2013—2016年四川省豬繁殖與呼吸綜合征病繼發(fā)細(xì)菌感染的病原學(xué)分析

李幽幽，李小璟，龔雙燕，敖 英，朱 玲，2，*，徐志文，2

(1.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，四川 成都 611134; 2.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 四川省動(dòng)物疫病與人類健康重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川 成都 611134)

2013—2016年四川省豬繁殖與呼吸綜合征病繼發(fā)細(xì)菌感染的病原學(xué)分析

李幽幽1，李小璟1，龔雙燕1，敖 英1，朱 玲1，2，*，徐志文1，2

(1.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，四川 成都 611134; 2.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 四川省動(dòng)物疫病與人類健康重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川 成都 611134)

為給近幾年臨床控制和治療PRRSV繼發(fā)感染提供參考依據(jù)，對2013—2016年來自四川省各地感染PRRSV的112頭病豬病料進(jìn)行細(xì)菌分離，經(jīng)形態(tài)學(xué)觀察、選擇培養(yǎng)、生化鑒定。分離得到葡萄球菌(MRS)、鏈球菌、多殺性巴氏桿菌(PM)、大腸埃希菌(Escherichiacoli)、豬胸膜肺炎放線桿菌(App)。其中葡萄球菌的分離率最高(70%)，其次為多殺性巴氏桿菌(50%)，大腸埃希菌(40%)，豬胸膜肺炎放線桿菌(40%)，鏈球菌(30%)；繼發(fā)感染主要發(fā)生于肝臟和肺臟，其次是脾和心包積液。動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果表明，多殺性巴氏桿菌、大腸埃希菌、鏈球菌、胸膜肺炎放線桿菌具有致病性。藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明: 多殺性巴氏桿菌對環(huán)丙沙星敏感，對慶大霉素中度敏感；大腸埃希菌對丁胺卡那敏感，對氨芐西林、慶大霉素、新霉素中度敏感；鏈球菌對卡那霉素中度敏感；豬胸膜肺炎放線菌對環(huán)丙沙星中度敏感。

豬繁殖與呼吸綜合征；細(xì)菌；繼發(fā)感染；病原學(xué)

豬繁殖與呼吸綜合征(porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)，又稱藍(lán)耳病，是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起的懷孕母豬發(fā)熱、厭食、早產(chǎn)、晚期流產(chǎn)、死胎、弱仔和木乃伊胎兒等繁殖障礙以及仔豬的呼吸系統(tǒng)癥狀和高死亡率的接觸性傳染病，同時(shí)它能引起免疫抑制、繼發(fā)感染等[1]。由于本病的復(fù)雜性，尤其是感染PRRSV后，感染豬對其他致病因子的易感性增加，出現(xiàn)免疫抑制和亞臨床感染等特點(diǎn)[2]，給PRRS的防制工作帶來了很多不利因素。目前，PRRS幾乎遍及世界各養(yǎng)豬國家，給世界養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

PRRSV屬動(dòng)脈炎病毒科動(dòng)脈炎病毒屬，是一種有囊膜的單股正鏈RNA病毒[3]。PRRSV 主要作用于巨噬細(xì)胞系，這些細(xì)胞在免疫應(yīng)答中起重要作用，包括對細(xì)菌的破壞。機(jī)體感染PRRSV后，免疫器官受到嚴(yán)重?fù)p害，造成免疫抑制[4-5]，從而引發(fā)多種病原的繼發(fā)感染，使疫病復(fù)雜化。研究表明，PRRSV與其他病原體，如豬圓環(huán)病毒2型(Porcinecircovirustype2，PCV-2)、鏈球菌(Streptococcus，GBS)、副豬嗜血桿菌(Haemophilusparasuis，HPS)、多殺性巴氏桿菌(Pasteurellamultocida，PM)等的繼發(fā)和混合感染[6]是引致豬“高熱病”發(fā)生的原因。已有報(bào)道PRRSV能增強(qiáng)機(jī)體對豬鏈球菌的易感性[7]。由于疫苗的應(yīng)用或發(fā)病后大量抗菌藥物的應(yīng)用使細(xì)菌病較難顯現(xiàn)出來。

