香蕉及土壤中吡唑醚菌酯和戊唑醇殘留的高效液相色譜分析

王素茹，葛會林，韓丙軍，趙方方

（中國熱帶農業科學院分析測試中心/海南省熱帶果蔬農產品質量安全重點實驗室，海南海口571101）

香蕉及土壤中吡唑醚菌酯和戊唑醇殘留的高效液相色譜分析

王素茹，葛會林，韓丙軍，趙方方

（中國熱帶農業科學院分析測試中心/海南省熱帶果蔬農產品質量安全重點實驗室，海南海口571101）

采用高效液相色譜方法，分析吡唑醚菌酯和戊唑醇在香蕉及土壤中的殘留。香蕉與土壤樣品用乙腈提取，用CNW/NH2固相萃取柱對香蕉及土壤中吡唑醚菌酯和戊唑醇進行凈化，正己烷/丙酮作固相萃取淋洗液，并優化凈化方法及其色譜條件，采用高效液相色譜儀——紫外檢測器進行測定。結果表明：吡唑醚菌酯和戊唑醇的檢出限分別為0.01mg/kg、0.025mg/kg。當添加水平為0.01～0.2mg/kg時，吡唑醚菌酯在香蕉全焦、焦肉及土壤中的平均回收率為90%～102%，相對標準偏差為0.9%～6.9%。當添加水平為0.025～0.5mg/kg時，戊唑醇在香蕉全焦、焦肉及土壤中的平均回收率為82%～102%，相對標準偏差為1.4%～6.6%。

吡唑醚菌酯；戊唑醇；高效液相色譜；香蕉；土壤

1 材料與方法

1.1 藥劑及試劑

吡唑醚菌酯（純度99.0%）和戊唑醇（純度98.5%）購自Dr. Ehrenstorfer GmbH；乙腈（色譜純）。

1.2 主要儀器設備

Waters高效液相色譜儀（2489紫外檢測器）及SunfireTM C18（4.6mm×150mm,5um）。

1.3 分析方法

1.3.1 樣品提取及凈化提取：稱樣20g，加40.0mL乙腈，香蕉勻漿2min后過濾到裝有7g NaCl的具塞量筒中；土壤振蕩30min，加7g NaCl。振蕩2min，靜置20min，取上清液20.0mL至圓底燒瓶中，蒸干，加入5.0mL正己烷溶解混勻，待凈化。

圖1 吡唑醚菌酯標準

圖2 戊唑醇標準曲線

圖3 吡唑醚菌酯和戊唑醇的標準溶液

凈化：用5.0mL正己烷活化CNW/ NH2固相萃取柱后，倒入待凈化溶液，棄去，用5.0mL正己烷淋洗NH2小柱，重復二次，淋洗液棄去。再用5.0ml正己烷—丙酮（體積比8∶2）洗脫，重復二次，收集洗脫液。蒸干，用5.0mL甲醇定容后，待測。

1.3.2 儀器檢測條件 紫外檢測波長分別是220nm、278nm；流動相A為色譜純乙腈，流動相B為優級純純水；柱溫：35℃；進樣體積：10樣體；A:B為60：40；流速1.0mL/min，保持15min。在此條件下，吡唑醚菌酯和戊唑醇的保留時間分別約為5.2min、9.3min。

2 結果與討論

2.1 標準曲線

值得登廣告為美國近代著名趣劇之一，原名Worthy of an advertisement，曾 在紐約戲院連演二年之久，而賣座之力始終不衰，其價值可想見矣。上海楊樹浦滬江大學西劇社，夙以研究西方藝術著稱，成績斐然。以海上各劇社搬演西劇本改為中文，每多失敗，特就此劇照原本排演，西裝西語，悉存其本來面目，演員皆系該校高材生，英語尤為流利，于劇中精彩處，尤能傳神。去歲，已在該校及美公學校公演兩次，頗受觀眾之歡迎。上星期六，乃假座北四川路愛普盧影戲院開演此劇。……

分別準確稱取吡唑醚菌酯和戊唑醇標準品，用甲醇稀釋，吡唑醚菌酯配制成0.01ug/ml、0.025ug/ml、0.05ug/ml、0.1ug/ml、0.5ug/ml的系列混合標準工作溶液，戊唑醇配制成0.02ug/ml、0.05ug/ml、0.1ug/ml、0.5、1ug/ml的系列混合標準工作溶液，按文中1.3.2中條件進行測定，以進樣濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標繪制標準曲線。吡唑醚菌酯和戊唑醇的標準曲線圖分別見圖1、圖2。

