加巴噴丁有關物質(zhì)檢測方法的優(yōu)化

許麗麗

摘 要：目的：優(yōu)化加巴噴丁有關物質(zhì)檢測方法。采用HPLC方法檢測加巴噴丁，二酰胺（雜質(zhì)1）、二酸（雜質(zhì)2）、二氰（雜質(zhì)3）、內(nèi)酰胺（雜質(zhì)4）、亞酰胺（雜質(zhì)5）的含量。用漢邦VP-ODS柱；乙腈-磷酸鹽緩沖液為流動相，梯度洗脫；流速：0.85ml/min；λ：210nm；柱溫：40℃；進樣量：20ul。

關鍵詞：加巴噴丁；含量；HPLC法

加巴噴丁是一種新穎抗癲癇藥，它通過改變GABA代謝產(chǎn)生藥理作用。中國藥典[1]中加巴噴丁的質(zhì)量標準，只控制一個內(nèi)酰胺的含量，誤差較大。本文根據(jù)USP29[2]建立了HPLC法測定加巴噴丁有關物質(zhì)的方法，該法準確、分離度好，靈敏度高，可以很好的控制質(zhì)量。

一、儀器與試劑

Agilent 1100型高效液相色譜儀；梅特勒十萬分之一天平；乙腈和甲醇為美國TEDIA公司的色譜純?nèi)軇涣姿岫溻浐蜌溲趸洖樯虾Ａ璺寤瘜W試劑有限公司的分析純試劑；去離子水為Millipore超純水系統(tǒng)制備。

二、確定方法

比較了漢邦VP-ODS，Agilent ZORBAX SB-C18和依利特Hypersil ODS色譜柱，結(jié)果表明漢邦VP-ODS色譜柱，分離度高，峰型好。

色譜柱：漢邦VP-ODS（ 250mm×4.6mm，5μm）；λ：210nm；流速：1.3ml/min；柱溫：40℃；進樣量：20ul；稀釋劑：1.2mg/ml磷酸二氫鉀溶液，用5mol/L KOH溶液調(diào)PH至6.9；流動相A：940ml水溶解1.2g磷酸二氫鉀，并用5mol/L KOH溶液調(diào)PH至6.9，加入60ml乙腈，混勻；流動相B： 700ml水溶解1.2g磷酸二氫鉀，用5mol/L KOH調(diào)PH至6.9，加入300ml乙腈，混勻。梯度洗脫：0-7min流動相A為100%，7-45min內(nèi)流動相A由100%勻速降到0，流動相B由0勻速升到100%，15.4-48min內(nèi)流動相A保持0，流動相B 保持100%。

檢測方法：分別精密稱取加巴噴丁、雜質(zhì)1、雜質(zhì)2、雜質(zhì)3、雜質(zhì)4和雜質(zhì)5對照品適量置于同一容量瓶中，用稀釋劑稀釋成含加巴噴丁、雜質(zhì)1、雜質(zhì)2、雜質(zhì)3、雜質(zhì)4和雜質(zhì)5對照品濃度均為0.007 mg/ml，作為對照品溶液。精密稱定350mg加巴噴丁，放入25ml容量瓶中，用稀釋劑溶解至刻度，作為供試品溶液。

三、方法驗證

（一）專屬性試驗 分離度≥1.5；理論塔板數(shù)≥3000。

分別配制加巴噴丁、雜質(zhì)1、雜質(zhì)2、雜質(zhì)3、雜質(zhì)4、雜質(zhì)5對照品的單個溶液和混合溶液，照“2”項下色譜條件進樣，出峰順序為：加巴噴丁、雜質(zhì)1、雜質(zhì)2、雜質(zhì)3、雜質(zhì)4、雜質(zhì)5。分離度分別為3.10、7.08、19.26、16.34、3.26；理論塔板數(shù)分別為14703、10389、4066、37067、204778、185973。

（二）定量限和檢測限 定量限信噪比約在10：1，檢測限信噪比約在3：1。

取專屬性項下的單個溶液適量，用稀釋劑逐步稀釋至信噪比為3：1和10：1，加巴噴丁、雜質(zhì)1、雜質(zhì)2、雜質(zhì)3、雜質(zhì)4和雜質(zhì)5的檢測限（?g/ml）分別為0.677、0.00671、0.431l、0.00944、0.0577、0.0117；加巴噴丁、雜質(zhì)1、雜質(zhì)2、雜質(zhì)3、雜質(zhì)4和雜質(zhì)5的定量限（?g/ml）分別為2.032、0.0201、1.293l、0.0283、0.173l、0.0350。

（三）線性關系 R≥0.995

分別精密稱取加巴噴丁和各雜質(zhì)對照品適量置于同一容量瓶中，用稀釋劑稀釋成含加巴噴丁和各雜質(zhì)分別為0.014 mg/ml的溶液。分別精密量取上述溶液2ml，3ml，4ml，5ml，6ml，置10ml的量瓶中，用稀釋劑稀釋至刻度。照“2”項下條件進樣，記錄譜圖。加巴噴丁、雜質(zhì)1、雜質(zhì)2、雜質(zhì)3、雜質(zhì)4和雜質(zhì)5有關物質(zhì)測定線性范圍考察的相關系數(shù)R分別為：0.9979、1、0.9997、0.9997、1、1。

（四）精密度試驗 RSD%≤2.0%

分別取加巴噴丁和各雜質(zhì)照品適量置于同一容量瓶中，用稀釋劑配制成濃度均為0.007mg/ml的對照品溶液。取對照品溶液40?l連續(xù)進樣6次，記錄譜圖，加巴噴丁、雜質(zhì)1、雜質(zhì)2、雜質(zhì)3、雜質(zhì)4和雜質(zhì)5各自6針圖譜峰的RSD（%）分別為：0.95、0.10、0.64、0.17、0.09、0.13。

（五）樣品測試

標準[2]：加巴噴丁各雜質(zhì)≤0.05%；其他單雜≤0.05%；總雜≤0.25%；小于0.03%的雜質(zhì)可忽略不計。

照“2”項下的方法測定加巴噴丁三批樣品的有關物質(zhì)，結(jié)果201300701中檢出（雜質(zhì)4）0.01%，雜質(zhì)1、雜質(zhì)2、雜質(zhì)3、雜質(zhì)5、其他雜質(zhì)均未檢出，總雜質(zhì)含量為0.01%；20130702中檢出（雜質(zhì)4）0.01%，其他雜質(zhì)0.01%，雜質(zhì)1、雜質(zhì)2、雜質(zhì)3、雜質(zhì)5均未檢出，總雜質(zhì)含量為0.02%；20130703中檢出（雜質(zhì)4）0.01%，雜質(zhì)1、雜質(zhì)2、雜質(zhì)3、雜質(zhì)5、其他雜質(zhì)均未檢出，總雜質(zhì)含量為0.01%。

四、總結(jié)

研究結(jié)果表明，本方法專屬性、重現(xiàn)性、線性均良好，且加巴噴丁和各雜質(zhì)的檢測限都較小，能夠較好的檢出，該方法方便快捷，可以準確的測定加巴噴丁中有關物質(zhì)的含量。

參考文獻：

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].中國醫(yī)藥科技出版社.2015.6.5

[2]美國藥典委員會.美國藥典[S].化學工業(yè)出版社.2013.6endprint