本試驗(yàn)對近年來四川省感染PRRSV后發(fā)病仔豬病料進(jìn)行繼發(fā)感染細(xì)菌的分離和鑒定，并用分離菌進(jìn)行動(dòng)物試驗(yàn)和藥敏試驗(yàn)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 主要試劑

LB培養(yǎng)基、普通瓊脂平板、巧克力瓊脂平板、鮮血瓊脂平板、麥康凱平板、大豆酪蛋白瓊脂(TSA)培養(yǎng)基及革蘭氏染液等由實(shí)驗(yàn)室制備；藥敏紙片和微量生化鑒定管購自杭州微生物試劑公司。

1.2 供試動(dòng)物

健康1月齡BALB/c小白鼠50只，購自四川大學(xué)華西醫(yī)學(xué)院。212頭疑似PRRS發(fā)病豬來自2013-2016年間四川省成都、綿陽、樂山、雅安、眉山等地的規(guī)模化豬場。

1.3 細(xì)菌分離純化及鑒定

采用常規(guī)PCR對疑似病豬進(jìn)行檢測，對檢測為PRRSV陽性并且其他病毒為陰性的發(fā)病豬進(jìn)行無菌采集病料，共計(jì)112份，每份包括肺臟、肝臟、脾臟、心包積液。分別劃線接種巧克力瓊脂平板，37 ℃培養(yǎng)24 h，觀察菌落形態(tài)特征 ，根據(jù)不同菌落的形態(tài)描述編號A、B、C、D、E，挑取形態(tài)不同的單菌落再次接種巧克力瓊脂平板，37 ℃培養(yǎng)24 h進(jìn)行純培養(yǎng)。

1.3.1 菌落形態(tài)學(xué)檢查

對純化細(xì)菌進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢，觀察染色情況，并根據(jù)細(xì)菌形態(tài)初步確定分離菌的細(xì)菌種類。

1.3.2 鑒別培養(yǎng)

將分離的細(xì)菌分別劃線接種普通瓊脂平板，鮮血瓊脂平板，麥康凱平板。置37 ℃培養(yǎng)24 h。觀察菌落的生長狀態(tài)及菌落特征。并進(jìn)行革蘭染色、鏡檢。從而得出各種菌的營養(yǎng)要求及培養(yǎng)特性。

1.3.3 生化鑒定

將分離出的細(xì)菌接種于10 mL LB液體培養(yǎng)基，37 ℃振蕩培養(yǎng)12 h后呈現(xiàn)渾濁即成供試細(xì)菌菌液。根據(jù)前期的初步鑒定，將疑似菌根據(jù)其各自的生化反應(yīng)特性，選擇相應(yīng)的生化反應(yīng)試劑。細(xì)菌接種微量生化鑒定管后，置于37 ℃培養(yǎng)24 h，觀察并記錄結(jié)果。結(jié)果評定參照參考文獻(xiàn)[7]和[8]。

1.3.4 動(dòng)物致病性試驗(yàn)

將菌液17 000g離心5 min去掉上清，用生理鹽水重懸菌體，用比濁法測定菌懸液濃度后注射小鼠，菌懸液濃度分別為：葡萄球菌4.94×108個(gè)·mL-1、鏈球菌3.55×108個(gè)·mL-1、多殺性巴氏桿菌5.58×108個(gè)·mL-1、大腸桿菌1.99×109個(gè)·mL-1、豬胸膜肺炎放線桿菌4.83×108個(gè)·mL-1。隨機(jī)將小鼠分為10個(gè)小組，每組5只。每種菌設(shè)對照組和處理組。處理組：按照每只0.2 mL重懸菌液對試驗(yàn)用健康小白鼠進(jìn)行腹腔注射；對照組：每只注射0.2 mL生理鹽水。同等條件下正常飼喂小白鼠3 d，觀察小白鼠的致死情況。從死亡小白鼠的脾臟再次提取分離出細(xì)菌，判斷是否為原分離菌。

1.3.5 藥敏試驗(yàn)

