高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定楊梅中吡唑醚菌酯和啶酰菌胺殘留

張 亮，朱 勇，趙 健，付 巖，呂 燕，吳銀良(寧波市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，浙江 寧波 315040)

高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定楊梅中吡唑醚菌酯和啶酰菌胺殘留

張 亮，朱 勇，趙 健，付 巖，呂 燕，吳銀良*
(寧波市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，浙江 寧波 315040)

建立楊梅中吡唑醚菌酯和啶酰菌胺的高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法。將試樣中的吡唑醚菌酯和啶酰菌胺用QuEChERS方法提取、凈化，用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)和確證，采用外標(biāo)法定量。方法通過(guò)空白基質(zhì)溶液稀釋標(biāo)準(zhǔn)品建立校正的標(biāo)準(zhǔn)曲線，用以消除基質(zhì)效應(yīng)。結(jié)果表明，吡唑醚菌酯和啶酰菌胺濃度在0.005～5.0 mg·kg-1時(shí)有良好的線性關(guān)系，決定系數(shù)分別為0.999 2和0.999 6；在0.01～1.00 mg·kg-1時(shí)，添加回收率在76.5%～104.8%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在2.6～5.3。吡唑醚菌酯和啶酰菌胺方法最小檢出量均為5.0×10-11g，最低檢出濃度均為0.005 mg·kg-1。

高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜； 吡唑醚菌酯； 啶酰菌胺； 楊梅

吡唑醚菌酯(Pyraclostrobin)和啶酰菌胺(Boscalid)均是由德國(guó)巴斯夫公司開(kāi)發(fā)的新型殺菌劑，其中吡唑醚菌酯屬于甲氧基丙烯酸酯類(lèi)殺菌劑，啶酰菌胺屬于煙酰胺類(lèi)殺菌劑，近年來(lái)二者經(jīng)常被復(fù)配使用，而實(shí)踐已經(jīng)證明，二者的復(fù)配劑具有杰出的殺菌活性、廣譜的防治對(duì)象、高度的安全性、出色的持效性[1- 5]。基于安全考慮，中國(guó)、CAC、歐盟、美國(guó)和日本等國(guó)家規(guī)定，吡唑醚菌酯和啶酰菌胺在各類(lèi)食品中最高殘留限量分別為ND～50 mg·kg-1和ND～85 mg·kg-1。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)這兩種化合物殘留檢測(cè)方法的報(bào)道還比較少[6- 11]，但隨著這兩種農(nóng)藥的普及，簡(jiǎn)單快速的檢測(cè)方法的建立也變得尤為必要。本研究參照QuEChERS方法，結(jié)合超高效液相色譜- 串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC- MS/MS)的分離檢測(cè)，建立了一種楊梅中吡唑醚菌酯和啶酰菌胺殘留量的檢測(cè)方法。

1 材料與方法

1.1試驗(yàn)儀器

UPLC(Waters)，備色譜柱Acquity UPLC BEH C18(2.1 m×100 mm，1.7 μm)柱；Waters UPLC XevoTM TQ MS超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀(美國(guó)Waters公司)；配置電噴霧離子源勻質(zhì)器(IKA T25)；高速離心機(jī)(Sigma 3K15)；恒溫振蕩器(IKA KS 4000i)；旋渦混合器(IKA GENIUS3)；離心管、電子天平以及其他實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備等。

1.2試劑與材料

乙腈、甲酸(色譜純，美國(guó)默克公司)，無(wú)水硫酸鎂(分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)，PSA填料(40～63 μm，安譜公司)；吡唑醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)品、啶酰菌胺標(biāo)準(zhǔn)品(≥純度99.5%，德國(guó)Dr Ehrenstorfer GmbH公司)。

1.3方法

1.3.1 樣品前處理

稱取樣品5.00 g置于50 mL離心管中，加入10.0 mL乙腈，以10 000 r·min-1勻漿2 min靜置15 min后，加入5 g氯化鈉劇烈振蕩2 min，再以10 000 r·min-1離心3 min，吸取上清液待凈化。

將上述待凈化的提取液轉(zhuǎn)入裝有300 mg MgSO4、100 mg PSA和100 mg C18的塑料離心管中，漩渦振搖1 min，5 000 r·min-1離心3 min。吸取上清液0.4 mL至另一試管中，并加入0.6 mL0.1%甲酸溶液混合均勻，過(guò)0.22 μm濾膜后供LC- MS/MS測(cè)定。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制。將吡唑醚菌酯和啶酰菌胺標(biāo)準(zhǔn)品用乙腈溶解，配制成質(zhì)量濃度為100 μg·kg-1的母液，再用乙腈分別配制濃度為10、1.0、0.1、0.01 μg·mL-1的梯度標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于-18 ℃避光保存，有效期6個(gè)月。

基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液配制。將楊梅樣品按照1.3.1的方法進(jìn)行前處理，制得空白楊梅基質(zhì)溶液，再與0.1%甲酸水溶液一起將配制好的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液稀釋配制成質(zhì)量濃度為0.005、0.01、0.05、0.1、0.5、1.0和5.0 μg·mL-1的系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，需現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.3.3 檢測(cè)條件

