LXA4、MMP-9和ALDH1在子宮內膜異位癥患者中的表達及臨床意義

張杰 孫小薇 周俊雪 韓紅 雷輝

·論著·

LXA4、MMP-9和ALDH1在子宮內膜異位癥患者中的表達及臨床意義

張杰 孫小薇 周俊雪 韓紅 雷輝

目的觀察脂氧素 A4(LXA4)、基質金屬蛋白酶-9(MMP-9)和乙醛脫氫酶 1 (ALDH1)在子宮內膜異位癥(endometrium，EM)患者中的表達及其臨床意義，以提高臨床早期診斷率。方法選取2011年1月至2015年10月就診并經腹腔鏡及病理檢查診斷為EM的患者128例為觀察組，另選取同期體檢健康女性50例為對照組。采用酶聯免疫吸附法檢測2組血清LXA4、MMP-9、ALDH1水平，觀察其變化情況，分析觀察組患者LXA4、MMP-9、ALDH1水平與疾病分期和痛經評分的相關性。結果觀察組LXA4水平[(298.08±21.14)ng/L]明顯低于對照組[(564.23±40.12)ng/L]，MMP-9[(42.02±9.26)μg/L]、ALDH1水平[(3.24±0.13)ng/L]明顯高于正常對照組[(6.1±1.4)μg/L]、[(0.99±0.23)ng/L]，差異均有統計學意義(P<0.01)。隨著EM分期的升高，患者血清LXA4水平逐漸降低，MMP-9、ALDH1水平逐漸升高，差異均有統計學意義(P<0.01)。隨著痛經程度的加重，患者血清LXA4水平逐漸降低，MMP-9、ALDH1水平逐漸升高，差異均有統計學意義(P<0.01)。結論血清LXA4、MMP-9、ALDH1異常表達與EM的發生、發展有重要的臨床意義，聯合檢測對EM的早期診斷有一定提示意義。

脂氧素 A4；乙醛脫氫酶1；基質金屬蛋白酶-9；子宮內膜異位癥；相關性分析

子宮內膜異位癥(endometrium，EM)是婦科臨床常見的一種育齡女性良性疾病，是指在子宮腔被覆內膜及宮體肌層以外的其他部位，具有生長功能的包括腺體和間質在內的子宮內膜組織，出現與惡性疾病類似的侵襲、種植、擴散和轉移的疾病[1]。腹痛、慢性盆腔疼痛、痛經和腹腔粘連是EM的主要表現，在其約50%的患者中均合并有不孕癥[2]。EM形成學說中多數學者支持子宮內膜種植學說，炎性反應學說和最近提出的干細胞學說等是否在早期診斷EM中具有一定聯系，現多有爭議。免疫脂氧素 A4(LXA4)又稱為炎性反應的內在“剎車信號”，對多種炎性介質和炎性細胞起顯著的負調節作用[3]。Wu等[4]研究指出，基質金屬蛋白酶(MMPs)在EM的發生、發展中起重要作用，其家族幾乎能降解細胞外基質(ECM)中的各種蛋白成分，破壞腫瘤細胞侵襲的組織學屏障，與炎癥、腫瘤生長和轉移等機體多種病理狀態相關。乙醛脫氫酶1(ALDH1)是正常組織干細胞和腫瘤干細胞生長、分化的必需物質，但其是否參與了EM的發生、發展還需進一步尋找證據[4]。LXA4、基質金屬蛋白酶-9(MMP-9)聯合ALDH1檢測是否能作為EM早期診斷的標志物尚不清楚。故本研究通過對比觀察EM患者和健康女性外周血中LXA4、MMP-9、ALDH1水平，以及不同病變程度和不同痛經評分EM患者中LXA4、MMP-9、ALDH1的變化情況，評價上述指標在EM臨床診療中的意義，并進一步探討上述指標在EM發生、發展中的可能作用機制及相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2011年1月至2015年10月保定市競秀區醫院就診并經腹腔鏡及病理檢查診斷為EM的患者128例，作為觀察組。納入標準：患者處于卵泡期，月經規律，至少3個月內患者未給予糖皮質激素及抗生素治療，無吸煙史；排除高血壓病、糖尿病和冠心病等慢性病史，肝炎、結核等傳染性疾病史，婦科惡性腫瘤、其他婦科良性腫瘤和自身免疫性疾病。觀察組年齡26～52歲，平均年齡(43.38±8.85)歲；孕次1～4次，平均(2.12±0.67)次；所有觀察組患者符合EM診斷標準，均采用手術切除后病理檢查確診，依據患者術中腹膜和卵巢異位病變的大小、粘連范圍，采用美國生殖協會分期標準(r-AFS)進行分期，Ⅰ期38例，Ⅱ期40例，Ⅲ期35例，Ⅳ期15例，其中Ⅰ～Ⅱ期為輕度，Ⅲ～Ⅳ其為重度；痛經評分，采用視覺模擬評分法(VAS評分)對患者疼痛程度進行量化，輕度疼痛(0～3分)52例，中度疼痛(4～6分)45例，重度疼痛(7～10分)31例；是否合并腹膜異位病灶中，是47例、否81例。另選擇同期在我院體檢健康女性50例，作為健康對照組，年齡25～48歲，平均年齡(38±8)歲；孕次1～4次，平均(2.56±0.75)次。比較2組患者一般資料差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 標本采集及測定：所有患者采集血樣標本前均禁煙酒、禁食12 h。觀察組患者在入院首日、對照組在健康體檢時抽取空腹靜脈血3 ml，常溫下靜置1 h，3 000 r/min離心，20 min后取上清，-80℃保存于保存箱中。應用Elx800型全自動酶標儀、酶聯免疫吸附法檢測血清LXA4、MMP-9、ALDH1水平，嚴格按照試劑盒(R&D Systems公司)說明進行操作。