取100 μL經(jīng)純培養(yǎng)的菌液均勻涂布于普通瓊脂平板，待稍干后，根據(jù)不同種類細(xì)菌選擇相應(yīng)耐藥試驗(yàn)的藥敏紙片，每片藥敏紙片的藥物含量均為30 μg。用無菌鑷子將各種藥敏紙片分別平貼在培養(yǎng)基表面，4 ℃培養(yǎng)2 h使藥物擴(kuò)散，然后置37 ℃培養(yǎng)24 h，觀察結(jié)果。按抑菌圈直徑大小和各抗菌藥的具體標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)藥敏紙片生產(chǎn)廠家的抑菌圈判斷標(biāo)準(zhǔn)，判斷藥物的敏感性。

2 結(jié)果與分析

2.1 分離菌的培養(yǎng)特性及形態(tài)特征

對檢測為PRRSV陽性并且其他病毒病為陰性的112頭發(fā)病豬無菌采集病料，進(jìn)行細(xì)菌分離，共分離出5株未知菌，其菌落形態(tài)特征見表1，分離過程中我們發(fā)現(xiàn)繼發(fā)感染細(xì)菌主要分布于肺臟和肝臟，其次是脾和心包積液。在112份病料中，菌種分離情況見表2。其中，E菌分離率最高(70%)，其次為A菌(50%)、B菌(40%)、D菌(40%)、C菌(30%)。

2.2革蘭氏鏡檢結(jié)果

表1菌落形態(tài)特征及培養(yǎng)特性

Table1The morphological and cultural characteristics of the bacteria

菌種Bacteria菌落特征Colonycharacteristics培養(yǎng)特性Culturalcharacteristics分離部位SeparationsitesA菌BacteriaA灰白色、圓形、微隆起、光滑濕潤、露珠狀菌落Gray,round,slightlyraised,smoothandmoist,dew-likecolo-nies普通瓊脂培養(yǎng)基上生長貧瘠,血平板上生長良好,不溶血的中小型菌落Poorgrowthoncommonmedium,goodgrowthonthebloodplate,nohemolyticsmallandmedium-sizedcolo-nies肺,肝,脾,心包積液Lung,liver,spleen,peri-cardialeffusionB菌BacteriaB圓形隆起、光滑、濕潤、半透明、灰白色菌落Rounduplift,smooth,moist,translucent,graycolony普通培養(yǎng)基生長良好,在麥康凱瓊脂上形成粉紅色菌落GrewwelloncommonmediumandformedpinkcolonyontheMacConkeymedium肝,脾,心包積液Liver,spleen,pericardialeffusionC菌BacteriaC表面光滑、邊緣整齊、灰綠色小菌落Smoothsurface,neatedges,graygreensmallcolony普通培養(yǎng)基上生長不良,血平板外層有明顯的β溶血環(huán)Poorgrowthoncommonmedium,obviousβhemolyticringonbloodmedium肺,肝,心包積液Lung,liver,pericardialef-fusionD菌BacteriaD圓形、邊緣整齊、半透明、露珠樣、中間有點(diǎn)灰白色的菌落Round,neatedges,translucent,dew-like,thereweregrayandwhitecoloniesinthecenter在普通培養(yǎng)基上不生長,在血平板上生長不良,明顯β溶血環(huán)的透明菌落Cantgrowoncommonmedium,poorgrowthonthebloodmedium,obviousclearβhemolyticringonbloodmedium.肺,肝Lung,liverE菌BacteriaE濕潤、光滑、隆起的圓形菌落,在血平板菌落較大Moist,smooth,upliftedroundcol-onies,largercoloniesonbloodme-dium普通培養(yǎng)基上生長良好,血平板上菌落周圍呈明顯的β溶血Grewwelloncommonmedium,obviousβhemolyticringonbloodmedium肺,肝,脾Lung,liver,spleen

表2PRRS病豬細(xì)菌分離情況

Table2The bacterial separation situation of 112 PRRS pigs

項(xiàng)目ItemsA菌BacterialstrainAB菌BacterialstrainBC菌BacterialstrainCD菌BacterialstrainDE菌BacterialstrainE繼發(fā)感染病豬數(shù)量Numberofsecondaryinfection5745334479分離率Separationrate/%5040304070

對純化細(xì)菌進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢，觀察染色情況和細(xì)菌形態(tài)初步確定分離菌種類，在分離的5株菌中，有2株革蘭氏陽性球菌(圖1-A、C)，3株革蘭氏陰性桿菌(圖1-B、D、E)。