吡唑醚菌酯和戊唑醇的標準曲線方程分別為y=38756x+121.26（R2=0.9999）和y=25193x+460.85（R2=0.9964），表明0.01～0.5ug/mL和0.02～1ug/mL進樣濃度與相應峰面積之間的線性關系良好。

2.2 準確度、精密度和靈敏度

取制備好的空白對照樣品，加入一定量的吡唑醚菌酯和戊唑醇標準溶液，按文中1.3.1中方法進行提取，按1.3.2中條件測定回收率及相對標準偏差。吡唑醚菌酯在香蕉與土壤中的添加水平為0.01～0.2mg/kg；戊唑醇在香蕉與土壤中的添加水平為0.025～0.5mg/kg。每個濃度重復5次。吡唑醚菌酯和戊唑醇在香蕉全焦、香蕉焦肉及土壤上的添加回收圖，見圖3～圖6。

吡唑醚菌酯和戊唑醇在香蕉和土壤上的添加回收色譜圖，見圖1~圖6。添加回收率試驗結果（見表1）表明：當吡唑醚菌酯的添加水平在空白香蕉、焦肉、土壤樣品中為0.01～0.2mg/kg時，其平均回收率為90%～102%，相對標準偏差為0.9%～6.9%；當戊唑醇的添加水平在空白香蕉、焦肉、土壤樣品中為0.025～0.5mg/kg時，其平均回收率為82%～102%，相對標準偏差為1.4%～6.6%,符合農藥殘留分析方法的技術標準要求。通過添加回收試驗，確定吡唑醚菌酯和戊唑醇在香蕉和土壤樣品中方法的檢出限分別為0.01mg/kg、0.025mg/kg；各樣品中2種化合物的最小檢出量分別為0.1ng、0.2ng。所建立方法具有較好的精密度和靈敏度。

圖4 吡唑醚菌酯和戊唑醇香蕉全焦空白樣品（上），加標樣品（下）

2.3 淋洗液

吡唑醚菌酯和戊唑醇在香蕉焦肉中分別加標0.2mg/kg、0.5mg/kg及空白樣品的凈化色譜圖，如圖7所示。由圖7可知，本研究選用CNW/NH2凈化時，上樣后，先用10mL正己烷淋洗去雜質，后分別用正己烷—丙酮（體積比6∶4）和正己烷—丙酮（體積比8∶2）進行洗脫樣品。通過實驗比較發現，2種洗脫液均可與雜質較好分離；但是選用洗脫液正己烷—丙酮（體積比6∶4）較洗脫液正己烷—丙酮（體積比8∶2）洗脫后的目標物的響應值（峰面積）明顯降低，洗脫液正己烷-丙酮（體積比6∶4）正己烷—丙酮洗脫后吡唑醚菌酯和戊唑醇的回收率分別為35%、31%；而洗脫液正己烷—丙酮（體積比8∶2）洗脫凈化后，吡唑醚菌酯和戊唑醇的回收率均能達到90%以上，因此選用正己烷——丙酮（體積比8：2）作為洗脫液。

表1 吡唑醚菌酯和戊唑醇在香蕉全焦、焦肉、土壤中的添加回收率（n=5）

圖5 吡唑醚菌酯和戊唑醇香蕉焦肉空白樣品（A），加標樣品（B）

圖6 吡唑醚菌酯和戊唑醇土壤空白樣品（上），加標樣品（下）

圖7 正己烷——丙酮（體積比6：4）洗脫液（A）和正己烷——丙酮（體積比8：2）洗脫液（B）凈化香蕉焦肉中吡唑醚菌酯和戊唑醇的色譜圖

2.4 色譜柱

經過選擇2種不同的色譜柱進樣時比較發現，當色譜柱為XTERRMS C18(4.6mm×250mm，5um)時，吡唑醚菌酯和戊唑醇的保留時間分別約為6.9min、12.1min；當色譜柱為SunfireTMC18(4.6mm×150mm,5um)均能達到的添加回收時，吡唑醚菌酯和戊唑醇的保留時間分別約為5.2min、9.3min。在同一液相色譜儀上，流動相組成、梯度洗脫方法相同，采用不同的色譜柱，可以導致組分的保留時間差異較大。為了節省進樣時間，提高樣品分析的效率，本方法確定采用SunfireTMC18（4.6mm×150mm，5um）色譜柱進行吡唑醚菌酯和戊唑醇的殘留分析。