1.2.2 痛經評分評定：采用VAS疼痛評分判定，無需服藥記0分；需要服藥，但不影響正常工作和生活，記1～3分；服藥后緩解，但對日常工作有影響記4～6分；服藥后仍嚴重影響工作和生活記7～10分[5]。

1.3 觀測指標 觀察2組血清LXA4、MMP-9、ALDH1水平變化，以及觀察組上述指標變化與患者疾病分期和痛經嚴重程度的相關性。

2 結果

2.1 血清LXA4、MMP-9、ALDH1水平比較 觀察組LXA4水平[(298.08±21.14)ng/L]明顯低于對照組[(564.23±40.12)ng/L]，MMP-9[(42.02±9.26)μg/L]、ALDH1水平[(3.24±0.13)ng/L]明顯高于正常對照組[(6.1±1.4)μg/L]、[(0.99±0.23)ng/L]，差異均有統計學意義(P<0.01)。見表1。

組別LXA4(ng/L)ALDH1(ng/L)MMP?9(μg/L)觀察組(n=128)298．08±21．143．24±0．1342．02±9．26對照組(n=50)564．23±40．120．99±0．236．1±1．4t值30．00810．33228．445P值0．0020．0010．003

2.2 觀察組不同分期患者LXA4、MMP-9、ALDH1水平變化 隨著EM分期的升高，患者血清LXA4逐漸降低，MMP-9、ALDH1逐漸升高，差異均有統計學意義(P<0.01)。見表2。

2.3 觀察組不同痛經程度患者LXA4、MMP-9、ALDH1水平變化 隨著痛經程度的加重，患者血清LXA4逐漸降低，MMP-9、ALDH1逐漸升高，差異均有統計學意義(P<0.01)。見表3。

