青海貴德地區豬圓環病毒2 型感染調查

劉秀清，董永森，張春霞，解秀梅，傅義娟

（1.青海畜牧獸醫職業技術學院，青海 湟源 812100；2.青海省動物疫病預防控制中心，青海 西寧 810001）

青海貴德地區豬圓環病毒2 型感染調查

劉秀清1，董永森1，張春霞1，解秀梅1，傅義娟2

（1.青海畜牧獸醫職業技術學院，青海 湟源 812100；2.青海省動物疫病預防控制中心，青海 西寧 810001）

為了解青海貴德地區豬群中豬圓環病毒2型（PCV2）的感染狀況，本研究應用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）對采自該地區2個豬場的73份血清樣品進行了PCV2抗體檢測，采用熒光PCR技術對45份豬病料樣品進行了PCV2病毒核酸檢測。結果顯示：PCV2抗體檢測的平均陽性率為95.89%，豬病料PCV2病毒核酸檢測的陽性率為100%。

豬圓環病毒2型；流行病學；ELISA；PCR

豬圓環病是由圓環病毒引起的豬的一種傳染病。豬圓環病毒（PCV）是圓環病毒屬的成員之一，可以分為2種血清型，即PCV1和PCV2，其中PCV2對豬的危害更大[1]。PCV2主要侵害機體的免疫系統，導致感染豬免疫抑制，對其他病原的抵抗力下降，容易引起其他病毒和細菌的繼發感染，給養豬業帶來巨大的經濟損失[2]。為了有效控制該病在豬場的感染，就要定期對該病進行流行病學調查，只有掌握該病在豬場和一個地區的發病狀況，才能采取科學的防控措施。本研究采用間接ELISA方法對采自青海省貴德地區兩個豬場的73份血清樣品進行了PCV2抗體檢測，用熒光PCR技術對采集的45份豬病料樣品進行了PCV2病毒核酸檢測。旨在了解貴德地區PCV2的流行情況，為該地區有效防控PCV2感染，促進養豬業健康發展提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 樣品來源與處理 2015年4月，從青海省貴德縣兩個豬場（A豬場和B豬場）采集了73份血液樣品和45份豬病料樣品（肺和淋巴結），所有的檢測樣品均于-20℃保存備用。

1.2 檢測試劑 豬圓環病毒2型抗體酶聯免疫檢測試劑盒（生產批號：PCV 20150708E），豬圓環病毒2型實時熒光PCR檢測試劑盒（批號：PCV2 20150701P），生產廠家為北京世紀元亨動物防疫技術有限公司。

1.3 主要儀器設備 ABI7500熒光定量PCR儀，A-64R高速冷凍離心機，AC2-6S1生物安全柜，BIORAD美國伯樂iMark酶標儀等。

1.4 試驗方法

1.4.1 豬圓環病毒2型ELISA抗體檢測 按試劑盒說明書操作方法進行，具體結果判定如下：

（1）試驗結果同時符合下列條件方為有效：兩孔陰性對照OD450平均值應≤0.15；每孔陽性對照OD450值均≥0.60。臨界值的計算：臨界值=陽性對照孔OD450均值×0.25。

（2）結果判定：被檢樣品OD450值＜臨界值,為PCV2抗體陰性；樣品OD450值≥臨界值，為初試PCV2抗體陽性。初試陽性的樣品應再進行雙孔復試，若任意一孔或兩孔均為陽性，則視為PCV2抗體陽性；若兩孔均為陰性，則視為PCV2抗體陰性。

1.4.2 豬圓環病毒2型實時熒光PCR檢測 設被檢樣品、陰性對照和陽性對照總和為N,則反應體系配制如表1所示。

表1 熒光PCR檢測反應體系

將以上反應體系充分混勻后，分裝到每個反應管中各18μL。分別取2μL模板DNA，加入相應反應管中，混勻，并做好標記。在熒光PCR擴增儀上進行反應：95℃ 2min；95℃ 5s，60℃ 35s，共 40次循環，每次循環的第二步（60℃ 35s）收集熒光信號（報告基團“FAM”，淬滅基團“None”）。