A， G+球菌(雙球或短鏈狀排列分布)； B， G-球桿菌(典型的球桿菌形態(tài))；C， G+球菌(葡萄串狀排列)；D， G-桿菌(兩端鈍圓的短桿菌)；E， G-桿菌(兩端鈍圓紅色無芽孢的直桿菌)；A， Gram-positive coccus (Double or short chain arrangement) (400×); B， Gram-negative bacillus ball (Typical bacillus morphology) (400×); C， Gram-positive coccus (Grapes arranged in a row) (400×); D，Gram-negative Bacillus (Both ends of the blunt blight) (400×); E， Gram-negative Bacillus (Rhizoctonia solani with both ends of blunt red) (400×)圖1 革蘭氏染色鏡檢結(jié)果Fig.1 Results of gram staining microscopic examination

2.3 生化鑒定

將分離得到的5株細(xì)菌經(jīng)處理后接種于微量生化鑒定管，置于37 ℃培養(yǎng)24 h，具體結(jié)果見表 3。參考細(xì)菌鑒定手冊，標(biāo)準(zhǔn)菌株的生化反應(yīng)特性可以初步鑒定所分離的細(xì)菌種類，初步判定A 為多殺性巴氏桿菌(圖1-B)；B為大腸埃希菌(圖1-E)；C為鏈球菌(圖1-A)；D為胸膜肺炎放線桿菌(圖1-D)；E為葡萄球菌(圖1-C)。

2.4 動(dòng)物致病性試驗(yàn)

用0.2 mL生理鹽水注射對照組小鼠，以每只0.2 mL的量注射實(shí)驗(yàn)組小鼠，用比濁法測定菌懸液濃度分別為：葡萄球菌4.94×108個(gè)·mL-1、鏈球菌3.55×108個(gè)·mL-1、多殺性巴氏桿菌5.58×108個(gè)·mL-1、大腸埃希菌1.99×109個(gè)·mL-1、豬胸膜肺炎放線桿菌4.83×108個(gè)·mL-1。同等條件下正常飼喂小白鼠3 d，A、B、C、D細(xì)菌處理組小鼠均死亡，表明從肝、肺、脾、心包積液等部位分離得到的多殺性巴氏桿菌、大腸埃希菌、鏈球菌、胸膜肺炎放線桿菌均具有致病能力；E細(xì)菌處理組小鼠均未死亡，表明葡萄球菌沒有致病能力；注射生理鹽水的對照組小鼠均未死亡。將處理組死亡小白鼠的脾臟用于分離細(xì)菌，結(jié)果能夠分離出原致病菌。

2.5 藥敏試驗(yàn)

將分離得到的致病菌分別進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，觀察抑菌圈直徑大小，根據(jù)CLSI藥敏試驗(yàn)判斷標(biāo)準(zhǔn)，判斷藥物的敏感性。結(jié)果顯示，多殺性巴氏桿菌對環(huán)丙沙星、頭孢唑啉敏感，對慶大霉素、呋喃唑酮中度敏感；大腸埃希菌對丁胺卡那敏感，對氨芐西林、慶大霉素、新霉素中度敏感；鏈球菌對頭孢哌酮IV敏感，對卡那霉素中度敏感；豬胸膜肺炎放線菌對頭孢哌酮、頭孢哌酮IV敏感，對環(huán)丙沙星中度敏感(表4)。

表3細(xì)菌生化鑒定結(jié)果

Table3Biochemical identification of bacteria

生化試劑BiochemicalreagentA菌BacterialstrainAB菌BacterialstrainBC菌BacterialstrainCD菌BacterialstrainDE菌BacterialstrainE葡萄糖Glucose+++N+乳糖Lactose-+-N+蔗糖Sucrose+N+NN麥芽糖MaltoseNNNN+賴氨酸LysineN+NNN鳥氨酸OrnithineN+NNN苯丙氨酸PhenylalanineN-NNN觸酶CAT+NNNN硫化氫H2S+-NNN甘露醇Mannitol+NN+-氧化酶Oxidase+NNNN尿素Urea--N+-吲哚Indole+-NN-衛(wèi)矛醇DulcitolN-N-N枸櫞酸鹽CitrateN-NNN七葉苷AesculinNN-N-山梨醇SorbitolNN-NN水楊苷SalicinNN+NN海藻糖TrehaloseNN+NN馬尿酸HippuricacidNN-NN6.5%NaClNN-NN硝酸鹽NitrateNNNN+棉子糖RaffinoseNNN-N阿拉伯膠糖GumArabicNNN-N木糖XyloseNNN+N凝固酶CoagulaseNNNN+