3 討論

EM 1885年由VonreckLinghausen首次提出并命名，育齡女性中發病率約5%～15%，近年來發病率有上升趨勢[3]。EM根據侵犯部位的不同分為卵巢型子宮內膜異位癥、腹膜型子宮內膜異位癥、深部浸潤型子宮內膜異位癥和其他部位的子宮內膜異位癥。臨床以卵巢子宮內膜異位癥最為多見，約80%病變可累及一側，50%可累及雙側。本病早期為微小病灶，可在卵巢的淺表皮層出現紅色、紫藍色或褐色斑點，隨著病情的進展，異位病灶可侵犯卵巢實質，使反復周期性出血加重，形成巧克力囊腫。腹膜型子宮內膜異位癥以直腸窩、宮骶韌帶、子宮后壁下段最為常見。輸卵管子宮內膜異位癥可使輸卵管與周圍組織粘連并發生扭曲，造成不孕。本病治療較為棘手，無論是保守藥物治療或是手術治療均較難徹底治愈，復發率高，嚴重影響患者的日常生活[6]。

r?AFS分期LXA4(ng/L)ALDH1(ng/L)MMP?9(μg/L)Ⅰ期(n=38)468．37±29．691．63±0．2360．79±8．99Ⅱ期(n=40)352．21±30．262．71±0．36100．31±10．91Ⅲ期(n=35)223．45±21．933．89±0．90166．02±19．48Ⅳ期(n=15)143．52±19．214．95±1．02253．32±25．62F值998．136101．368626．088P值0．0000．0000．000

痛經評分(分)LXA4(ng/L)ALDH1(ng/L)MMP?9(μg/L)0(n=20) 453．13±33．891．63±0．8553．26±8．791～3(n=32)330．03±25．422．48±0．9088．22±12．374～6(n=45)218．26±20．223．78±0．26169．73±21．117～10(n=31)143．09±18．215．08±1．01234．50±23．17F值956．30299．002778．362P值0．0000．0000．000

目前認為EM發病機制復雜，臨床對EM的發病機制有多種學說，子宮內膜種植學是臨床普遍接受的一種學說，但其無法解釋盆腔外異位內膜的種植的發生。目前臨床傾向于各種學說和因素相互補充的結果。總結各學說經驗，本文認為EM是一種致病因素復雜的多基因遺傳性疾病，有研究認為，其與基因異常、環境因素、免疫功能缺陷、損傷修復及超氧化機制等有關。該病發病機制尚不明確，目前多數學者支持經血逆流種植學說，然而文獻報道在血逆流的女性中EM患病率僅為10%～15%[7]。本研究通過對比觀察EM患者和健康女性外周血中LXA4、MMP-9、ALDH1水平，以及不同病變程度和不同痛經評分EM患者中LXA4、MMP-9、ALDH1的變化情況，評價上述指標在EM臨床診療中的意義。

LXA4是一種內源性炎癥消退介質，主要通過跨膜途徑，經酶氧化花生四烯酸催化合成，具有抗炎和促進炎癥消退、抑制組織增生、抗纖維化，以及降低炎癥引發痛覺和水腫的作用[8]。楊璐等[9]對EM的發病機制研究發現，其與炎性反應和血管生長具有密切關系，并且還發現LXA4對EM的發生、發展起到關鍵性作用。有研究發現阻斷 5-脂氧化酶可以減少花生四烯酸生成 LXA4水平，證實5-脂氧化酶是生成5-脂氧化酶的關鍵酶，至于其是否參與EMT還需進一步研究[10]。本研究表明，EM患者血清LXA4水平為(298.08±21.14)ng/L明顯低于對照組的(564.23±40.12)ng/L，差異有統計學意義(P<0.01)；其水平隨著EM疾病分期和疼痛評分的增加而逐漸降低。提示隨著EM疾病分期和患者痛經評分的增加，患者炎性反應加重，導致患者機體相關功能障礙，抗炎能力減弱，使血清LXA4水平降低，進而惡性循環，加重EM病情，故LXA4與EM病情呈負相關，檢測LXA4可反應機體抗炎能力及炎癥的嚴重程度，但進一步作用機制還需更加深入的研究。炎性反應和炎性介質在EM的發生發展中具有重要的作用，故LXA4可能成為早期診斷EM的有用指標，具有良好的臨床檢測意義。

