肺結核患者肺泡灌洗液及外周血中T淋巴細胞亞群的表達

尤英霞，閆莎莎，黃慶紅，常慧瀾

(鄭州市第六人民醫院 呼吸三科，河南 鄭州450000)

肺結核患者肺泡灌洗液及外周血中T淋巴細胞亞群的表達

尤英霞，閆莎莎，黃慶紅，常慧瀾

(鄭州市第六人民醫院 呼吸三科，河南 鄭州450000)

肺結核的發病原因與機體的免疫功能有著密切關系，結核患者外周血免疫功能檢測的報道較多，對于肺泡灌洗液的T淋巴細胞水平的研究相對較少[1]。本研究采用流式細胞儀對60例肺結核患者及40例健康體檢者肺泡灌洗液(BALF)及外周血中T細胞亞群表達水平進行檢測，現將結果報告如下。

1 資料與方法

1.1臨床資料

選取本院2015年1月-2016年6月收治的60例肺結核患者及40例健康體檢者為研究對象，分為觀察組和對照組。觀察組中男37例，女23例，年齡23-72歲，平均年齡(43.23±14.34)歲。患者入選標準：(1) 入選者均符合《肺結核診斷和治療指南》中的診斷要求；(2) 有咳嗽、咳痰、低熱及痰中帶血等癥狀；(3) X光檢查可見肺部斑片狀陰影；(4) 患者入院前未接受過抗結核病的治療；(5) 患者均知情同意并簽署知情同意書。對照組40例為健康體檢者，其中男23例，女17例，年齡21-68歲，平均年齡(42.09±13.76)歲。入選標準：(1) 對照組患者無肺結核類相關癥狀；(2) 痰液結核分枝桿菌涂片及培養均陰性；(3) X胸片檢查無肺結核病灶出現。排除標準：(1) 并發其他嚴重疾病的患者，包括心腦血管疾病、腫瘤癌癥等；(2) 患有精神類疾病的受試者；(3) 妊娠和哺乳期婦女。組間患者在基線資料比較無差異性，P>0.05。

1.2 方法

患者在入院當天采集3 ml外周靜脈血，保存在肝素鈉抗凝管中。2 h內處理外周血樣品，5 000 rpm離心10 min后，然后進行T細胞各項亞群細胞的檢測。肺泡灌洗采用纖支鏡在患者的肺部病變部位進行操作。操作前進行局部麻醉，采用奧林巴斯電子氣管鏡經口插入，其頂端緊密鍥入病變段處(健康受試者統一灌洗右肺上葉)，由灌洗導管將30 ml生理鹽水分次快速注入肺泡內，通過負壓吸引回收，其回收率應不小于40%。除去肺泡灌洗液中的粘液并加入到硅塑瓶內，兩小時內送檢完畢。采用賽默飛Attune○RNxT 聲波聚焦流式細胞儀對收集的樣品進行T淋巴細胞亞群(CD3、CD4、CD8細胞)的檢測分析，相關的單抗試劑盒均購置于美國賽默飛公司，相關檢測操作均按照說明書嚴格進行。

1.3 統計學方法

數據處理采用SPSS 20.0進行相關操作，組間計量資料以均數±標準差表示，用t檢驗進行分析，P<0.05差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者BALF和外周T細胞對比

治療前兩組BALF和外周血中CD3、CD8比較無差別，P>0.05；觀察組BALF及外周血中CD4、CD4/CD8低于對照組，P<0.05，結果見表1。

2.2 觀察組不同治療時間BALF和外周血T淋巴細胞水平比較

觀察組治療1個月后 CD4細胞水平升高，3個月后BALF和外周血中CD4、CD4/CD8水平比治療前升高，P<0.05，結果見表2。

表1 兩組患者BALF和外周血T淋巴細胞水平比較

注：與對照組相比，*P<0.05

表2 觀察組不治療時間BALF和外周血T淋巴細胞水平比較

注：與治療前相比，*P<0.05。

3 討論

近幾年隨著分子免疫學和細胞生物學科的快速發展， T細胞亞群在結核病發病過程中的重要作用得到確認[2]。CD4T淋巴細胞是一種輔助性的亞細胞群體，在肺結核免疫機制中占據重要地位，其水平值的降低提示機體有患肺結核的可能[3]。CD8細胞與CD4細胞有著相反的免疫效應，其水平值的增高提示疾病的病情加劇，治療周期延長、增加治療難度。對于肺結核患者T淋巴細胞的檢測，常規外周靜脈血的免疫細胞水平檢測特異性不強，肺泡灌洗液可以較為準確的對患者的肺部免疫功能進行評價。丁士標等人[4]采用肺結核患者的肺泡灌洗液進行T淋巴細胞免疫功能方面的研究，建立了良好的診斷指標的相關性研究模型，提高了T淋巴細胞對肺結核診斷的特異性。Kumagai等[5]在研究中也表明肺泡灌洗液中T淋巴細胞的檢測更能有助于對肺結核疾病的確診。

本研究結果顯示肺結核患者免疫功能的檢測， BALF和外周血中CD4、CD4/CD8細胞水平值與正常組患者相比均有降低， BALF中CD4/CD8的數值下降是由CD4細胞減少和CD8細胞增多導致，外周血相應比值的降低則是單純的CD4細胞減少導致，從而初步說明了患者的體內CD4、CD4/CD8細胞水平值的上下波動變化與肺部疾病的出現有著明顯的相關性[6]。本研究中CD3在兩組患者中，BALF及外周血部位的水平值均相似，無統計學意義，提示CD3細胞水平可能與肺結核患者發病無必然聯系。再者，本研究對觀察組患者不同治療階段的T淋巴細胞水平檢測對比，發現在治療后1月、3月患者的CD4細胞、CD4/CD8細胞水平均有明顯增加，結合患者的臨床癥狀改善、肺部病變減輕等結果共同表明T淋巴細胞尤其是CD4、CD8、CD4/CD8等水平值檢測對肺結核的診斷和療效判斷有重要作用。

[1]中華醫學會結核病學分會.氣管支氣管結核診斷和治療指南(試行)[J].中華結核和呼吸雜志,2012,35(8):230.

[2]Jang H B,Lee A J,Kim M J,et al.Evaluation of CD3+CD4-CD8- (Double-negative) T Cells in Bronchoalveolar Lavage Fluid:an Effective Tool for Pulmonary Disease Diagnosis[J].Laboratory Medicine Online,2015,5(1):20.

[3]陳品儒,譚守勇.非結核分枝桿菌肺病患者外周血T淋巴細胞亞群與營養狀況相互關系的探討[J].實用醫學雜志,2014,10(11):1768.

[4]丁士標,陳愛鳳,潘亞萍,等.肺結核患者支氣管肺泡灌洗液病原菌分布與耐藥性分析[J].中華醫院感染學雜志,2014(17):4203.

[5]Kumagai T,Tomita Y,Inoue T,et al.Pleural sarcoidosis diagnosed on the basis of an increased CD4/CD8 lymphocyte ratio in pleural effusion fluid:a case report[J].Journal of Medical Case Reports,2015,9(1):1.

[6]袁 媛，陳 驥.IL-18、OPN、INF-γ及 hs-CRP 在肺結核中的檢測意義[J].湖南師范大學學報(醫學版)，2016，13(2):117.

1007-4287(2017)09-1371-02

2016-11-10)