3 結論

本研究采用Waters高效液相色譜儀（2489紫外檢測器），經過大量的試驗數據驗證與查看相關文獻，對本研究進行優化對比，建立了一套較為簡便的同時檢測香蕉和土壤中的吡唑醚菌酯和戊唑醇殘留的方法。選用CNW/NH2凈化，凈化雜質少、響應高,凈化時通過比較發現，洗脫液選用正己烷—丙酮（8+2）回收率比正己烷—丙酮（6+4）回收率效果更好，因此確定選用正己烷—丙酮（8+2）為凈化洗脫液；為提高樣品分析的速率，通過選擇兩條長度分別是250mm和150mm的色譜柱進行進樣比較，試驗證明選擇SunfireTMC18（4.6mm× 150mm，5um）進樣吡唑醚菌酯和戊唑醇的保留時間較選擇色譜柱為XTERRMS C18（4.6mm×250mm，5um）進樣吡唑醚菌酯和戊唑醇的保留時間短，因此，選擇 SunfireTMC18（4.6mm×150mm,5um）色譜柱進樣是一種簡便、快捷的同時檢測香蕉中吡唑醚菌酯和戊唑醇殘留分析儀器的方法；采用外標法，通過UPLC定性定量檢測的靈敏度、精密度和回收率等均符合農藥殘留分析的要求。同時也為其他作物中吡唑醚菌酯和戊唑醇殘留分析方法提供了依據。

[1]傅強,聶思橋,任競,等,戊唑醇和吡唑醚菌酯在玉米植株和土壤中殘留及其消解動態的檢測[J].湖南農業大學學報（自然科學版）,2015,41(06)：661-665.

[2]彭埃天,李鑫,劉景梅,等.25%吡唑醚菌酯乳油對香蕉黑星病毒力測定與防治試驗[J].植物保護,2008,34(02):134-137.

[3]趙方方,謝德芳,呂岱竹.香蕉及土壤中吡唑醚菌酯殘留的高效液相色譜分析[J].西北農林科技大學學報（自然科學版）,2016,44(01):97-110.

[4]吳進龍,季穎,傅桂平,等.75%肟菌酯·戊唑醇WG氣相色譜分析[J].農藥,2009, 48(07):498-499.

[5]吳迪,聶向云,張希躍,等.土壤中吡唑醚菌酯的殘留分析方法和消解動態研究[J].農藥科學與管理,2012,33(07):25-28.

[6]張謙,盛翠鳳,譚成俠,等.戊唑醇的液相色譜檢測方法[J].浙江工業大學學報, 2008,36(02):129-132.

[7]閆曉陽,徐金麗,徐光軍,等.高效液相色譜法檢測吡唑醚菌酯在煙葉和土壤中的殘留及消解動態[J].農藥學學報,2013, 15(05):528-533.

[8]吳瓊,林靖凌,張月,等.GC-MS法測定香蕉及土壤中戊唑醇殘留量[J].安徽農業科學,2012,40(30):14779-14781,14813.

[9]朱珠,呂岱竹,袁宏球.氣相色譜—三重四級桿串聯質譜法測定香蕉中戊唑醇殘留[J].熱帶作物學報,2013,34(12):2484-2488.

[10]劉軍,張仙,沈菁,等.液相色譜—質譜法對柑橘中吡唑醚菌酯殘留的檢測[J].湖北農業科學,2014,53(19):4698-4700.

[11]趙方方,謝德芳,張月,等.UPLC-MS/MS法對香蕉果肉中吡唑醚菌酯殘留的測定[J].湖北農業科學,2015,54(10):2477 -2479.

[12]鞏麗萍,李玉杰,丁勃.澤瀉特征圖譜保留時間重現性的研究[J].藥物分析雜志,2011,31(01):141-144.

[13]姚緩緩,段正康,曾航日,等.正相液相色譜保留時間漂移的影響因素和解決辦法研究[J].應用化工,2016,45(06):1184 -1190.

[14]高琳,閻芳.影響高效液相色譜儀保留時間的因素及解決對策[J].畜牧與科學,2012,33(09):20.

[15]張玉榮,劉琦,孫志清.高效液相色譜法相對保留時間和峰高比在毒物篩選中的應用[J].法醫學雜志,1995,11(02):57 -59.

[16]郝衛強,狄斌,楊永兵,等.梯度液相色譜中任意等度、線性和階梯梯度組合下的保留時間公式[J].色譜,2010,28(06):541-546.

[17]NY/T788 2004農藥殘留試驗準則[S].

農業部農藥殘留試驗項目（2015F086）

TQ450.2

A

10.14025/j.cnki.jlny.2017.18.022

王素茹，本科學歷，助理工程師，研究方向：農藥殘留分析。