一般認為EM的細胞侵襲和局部或遠程轉移特性，與細胞外基質的降解作用密切相關，而MMPs即是重要的胞外基質分解酶[11]。MMPs屬Zn2+依賴性內肽酶家族，可通過對細胞外基質的降解促進腫瘤細胞的侵襲和轉移。目前已知MMPs至少有24種，MMP-9屬明膠酶類MMPs，又稱明膠酶B，分子量92 kD，可降解Ⅳ型、V型膠原及彈性蛋白等細胞外基質主要成分，參與細胞外基質降解和新血管形成[12]。MMP-9是MMPs家族中分子量最大的明膠酶，來源于結締組織細胞、巨噬細胞、中性粒細胞，能降解ECM中Ⅲ型/Ⅳ型膠原和明膠這三種主要成分；并能促進血管內皮細胞的出芽，導致新生血管生成；同時可通過與整合素的相互活化而加強細胞間的黏附作用，從而在子宮內膜細胞的異位黏附、種植和生長的過程中發揮重要作用[13]。本研究表明，EM患者血清MMP-9水平[(42.02±9.26)μg/L]明顯高于對照組[(6.1±1.4)μg/L]，差異有統計學意義(P<0.01)。研究發現，較正常子宮內膜組織，異位的內膜基質細胞有較強的細胞外基質降解活動，表明異位的子宮內膜有強烈的MMPs活動[7]。有試驗表明，正常情況下MMPs表達較少，且以無活性酶原形式存在，但在炎性細胞因子、激素、生長因子刺激下，其表達量上升及活性增強[14]。新近研究證實，MMP-9可通過和整合素相互活化而加強細胞間的黏附作用，同時促進新生血管形成，從而在子宮內膜細胞的異位黏附、種植和生長過程中發揮重要作用[15]。本研究還表明，患者MMP-9水平隨著EM分期和疼痛評分的增加而逐漸升高。進一步提示，MMP-9與EM病情呈正相關，MMP-9水平越高表示內膜細胞的種植和轉移越多，病情越嚴重。

ALDH1為乙醛氧化的解毒酶，是正常組織干細胞和腫瘤干細胞生長、分化的必需物質，主要參與肝臟對乙醇和體內烷化劑的解毒，可作為正常組織干細胞的標志物[16]。本研究結果表明，觀察組ALDH1水平明顯高于對照組。廉紅梅[17]進行的相關研究表明，在侵襲、轉移和血管形成方面EM內膜與非EM內膜存在明顯差異；同時本研究結果顯示，EM患者血清ALDH1水平[(3.24±0.13)ng/L]明顯高于對照組的(0.99±0.23)ng/L，差異有統計學意義(P<0.01)。提示異常表達的ALDH1可能導致干細胞功能的異常，ALDH1對EM的發生起到決定性作用[18]。本研究還顯示，隨著EM嚴重程度和痛經評分的增加，患者血清ALDH1水平逐漸升高。故本文認為血清ALDH1可能成為EM早期診斷的新標志物，對于監測EM的發生、發展和嚴重程度具有重要的臨床意義[19]。

馬睿等[20]研究顯示，異位內膜組的 LXA4水平明顯低于正常對照組(P<0.01)，ALDH1和PLGF水平明顯高于正常對照組(P<0.01)。隨著EMT分期的升高和痛經評分的增加，LXA4水平明顯降低(P<0.01)，而ALDH1和PLGF水平明顯升高(P<0.01)。認為LXA4、ALDH1和PLGF的異常表達與EMT的發生發展具有重要聯系，聯合檢測對EMT的早期診斷具有重要意義。與本研究結果一致。

綜上所述，血清LXA4、MMP-9、ALDH1異常表達與EM的發生、發展有重要的臨床意義，說明EM的各學說之間存在一定的聯系，聯合檢測對EM的早期診斷有一定提示意義，同時也為子宮內膜異位癥的基因治療和免疫治療等全新療法的探索開辟了更為廣闊的思路。

1 劉丹,張治寧，哈春芳，等.子宮內膜異位癥相關性不孕患者腹腔鏡術后生殖預后的影響因素分析.實用婦產科雜志,2013,29:52-55.

