H5N1亞型禽流感(Re-6+Re-7)疫苗在雞群的免疫抗體消長規律

羅江華 吳朝芳 盧黎明 樊莉 徐弘 鮑偉華/浙江省寧波市畜牧獸醫局

孫鵬烈/浙江省寧波市鄞州區畜牧獸醫站

吳銀麗/浙江省寧海縣畜牧獸醫局

H5N1亞型禽流感(Re-6+Re-7)疫苗在雞群的免疫抗體消長規律

羅江華 吳朝芳 盧黎明 樊莉 徐弘 鮑偉華/浙江省寧波市畜牧獸醫局

孫鵬烈/浙江省寧波市鄞州區畜牧獸醫站

吳銀麗/浙江省寧海縣畜牧獸醫局

高 致 病 性 禽 流 感(Highly pathogenic avianinfluenza，HPAI)是由正粘病毒科流感病毒屬A型禽流感病毒(AIV)引起的禽類高度接觸性、急性傳染病。OIE將其列為應報告動物傳染病。AIV分為若干亞型，其中H5、H7亞型多為高致病性強毒株，最近的研究表明，H5型禽流感病毒與以前相比已經更容易使哺乳動物致病，并更廣泛的在鳥類中傳染,到目前為止，已經發現了感染禽流感病毒的貓、老虎和雪豹，禽流感的宿主范圍變得越來越廣。HPAI不僅對家禽業造成重大經濟損失，并可直接感染人，具有重要的公共衛生意義。世界不同國家采取撲殺或疫苗免疫進行有效防控HPAI，我國H5N1亞型禽流感滅活疫苗對雞和水禽均具有良好的免疫效果。根據AIV株的變異趨勢，2014年我國對H5N1亞型禽流感疫苗病毒株進行了調整，采用Re-7疫苗病毒株代替之前使用的Re-4疫苗株制備。本研究選擇了某雞場進行新H5N1亞型重組禽流感(Re-6+Re-7)滅活疫苗的臨床免疫試驗，通過跟蹤檢測疫苗免疫后抗體變化情況，了解該二價疫苗免疫后的抗體消長規律和特點，評估其對Re-6和Re-7毒株的防控效果。

一、材料和方法

1．主要實驗材料及實驗動物。

重組H5N1亞型AIV滅活疫苗 (Re-6+Re-7)(批 號：2014001)購自遼寧益康生物股份有限公司2012006)和H5N1亞型禽流感Re-6、Re-7、Re-4株滅活血凝抗原及陽性對照血清，購自哈爾濱維科生物技術開發公司。選取鄞州區集士港鎮某雞場的三黃雞(1 500只)進行實驗。

2.抗體檢測方法及判定標準。

抗體檢測采用國家標準《高致病性禽流感診斷技術》(GB／T 18936—2003)中血凝(HA)和血凝抑制(HI)試驗方法。通過log2的指數均值計算平均HI抗體效價，以每份樣品的禽流感免疫抗體水平≥41og2為合格，并計算免疫合格率。

3.分組及實驗設計。

在32日齡時隨機抽取30只雞采血，之后將雞群在33日齡、63日齡2次重組H5N1亞型二價滅活疫苗(Re-6+Re-7)免疫(以下簡稱二價疫苗(Re-7+Re-6)。按照說明書規定劑量進行免疫。實驗雞群分別在48日齡、63日齡（二免前）、84日齡、115日齡、147日齡、205日齡時隨機抽取30只雞采血分離血清測抗體。實驗雞血清均采用HI試驗檢測H5N1亞型禽流感Re-7、Re-6、Re-4抗體。

二、結果

1.雞免疫試驗結果。

33日齡隨機抽取30只雞檢測Re-6、Re-7母源抗體合格率分別為12.5%和0%，可見母源抗體對二價疫苗(Re-6+Re-7)的影響已經處于比較低的水平。從檢測數據看，一免后15天Re-6和Re-7免疫抗體合格率分別為63.33%和60.00%，而且免疫抗體繼續上升，到二免前分別達到了93.33%和90.00%，二面后直到第205日齡，免疫抗體都在96%以上（詳細結果見表1、表2）。

同時本試驗中還對Re-4毒株非免疫抗體進行了檢測，顯示該類型母源抗體在33日齡時仍處于比較高的水平，且二免前抗體合格率變化不大，二免后則快速上升并維持較高水平，最高時（二免后七周）90%以上（詳情見表3）。

表1 雞群Re-6免疫抗體檢測結果（log2）

表2 雞群Re-7免疫抗體檢測結果（log2）

表3 雞群Re-4免疫抗體檢測結果（log2）

三、討論

本研究采用H5N1亞型禽流感二價疫苗（Re-6+Re-7）對1500只雞群進行免疫實驗，通過分析免疫抗體水平檢測評估表明，采用H5N1亞型禽流感二價疫苗（Re-6+Re-7），在試驗中能誘導出較高的免疫抗體，表現出良好的抗原性和免疫效果。免疫抗體跟蹤檢測結果顯示該二價苗在二免前Re-6和 Re-7抗體合格率都可以達到90%以上，且兩種抗體90%以上保護率長達205 d。研究也發現，免疫抗體評價最好在首免三周以后采血檢測，才能真實評價該疫苗的免疫效果，否則可能會出現免疫效果達不到標的現象。

鑒于實驗中含有的Re-7毒株疫苗和之前使用的Re-4毒株疫苗同屬一個分支，親緣關系較近，因此本次實驗中將Re-4抗體列入調查對象，結果顯示，33日齡時，該批雞群的Re-4母源抗體還處于比較高的水平，為31.25%，說明雞群的父母代經過了Re-4毒株疫苗的良好免疫。實驗過程中發現了一個奇怪的現象，二免前該抗體合格率變化不是很大，二免后合格率水平則大幅上升，并維持比較高的水平，最高時（二免后七周內）甚至在90%以上。因此對于Re-7和Re-4疫苗之間是否存在交叉免疫保護等現象，還有待于我們繼續研究。

不過由于本次實驗數據都是建立在對1 500只雞群的免疫評估基層之上，每批抽樣采血的都是隨機抽取的，不排除存在雞個體差異及其他因素在實驗過程中造成的誤差，因此實驗數據都只是實驗評估數據，但本法是基層工作中常用的免疫評估方法，通過本次實驗可以得出，此種免疫評估方法在基層實際工作中具有一定的科學性和可行性，能夠滿足基層免疫效果評價的要求。

另外，通過實時檢測雞群母源抗體的方式，是一個行之有效的首免日齡確定方法，這樣能有效減少免疫次數及免疫低效等問題，提高我們日常生產中防疫工作的效果。

（略）