結果判定：陽性對照Ct值≤30并出現特定的擴增曲線，陰性對照無Ct值且無特定擴增曲線，試驗結果成立。被檢樣品Ct值≤30并出現特定擴增曲線，視為PCV2核酸陽性；被檢樣品Ct值在30～37之間并出現特定擴增曲線，需重新取樣提取DNA擴增后判定，如仍是可疑，則判為陽性；被檢樣品Ct值≥37時，超過本方法檢測靈敏度范圍，判為陰性；對于某些未呈現S型曲線，但本底較高的樣品，應判為陰性。

2 結果與分析

2.1 豬血清PCV2抗體檢測結果 在被檢的73份血清中，采用ELISA方法共檢出PCV2抗體陽性血清70份，平均陽性率為95.89%。其中A豬場被檢血清的PCV2抗體陽性率為100%，B豬場為95.0%。

2.2 實時熒光定量PCR檢測結果 45份豬組織病料中均檢測出PCV2病毒核酸呈陽性，PCV2豬群陽性率高達100%，說明本地區豬群有PCV2感染。

3 討論

3.1 從熒光定量PCR檢測結果可以看出，PCV2在貴德地區的豬場和豬群中廣泛存在，與文獻[3-4]報道的“PCV2感染廣泛存在于國內豬群中”一致。高于李菊梅等[5]報道的青海省部分地區豬圓環病毒2型感染陽性率為47.58%（108/227）。與賴笑嫻等[6]采用熒光定量PCR方法對廣東省部分地區PCV2疑似病例進行檢測的結果（陽性率為97.9%）較為接近。這可能與檢測方法有關，因為熒光定量PCR的靈敏度比普通PCR的靈敏度要高很多；也可能與近幾年豬圓環病毒病發病率呈現暴發式增長有關。

3.2 豬圓環病毒2型危害較大，往往伴隨其他一系列病毒或細菌感染。例如，可以引起豬圓環病與偽狂犬病的混合感染、豬圓環病與細小病毒病的混合感染等。PCV2感染及其引發的疾病已經成為全球養豬產業的一大問題，這是繼豬繁殖與呼吸綜合征之后出現的又一重大生豬疫病。對豬圓環病的控制不僅要做好豬場的衛生消毒工作、降低或避免應激因素、提高飼養管理水平、改善斷奶仔豬營養等，還要采取藥物預防方案加以控制，比如對副豬嗜血桿菌、豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌、豬鏈球菌等繼發感染的控制，最大限度地降低豬群死亡率，減少經濟損失。

[1]陳薄言，王川慶.獸醫傳染病學[M].5版.北京：中國農業出版社，2015：231-233.

[2]李超，魏建忠，凌英濟，等.安徽省豬圓環病毒2型感染的流行病學調查[J].中國微生態學雜志，2010，22（4）：330-336.

[3]陳潔，金爾光，郭一，等.豬圓環病毒感染相關疾病及防控措施[J].現代農業科技，2010，21（2）：363-364.

[4]趙樸，趙坤，李任峰，等.一株豬圓環病毒2型的分離與分子鑒定[J].河南農業科學，2011，40（7）：155-157.

[5]李菊梅，王明輝，程思樂，等.青海省部分地區豬圓環病毒2型感染的病原學調查[J].畜牧與獸醫，2015，47（10）：155-156.

[6]賴笑嫻，洪偉彬，李永福，等.廣東省部分地區豬圓環病毒2型流行病學調查[J].黑龍江畜牧獸醫，2014（11下）：80-81.

Infection Survey of Porcine Circovirus Type 2 in Guide Region

Liu Xiuqing1，Dong Yongsen1，Fu Yijuan2，et al.
（1.Qinghai Vocational and Technical College of Animal Husbandry and Veterinary Medicine，Qinghai Huangyuan 812100；2.Animal Disease Prevention and Control Center of Qinghai Province，Qinghai Xining 810001，China）

To understand the infection situation of porcine circovirus type 2（PCV 2）in the area of Guide，PCV 2 antibody had been detected in 73 serum samples from 2 pig farms by ELISA，and viral nucleic acid of PCV 2 had been detected in 45 tissue samples by fluorescence PCR.The results showed that the average positive rate of PCV 2 antibody was 95.89%，the positive rate of pathogen tissue samples was 100%.

Porcine circovirus type 2；Epidemiology；ELISA；PCR

S852.659.2

B

1001-8964（2017）09-0032-03

2017-05-24

劉秀清（1967-）,女，河南人，教授，碩士，主要從事預防獸醫學的教學與研究。