紫外分光光度法測定南天竹莖、葉多糖含量

何 勇，周 婷，陳仕云

(1.合肥華方醫(yī)藥科技有限公司，安徽 合肥 230088；2.合肥學(xué)院 化學(xué)與材料工程系，安徽 合肥 230601；3. 合肥學(xué)院 分析測試中心，安徽 合肥 230601)

紫外分光光度法測定南天竹莖、葉多糖含量

何 勇1，周 婷2，陳仕云3*

(1.合肥華方醫(yī)藥科技有限公司，安徽 合肥 230088；2.合肥學(xué)院 化學(xué)與材料工程系，安徽 合肥 230601；3. 合肥學(xué)院 分析測試中心，安徽 合肥 230601)

以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)樣品，用紫外分光光度法測定南天竹莖、葉多糖含量，并考察了不同濃度的乙醇、不同提取溫度對多糖含量的影響。結(jié)果表明，該方法操作簡單，重復(fù)性好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于南天竹莖、葉多糖含量測定。

紫外分光光度法；南天竹；多糖

多糖普遍存在自然界植物體中，被認(rèn)為非特異性免疫調(diào)節(jié)劑，可激活肌體的免疫活性細(xì)胞，并且在保肝、抗腫瘤、降血糖、降血脂、降膽固醇、以及促進(jìn)胃潰瘍愈合等方面具有顯著的療效。經(jīng)過大量文獻(xiàn)調(diào)研發(fā)現(xiàn)關(guān)于南天竹果實(shí)、莖、葉多糖成分研究未見報道。同時經(jīng)過預(yù)試驗后發(fā)現(xiàn)南天竹莖、葉含有該類成分，為了進(jìn)一步全面開發(fā)利用南天竹，現(xiàn)對其多糖的含量進(jìn)行研究[1]。

南天竹( Nadina domestica Thunb) 為小檗科南天竹屬常綠觀賞小灌木，其根、莖、等均可入藥。根、莖、葉味苦、性寒，有祛風(fēng)、清熱、除濕、化痰等功能; 果實(shí)味酸甘、性平，有斂肺止咳、清肝明目之功能。南天竹含有生物堿、黃酮、木質(zhì)素、多糖等活性成分，趙琳等報道葉、整個植株揮發(fā)性成分的化學(xué)成分[2]。

1 儀器與試藥

V-650型紫外一可見分光光譜儀(日本JASCO公司)， BP211D型十萬分之一電子天平(Sartorius)；離心機(jī)，烘箱，超聲儀，乙醇(華東醫(yī)藥股份有限公司)，濃硫酸，苯酚，葡萄糖；所用試劑均為分析純。

藥材來源：南天竹莖、葉釆于合肥大蜀山，經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院吳德玲教授鑒定為小檗科南天竹屬植物南天竹( Nadina domestica Thunb)的莖、葉 。

2 試驗方法和結(jié)果

2.1 5%苯酚溶液的配制

取苯酚50 g，加鋁片0.5 g和碳酸氫鈉0.025 g，常壓蒸餾，收集182 ℃餾分。稱定該餾分5 g，置100 mL棕色容量瓶(苯酚見光易分解，不能用透明容量瓶)中，加去離子水至刻度線，搖勻后，置于冰箱中冷藏儲存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 樣品溶液的制備

分別取南天竹莖和葉粗粉，置于索氏提取器中，加石油醚回流提取，濾渣揮干。取適量濾渣用蒸餾水回流提取，過濾，濃縮，加入無水乙醇使溶液含乙醇體積分?jǐn)?shù)至80%，靜止過夜，離心得沉淀，70℃真空干燥即得南天竹莖和葉粗多糖[3-5]。

取上述粗多糖加蒸餾水溶解后，用Sevage試劑除去蛋白質(zhì)后，以醇沉法加入乙醇溶液使溶液含乙醇體積分?jǐn)?shù)至80%，冰箱中靜置冷藏24 h，靜止過夜，離心得沉淀，70℃真空干燥即得南天竹莖和葉多糖[1]。

2.3 對照品溶液的配制

取105 ℃ 干燥至恒重的葡萄糖101.8 mg，精密稱定，置于100 mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 測定波長的選擇[6-7]

分別取南天竹樣品溶液和葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液各1mL，分別加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%苯酚溶液1.0 mL、濃硫酸(質(zhì)量分?jǐn)?shù)95%～98%) 5.0 mL，搖勻后置于沸水中加熱15min，冷卻至室溫。分別在紫外分光光度計上于200～750 nm范圍內(nèi)進(jìn)行全波長掃描，結(jié)果對照品與樣品溶液在490nm處均有最大吸收，且試劑空白和不加顯色劑的樣品溶液在490 nm處均無吸收，故確定490 nm為檢測波長。結(jié)果見圖1、圖2。

圖1 葡萄糖對照品紫外掃描圖

Fig.1 The UV scanning figure of reference substance

圖2 南天竹莖樣品紫外掃描圖

2.5 線性關(guān)系考查

精密吸取葡萄糖對照品溶液1, 2, 3, 4, 5 mL。按2.4項下的方法測定，以試劑空白為對照，在490 nm波長處測定吸光度，分別為：0.139、0.268、0.402、0.551、0.690。以葡萄糖濃度為橫坐標(biāo)，吸收度為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y=0.0155X，相關(guān)系數(shù)r=0.9994(n=5)。實(shí)驗表明：葡萄糖對照品在濃度9.04～44.20μg/mL范圍內(nèi)與吸收度呈良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度實(shí)驗