-，無變化或陰性；+，產(chǎn)酸、產(chǎn)氣或陽性；⊕，產(chǎn)酸并且產(chǎn)氣；N，未測項(xiàng)目。

-， No change or negative; +， Acid-produced， aerogenic， or positive; ⊕， Acid-produced and aerogenic; N， No detection.

表4致病菌的幾種常用藥物抑菌圈直徑

Table4Inhibition zone diameter of several commonly used drug for pathogen mm/sensitivity

S，敏感；I，中度敏感；R，耐藥；N，未測項(xiàng)目。

S， susceptible; I， intermediate; R， resistance; N， No detection.

3 討論

PRRSV是一種免疫抑制性病原，有研究發(fā)現(xiàn)病豬的免疫器官和淋巴細(xì)胞遭受了嚴(yán)重?fù)p傷[8]，其中淋巴結(jié)、脾表現(xiàn)壞死性炎癥變化，細(xì)胞病變主要發(fā)生在單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)；各種細(xì)胞器遭受普遍性的膜結(jié)構(gòu)損傷，其中以線粒體和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)變化較為嚴(yán)重。這應(yīng)是產(chǎn)生免疫抑制的病理基礎(chǔ)[9]，因此能引發(fā)多種病原(細(xì)菌、病毒、寄生蟲等)的繼發(fā)感染，使疾病復(fù)雜化。

由PRRSV單獨(dú)感染造成的臨床病理變化，多表現(xiàn)為間質(zhì)性肺炎，但試驗(yàn)病豬臨床上引起的病理變化比PRRSV單獨(dú)感染較嚴(yán)重，證明PRRSV與其他病原體可能存在相互協(xié)同作用。當(dāng)動(dòng)物機(jī)體抵抗力低下時(shí)，便趁機(jī)侵入體內(nèi)，致使動(dòng)物發(fā)病。未死亡的豬經(jīng)撲殺解剖后發(fā)現(xiàn)除肺臟有明顯病變外，其他器官無肉眼可見的病理變化。大量文獻(xiàn)證明PRRSV感染的特征性病變出現(xiàn)在肺臟，由于PRRSV損害和破壞肺部免疫細(xì)胞，導(dǎo)致了肺部抵抗外來病原感染的能力下降，從而致使其呼吸道和肺部容易遭受各種病原的混合感染或繼發(fā)感染。從試驗(yàn)結(jié)果看，在豬感染PRRSV后，再由某些相關(guān)聯(lián)的病原繼發(fā)感染或協(xié)同作用導(dǎo)致機(jī)體免疫力嚴(yán)重下降[10]。造成機(jī)體免疫力下降是繼發(fā)細(xì)菌感染的主要因素。繼發(fā)感染在PRRSV的致病程度上起著重要作用，這為臨床控制繼發(fā)感染提供了理論參考。