2 張繼紅,張蓉.腹腔鏡治療子宮內膜異位癥合并不孕癥的療效分析.熱帶醫學雜志,2012,12:308-310.

3 Canny GO,Lessey BA.The role of lipoxin A4 in endometrial biology and endometriosis.Mucosal Immunol,2013,6:439-450.

4 Wu R,Zhou W,Chen S,et al.Lipoxin A4 suppresses the development of endometriosis in an ALX receptor-dependent manner via the p38 MAPK pathway.Br J Pharmacol,2014,171:4927-4940.

5 Xu Z,Zhao F,Lin F,et al.Lipoxin A4 inhibits the development of endometriosis in mice:the role of anti-inflammation and anti-angiogenesis.Am J Reprod Immunol,2012,67:491-497.

6 李巧燕,方小玲.MMP-9及TIMP-3在子宮內膜異位癥中的表達及意義.醫學臨床研究,2012,29:831-834.

7 姚余花.血清MMP-9和VEGF在子宮內膜異位癥患者中的表達及臨床意義.亞太傳統醫藥,2010,6:83-84.

8 沈蓉,田永杰.MMP-9、TIMP-1在子宮內膜異位癥患者子宮內膜中的表達及意義.山東醫藥,2006,46:20-22.

9 楊璐,張曉非,楊勇.腫瘤干細胞標記物——乙醛脫氫酶1的研究進展.內蒙古醫學院學報,2012,34:73-77.

10 溫堅,劉頌平,殷新明.乙醛脫氫酶1與子宮內膜異位癥的相關性研究.中國婦幼保健,2013,28:5878-5881.

11 Zhou F,Mu YD,Liang J,et al.Aldehyde dehydrogenase 1:A specific cancer stem cell marker for human colorectal carcinoma.Mol Med Rep,2015,11:3894-3899.

12 楊一也，黃乾生.脂氧素抑制子宮內膜異位癥異位內膜腺上皮細胞炎癥反應.中國衛生產業，2012，9：24-27.

13 劉頌平，殷新明，溫堅.血清CA125聯合ALDH1檢測在子宮內膜異位癥診斷和術后隨訪中的應用.西安交通大學學報(醫學版)，2016,37：578-581.

14 王建芳，劉杰，范偉榮,等.脂氧素A4和5-脂氧化酶在子宮內膜異位癥患者外周血中的表達及意義.中華全科醫學，2014，12：31-34.

15 王建芳，范偉榮，劉杰，等.脂氧素A4受體ALXR在子宮內膜異位癥患者在位及異位子宮內膜組織中的表達及意義.浙江醫學，2014,36：318-320.

16 馮靜.PLGF、IP-10在子宮內膜異位癥患者在位及異位內膜中的表達及相關性研究.河北醫科大學，2008.

17 廉紅梅.基質細胞衍生因子-1及其受體與子宮內膜異位癥的相關性研究.華中科技大學，2008.

18 王琰，張志明，謝紫陽.血清幾丁質酶-3樣蛋白-1和骨橋蛋白與子宮內膜異位癥的相關性研究.新鄉醫學院學報，2013，30：227-229.

19 吳榮鋒.脂氧素抑制雌激素誘導子宮內膜異位癥上皮-間質轉化(EMT)的分子機制研究.廈門大學，2016.

20 馬睿，劉潔，成佳景.LXA4、ALDH1及PLGF在子宮內膜異位癥患者中的表達及意義.同濟大學學報(醫學版)，2016,37：77-80.

項目來源：保定市科學技術研究與發展指導計劃項目(編號：16ZF134)

10.3969/j.issn.1002-7386.2017.19.023

071000 河北省保定市競秀區醫院(張杰)；河北省蠡縣婦幼保健計劃生育服務中心(孫小薇)；河北省定州市人民醫院(周俊雪)；河北省保定市第三中心醫院(韓紅、雷輝)

R 711．74

A

1002-7386(2017)19-2964-04

2017-02-23)