精密吸取葡萄糖對照品溶液適量，按2.4項下的方法處理測吸收度，重復(fù)測定5次，分別為：0.499、0.498、0.498、0.499、0.498，其RSD值為0.10%，表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗

精密吸取南天竹莖樣品溶液適量，按2.4項下的方法每隔20min測定一次吸收度，直至60min，分別為：0.418、0.417、0.416、0.414、0.413，其RSD值為0.207%，表明樣品液60min內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性實(shí)驗

取南天竹莖粗粉樣品適量，精密稱定，共6份，按2.2項下的方法處理并測定樣品中多糖的含量，結(jié)果南天竹莖樣品多糖平均含量為1.84%，RSD值為1.09%，表明重復(fù)性良好。

2.9 回收率實(shí)驗

取已知含量的南天竹莖粗粉樣品6份，精密稱定。定量加入葡萄糖對照品溶液，按2.4項下的方法步驟操作，計算平均回收率為99.56%， RSD值為0.70%，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率(n=6)Table 1 Recovery Test(n=6)

表1(續(xù))

2.10 樣品含量的測定

取南天竹莖、葉粗粉各3份，每份分別稱取4g，按樣品制備方法制備成樣品溶液，按2.4 項下的方法測定吸光度，計算含量，得多糖平均含量分別為：南天竹莖為0.49%，南天竹葉1.81%。

3 小結(jié)與討論

南天竹莖為0.49%，南天竹葉1.81%。該方法準(zhǔn)確可靠、結(jié)果穩(wěn)定、重現(xiàn)性好，可用于南天竹莖、葉多糖的含量測定。通過實(shí)驗表明，采集的南天竹莖、葉樣品提取液顯色后隨著放置時間的延長多糖類成分的含量幾乎不變，這一現(xiàn)象說明該顯色方法很穩(wěn)定，本實(shí)驗為多糖類進(jìn)一步研究提供了基礎(chǔ)。

多糖普遍存在自然界植物體中，被認(rèn)為非特異性免疫調(diào)節(jié)劑，可激活肌體的免疫活性細(xì)胞，并且在保肝、抗腫瘤、降血糖、降血脂、降膽固醇、以及促進(jìn)胃潰瘍愈合等方面具有顯著的療效，是具有應(yīng)用價值的一類生物活性物質(zhì)[8]。

[1] 李知敏,王伯初,周 菁,等.植物多糖提取液的幾種脫蛋白方法的比較分析[J]. 重慶大學(xué)學(xué)報,2004,27(8):57-59.

[2] 劉錦春.南天竹資源利用與開發(fā)研究[J].中國野生植物資源,2004,23(6):22-23.

[3] 陳仕云,吳德玲,金傳山,等.山核桃外蒲殼化學(xué)成分初步分析及總黃酮含量測定[J].安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2010(1):64-66.

[4] 沈炳香,吳德玲,陳仕云,等.山核桃外蒲殼總皂苷的含量測定[J].安徽醫(yī)藥,2009(5):513-515.

[5] 周 菁,王伯初,王 陽.浮萍多糖總糖含量測定[J].重慶大學(xué)學(xué)報,2005,28(10):111-114.

[6] 孫廷芳,梁宗鎖,單長卷,等.野生酸棗果硒多糖純化與光譜分析[J].農(nóng)業(yè)機(jī)械學(xué)報,2011,42(6):148-151.

[7] 吳德玲,陳仕云,劉勁松,等.山核桃外蒲殼化學(xué)成分及抗腫瘤活性研究[J].中藥材,2011(7):1055-1057.

[8] 田冰梅,謝曉梅,沈盼盼,等.分級醇宣木瓜多糖含量、分子量測定和活性初步研究[J].光譜學(xué)與光譜分析,2015,35(5):1331-1334.

(本文文獻(xiàn)格式：何 勇，周 婷，陳仕云.紫外分光光度法測定南天竹莖、葉多糖含量[J].山東化工,2017,46(11):114-116.)

Determination of the Polysaccharide Content in Nandina Domestica Stem and Leaf by UV spectrophotometry

HeYong1,ZhouTing2,ChenShiyun3*

(1.Hefei Huafang Pharmaceutical Science & Technology Co.,Ltd.,Hefei 230088,China;2. Department of Chemical and Materials Engineering,Hefei University, Hefei 230601,China;3. Analytical & Testing Center, Hefei University, Hefei 230601,China)

Using Glucose as the standard sample, the Polysaccharide Content in Nandina Domestica Fruit、Stem and Leaf is determined using UV-spectrophotometry, and examines the different concentrations of ethanol extraction temperature on the influence of the content of polysaccharide. It shows that The UV-spectrophotometry method is simple, accurate and sensitive, which can be used as a method for the Polysaccharide in Nandina Domestica Stem and Leaf .

UV-spectrophotometry; Nandina Domestica; polysaccharide

2017-04-11

何 勇(1982—)，男，碩士研究生，助理研究員，從事新藥研發(fā)；通訊作者：陳仕云(1981-)，女，安徽鳳陽人，助理研究員，主要從事新藥研發(fā)。

O657.32

A

1008-021X(2017)11-0114-03