速降低血清中的GPT、GOT及肝LPO，虎杖煎劑可快速修復(fù)受損肝細(xì)胞，并促使其于短時(shí)間內(nèi)再生并緩解炎癥，使肝功能得以快速恢復(fù)，使黃疸被快速清除；虎杖煎劑可有效抑制HBsAg，比如大黃素及黃酮類(lèi)物質(zhì)可促使乙型肝炎癥狀快速改善，此為虎杖保肝的藥理作用?；⒄容祯?lèi)及芪類(lèi)物質(zhì)均具有良好的抗菌效果，比如白藜蘆醇對(duì)許多致病真菌都具有較強(qiáng)的抗菌效果；虎杖煎劑可抑制多種病毒，極具抗病毒效果；同時(shí)虎杖鞣質(zhì)的抗促癌及防癌變效果很強(qiáng)，此為虎杖抗菌、抗病毒、抗癌的藥理作用?；⒄戎械陌邹继J醇苷具有良好的延長(zhǎng)睡眠時(shí)間作用，并對(duì)外傷具有良好的鎮(zhèn)痛作用，煎劑外敷時(shí)便具有止血效果，內(nèi)服時(shí)可對(duì)人體消化道出血具有很好的止血效果。

虎杖中蒽醌衍生物水解前后變化較大[5]，其水解后成分顯著增加，所含大黃素甲醚、大黃素的變化最大，則說(shuō)明該種成分均以結(jié)合型形式存在，蘆薈大黃素與大黃酸的變化偏小[6]。經(jīng)實(shí)驗(yàn)可得，不同樣品中的蒽醌類(lèi)衍生物差異較大，亦未存在規(guī)律性，而這與樣品取樣位置相關(guān)，根或者根莖、皮部取樣所得結(jié)果亦均是不同的[7]，采集季節(jié)、藥材生長(zhǎng)時(shí)間亦存在較大差異。其中蘆薈大黃素含量低，大黃素甲醚與大黃酸、大黃素含量偏高，蒽醌類(lèi)成分含量均于處于1.1%～2.8%之間?；⒄戎兴奶J薈大黃素與大黃素、大黃酸、大黃素甲醚水解后含量比水解前高，通?？芍贫ㄟm宜的質(zhì)量保證方案，以確保藥效可充分發(fā)揮，有效提高此種中藥材的藥用價(jià)值[8]。

相關(guān)研究顯示，以0.1%甲酸水（A）-乙腈（B）梯度洗脫虎杖，促使虎杖中所含的化學(xué)成分短時(shí)間內(nèi)分離，于55 min之內(nèi)建立有效的方法對(duì)虎杖中的化學(xué)成分含量進(jìn)行測(cè)定。以虎杖藥材自擬化學(xué)成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)后，充分利用TOF/MS獲得的化合物質(zhì)量數(shù)，再將所獲數(shù)據(jù)與已知理論上的分子質(zhì)量比較，以便于短時(shí)間內(nèi)分析虎杖藥材中所含的化學(xué)成分，待各項(xiàng)炎癥后便可明確其中所含化學(xué)成分。該次選擇了香港、廣州與廣西等地所購(gòu)置的虎杖藥材，用高效液相色譜法對(duì)虎杖藥材中蒽醌衍生物及其苷類(lèi)成分進(jìn)行測(cè)定，以HPLC-TOF/MS可充分明確虎杖中所含有的其他化學(xué)成分，其中含有24種化學(xué)成分，待定性測(cè)定與全面定量后綜合評(píng)價(jià)虎杖藥材質(zhì)量，再依所獲結(jié)果控制虎杖藥材質(zhì)量模式及其方法建立，以此為臨床應(yīng)用提供參考依據(jù)，并提高臨床治療效果。

該次實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，虎杖藥材中的蘆薈大黃素含量偏低，大黃素甲醚、大黃酸、大黃素含量偏高，蒽酯類(lèi)成分含量約為1.1%～2.8%；虎杖藥材中蘆薈大黃素、大黃素、大黃酸、大黃素甲醚水解后含量高于水解前。臨床上要嚴(yán)格測(cè)定虎杖藥材中蒽醌衍生物及其苷類(lèi)成分，以保證其藥用質(zhì)量及臨床藥用效果。

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（收稿日期：2017-03-10）endprint