在112份病樣中，分離率由高到低為葡萄球菌、多殺性巴氏桿菌、大腸桿菌，其次為豬胸膜肺炎放線桿菌和豬鏈球菌。其中葡萄球菌易繼發(fā)，但大多為非致病菌。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，PRRSV最易繼發(fā)巴氏桿菌和大腸埃希菌感染，大多數(shù)PRRSV感染豬的肺部繼發(fā)感染了多殺性巴氏桿菌，所以在臨床用藥時(shí)考慮致病菌的耐藥性，使用高敏感藥物，例如環(huán)丙沙星和先鋒霉素V。本次試驗(yàn)發(fā)病豬采用四川省各市縣不同地區(qū)的規(guī)模化豬場，受遺傳影響的豬的病毒易感性差異，豬場之間的環(huán)境差異，豬場間管理的差異，PRRSV免疫水平差異等因素的互作效應(yīng)使PRRSV發(fā)病嚴(yán)重程度不同，所以每份病料所分離出的細(xì)菌存在一定差異。本次試驗(yàn)主要分析112份病料總體的繼發(fā)細(xì)菌感染情況，現(xiàn)在養(yǎng)豬業(yè)主要問題集中在繼發(fā)細(xì)菌感染對PRRSV發(fā)病的影響，所以對病原分離率及分離部位的研究可以指導(dǎo)治療藥物研究、用藥及預(yù)防，具有很現(xiàn)實(shí)的臨床意義。另外，在PRRS的繼發(fā)感染中，繼發(fā)感染副豬嗜血桿菌有很大概率，并且此次試驗(yàn)的臨床病變特征有極其相似的病例，特別是肺臟的病變，然而在試驗(yàn)中卻沒有分離出副豬嗜血桿菌。原因可能是其本身在病料中的分離率比較低，一般患病豬死亡12 h后，在病料中幾乎分離不到副豬嗜血桿菌，因此需在患豬剖殺或死亡12 h內(nèi)及時(shí)進(jìn)行病原分離。而且副豬嗜血桿菌對營養(yǎng)要求苛刻，其在巧克力培養(yǎng)基上培養(yǎng)48 h生長也較差，導(dǎo)致該菌不容易被分離[11]。此外，目前各豬場在實(shí)際生產(chǎn)中廣泛使用抗生素，也是副豬嗜血桿菌分離率比較低的原因之一。可考慮提高培養(yǎng)基中的生長因子和血清的濃度以提高副豬嗜血桿菌分離率；就分離部位而言，肺組織內(nèi)的小支氣管更容易分離出該菌。

本試驗(yàn)采取不同PRRSV感染的病料，進(jìn)行繼發(fā)菌的分離與鑒定，從試驗(yàn)結(jié)果可以統(tǒng)計(jì)出，在PRRSV感染的不同階段，其繼發(fā)的病原存在差異。在采集的112份樣品中，50%以下豬感染PRRSV的規(guī)模化豬場，分離到葡萄球菌、豬巴氏桿菌；50%～60%的豬感染PRRSV的規(guī)模化豬場采集病料，分離到葡萄球菌、胸膜肺炎放線桿菌、大腸埃希菌和巴氏桿菌；60%以上的豬感染PRRSV的規(guī)模化豬場采集病料，分離得到豬鏈球菌、巴氏桿菌、胸膜肺炎放線桿菌、大腸埃希菌等。由此可以看出，在PRRSV感染致病過程中，隨著病變歷程的加重，其繼發(fā)感染越復(fù)雜，病變也越嚴(yán)重，兩者是相互促進(jìn)的。這可能是因?yàn)樵赑RRSV感染過程中，病毒粒子的大量繁殖侵害豬體的免疫系統(tǒng)導(dǎo)致其免疫抑制效應(yīng)和免疫干擾加強(qiáng)，造成機(jī)體抵抗外界病原的抵抗力大大減弱，更容易造成繼發(fā)與混合感染，同時(shí)使病情加重。

從發(fā)病豬的臨床病變看，病患豬有很明顯的肺炎癥狀，采集的肺臟可見肺水腫、肺部呈淡紅色，半透明狀，似“肉變”，而在病變加重的患豬肺表現(xiàn)為“胰變”，這些表現(xiàn)極有可能是支原體感染的加重造成的。有研究發(fā)現(xiàn)，豬肺炎支原體能使PRRSV引起的肺炎加重，證明豬肺炎支原體與PRRSV混合感染時(shí)，豬肺炎支原體明顯延長和增加PRRSV肺炎的嚴(yán)重性[12]。再次，結(jié)合PRRSV感染的致病機(jī)理來看，PRRSV主要侵害肺泡及血液等組織的巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞，使肺泡巨噬細(xì)胞及單核細(xì)胞的正常功能受到抑制，從而導(dǎo)致病原體的入侵，這也與支原體引起的肺部病變的機(jī)制相一致。因此，可以推斷，豬肺炎支原體在增強(qiáng)PRRSV肺炎的稽留期和嚴(yán)重性方面起著重要作用。筆者將對PRRSV感染豬繼發(fā)感染支原體的情況做進(jìn)一步研究。