色譜條件。流動(dòng)相為0.1%甲酸溶液(A)和乙腈(B)，色譜柱ACQUITY UPLC@BEH C182.1 m×100 mm，1.7 μm，柱溫35 ℃；樣品室溫度20 ℃，流速0.4 mL·min-1，進(jìn)樣體積10 μL。梯度洗脫程序見(jiàn)表1。

表1 梯度洗脫程序

質(zhì)譜條件。電噴霧離子源，正離子掃描模式，電離電壓1.5 kV，霧化氣流速800 L·h-1，錐孔氣流速10 L·h-1，離子源溫度150 ℃，霧化溫度400 ℃。多反應(yīng)監(jiān)測(cè)分析的質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)表2。

表2 多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式下的質(zhì)譜參數(shù)

2 結(jié)果與分析

2.1色譜條件的選擇

流動(dòng)相。流動(dòng)相為0.1%甲酸溶液(A)和乙腈(B)，梯度淋洗。0～0.5 min，維持50%B；0.5～0.51 min，50%B線性變化至90%B；0.51～4.00 min，維持90%B；4.00～4.01 min，90%B線性變化至50%B；4.01～5.00 min，維持50%B。

色譜柱。ACQUITY UPLC@BEH C182.1 m×100 mm，1.7 μm，柱溫35 ℃，樣品室溫度20 ℃，流速0.4 mL·min-1，進(jìn)樣體積10 μL。

離子源。電噴霧離子源，正離子掃描，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)，電離電壓1.5 kV，霧化氣流速800 L·h-1，錐孔氣流速10 L·h-1，源溫150 ℃，霧化溫度400 ℃。

在上述條件下，吡唑醚菌酯的保留時(shí)間為3.7 min左右，啶酰菌胺的保留時(shí)間為3.4 min左右。

2.2方法線性范圍

采用基質(zhì)加標(biāo)，外標(biāo)法定量。將吡唑醚菌酯和啶酰菌胺標(biāo)樣分別用乙腈溶解后，用空白樣品(基質(zhì))提取液將標(biāo)準(zhǔn)液稀釋成0.005、0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、5.0 mg·kg-1標(biāo)準(zhǔn)工作液。在上述儀器條件下進(jìn)樣檢測(cè)，得到MS響應(yīng)值(峰面積Y)與進(jìn)樣濃度(X)的線性回歸方程，繪制的吡唑醚菌酯和啶酰菌胺標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性決定系數(shù)分別為Y=2 460 132X+6 197，R2=0.999 2和Y=520 142X+3 107，R2=0.999 6，表明在0.005～5.0 mg·kg-1內(nèi)線性良好。

2.3方法準(zhǔn)確度和精密度

按上述色譜條件及分析步驟進(jìn)行添加回收試驗(yàn)，每個(gè)添加濃度重復(fù)5次。由表3可知，吡唑醚菌酯在添加濃度為0.01～1.00 mg·kg-1時(shí)，回收率在77.6%～104.8%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)最大為5.3%。啶酰菌胺在添加濃度為0.01～1.00 mg·kg-1時(shí)，回收率在76.5%～101.3%，RSD最大為4.7%。回收率和RSD均在農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則允許范圍內(nèi)，方法重復(fù)性良好，可滿足殘留量分析要求。

表3 吡唑醚菌酯和啶酰菌胺在楊梅中的添加回收率

2.4方法靈敏度

以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線最低濃度0.005 mg·kg-1計(jì)算得吡唑醚菌酯和啶酰菌胺的最小檢出量均為5.0×10-11g。在楊梅空白樣品中添加一定量的吡唑醚菌酯和啶酰菌胺標(biāo)準(zhǔn)溶液，以最小添加濃度0.005 mg·kg-1作為最低檢出濃度。

3 小結(jié)

本研究建立了一種基于QuEChERS方法處理?xiàng)蠲窐悠罚Y(jié)合UPLC- MS/MS高分辨能力快速檢測(cè)楊梅中吡唑醚菌酯和啶酰菌胺殘留量的方法，并對(duì)建立的方法進(jìn)行了考察，包括線性、檢出限、回收率和精密度等，結(jié)果表明，該方法具有快速、高效、靈敏的特點(diǎn)，符合農(nóng)藥殘留分析的要求，可應(yīng)用于楊梅中吡唑醚菌酯和啶酰菌胺的檢測(cè)。

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(責(zé)任編輯：張瑞麟)

TS207.5

：A

：0528- 9017(2017)09- 1556- 03

2017- 06- 25

寧波市科技惠民項(xiàng)目(2016C51038)

張 亮(1989—)，男，助理工程師，碩士，從事農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全研究工作，E- mail：zl8755251@163.com。

吳銀良，教授級(jí)高級(jí)工程師，博士，從事農(nóng)獸藥殘留分析研究工作，E- mail：wupaddyfield@sina.com。

文獻(xiàn)著錄格式：張亮，朱勇，趙健，等. 高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定楊梅中吡唑醚菌酯和啶酰菌胺殘留[J].浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，58(9)：1556- 1558.

10.16178/j.issn.0528- 9017.20170917