對繼發(fā)細(xì)菌病的研究，特別是分析其耐藥性，可以有效預(yù)防傳染病的發(fā)生和發(fā)展，本試驗(yàn)對分離菌的耐藥性分析可以有效地指導(dǎo)臨床疾病的預(yù)防、診斷及治療。使用抗菌譜廣的藥物并增加使用量或配合多種抗生素，這會(huì)逐漸增加細(xì)菌的耐藥范圍，引起“二重感染”[13]，給以后的治療帶來極大的困難。藥物治療應(yīng)根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果選擇高敏藥物，需要正確合理地使用抗生素，在藥敏試驗(yàn)的基礎(chǔ)上有針對性地使用首選藥，避免重復(fù)使用耐藥水平高的抗生素。在本研究中，鑒于致病菌對多種常用抗生素有耐藥性，藥敏試驗(yàn)中選擇了呋喃唑酮、頭孢哌酮、頭孢哌酮IV、頭孢唑啉等人專用的抗生素，結(jié)果顯示致病菌對這些藥物敏感，使用該類藥物會(huì)抑制細(xì)菌生長，同時(shí)也會(huì)使致病菌產(chǎn)生更強(qiáng)的耐藥性，所以不建議使用人用的抗生素治療相應(yīng)繼發(fā)感染。建議大規(guī)模豬場定期分離細(xì)菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，及時(shí)掌握耐藥情況，不再選用已有耐藥性的藥物治療病豬，避免治療失敗帶來嚴(yán)重的損失。在獸醫(yī)臨床上應(yīng)采取以預(yù)防為主，治療為輔的原則，以減少經(jīng)濟(jì)損失。

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(責(zé)任編輯盧福莊)

EtiologyanalysisofthebacterialsecondaryinfectionofPRRSVinSichuanProvincefrom2013to2016

LI Youyou1， LI Xiaojing1， GONG Shuangyan1， AO Ying1， ZHU Ling1，2，*， XU Zhiwen1，2

(1.CollegeofVeterinaryMedical，SichuanAgriculturalUniversity，Chengdu611134，China; 2.KeyLaboratoryofAnimalDiseaseandHumanHealthofSichuanProvince，SichuanAgriculturalUniversity，Chengdu611134，China)

This experiment was conducted to provide references for clinical management and treatment of PRRSV secondary infections. In this study， morphology observation， selective culture， biochemical identification were used to identify the secondary infective bacteria of PRRSV around 112 piglets from Sichuan province in 2013-2016.Staphylococcusaureus，Streptococcus，Pasteurellamultocida，EscherichiacoliandActinobacilluspleuropeumoniaewere isolated. Isolation rate ofStaphylococcusaureuswas the highest (70%)， followed byPasteurella(50%)，Escherichiacoli(40%)，Actinobacilluspleuropneumoniae(40%)，Streptococcus(30%). Secondary infection occurred mainly in the liver and lungs， followed by spleen and pericardial effusion. Animal experiments showed thatPasteurellamultocida，Escherichiacoli，Streptococcus，Actinobacilluspleuropneumoniaewere pathogenic. Susceptibility testing showed thatPasteurellamultocidawas highly sensitive to ciprofloxacin， moderately sensitive to gentamicin;Escherichiacoliwas highly sensitive to amikacin， and moderately sensitive to ampicillin， gentamicin and neomycin;Streptococcuswas moderately sensitive to kanamycin;Actinobacilluspleuropneumoniaewas moderately sensitive to ciprofloxacin.

PRRSV; bacteria; secondary infection; etiology

S855.1

：A

：1004-1524(2017)09-1437-08

李幽幽，李小璟，龔雙燕，等. 2013—2016年四川省豬繁殖與呼吸綜合征病繼發(fā)細(xì)菌感染的病原學(xué)分析[J].浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2017，29(9): 1437-1444.

10.3969/j.issn.1004-1524.2017.09.03

2017-04-11

國家“十二五”科技支撐計(jì)劃(2015BAD12B04-2.3);四川省科技支撐計(jì)劃 (2014NZ0043)

李幽幽(1992—)，女，四川江油人，碩士研究生，從事動(dòng)物傳染病病原分子生物學(xué)方向的研究。E-mail: sclyy@hotmail.com

*通信作者，朱玲，E-mail: abtcxzl72@126.com