花旗馬鈴薯品種莖尖脫毒與快繁技術

王 芳，黃 堅，嚴成其,，龐萬幅，程 曄，金黎平(.寧波市農業科學研究院，浙江 寧波 5040； .中國農業科學院 蔬菜花卉研究所，北京 008；.浙江省植物有害生物防控省部共建國家重點實驗室培育基地，浙江 杭州 00)

花旗馬鈴薯品種莖尖脫毒與快繁技術

王 芳1，黃 堅1，嚴成其1,3，龐萬幅2，程 曄3，金黎平2
(1.寧波市農業科學研究院，浙江 寧波 315040； 2.中國農業科學院 蔬菜花卉研究所，北京 10081；3.浙江省植物有害生物防控省部共建國家重點實驗室培育基地，浙江 杭州 310021)

取帶1～2個葉原基大小為0.2～0.4 mm的莖尖，在MS+6- BA 1.00 mg·L-1+NAA 0.10 mg·L-1培養基中培養50 d，成苗率50%。試管苗經指示植物檢測出試管苗脫毒率為59%，脫毒苗莖段快繁的最佳配方為MS+6- BA 0.20 mg·L-1+NAA 0.20 mg·L-1。雙層基質栽培脫毒試管苗生長快、長勢好，微型薯產量高、成本低。

花旗馬鈴薯品種； 莖尖脫毒； 組織培養； 快繁技術

在侵染馬鈴薯的18種病毒中，有9種是專門寄生于馬鈴薯上的病毒，其中國內發現的有類病毒PSTV，以及PVX、PVY、PVS、PVM、PVMA、PVA、PLRV7種病毒[1]。這些病毒一旦侵入馬鈴薯塊莖和植株，就表現為束頂、花葉、卷葉幾種類型，植株表現為矮小、頂部葉片變色、卷縮，葉片失綠、葉片卷曲壞死、塊莖表現為龜裂、變尖、變小、內部網狀壞死等各種各樣的退化類型，嚴重者失去發芽能力，不能作種，一般減產30%左右，嚴重者減產80%以上[2]，病情逐年加重，最后失去種用價值。

利用莖尖脫毒快繁是目前解決馬鈴薯種薯退化最直接有效的方法。按照規范、嚴格的技術流程，并通過莖尖脫毒快繁獲得無毒微型薯進行良種繁育，不斷地為生產提供優質種薯，可長期保持馬鈴薯優良品種的增產潛力[3]。

1 材料與方法

1.1材料

花旗馬鈴薯品種是地方特色優質高效品種，采于寧波市海曙區梅樹孔村。

1.2方法

1.2.1 材料采集與消毒

選取健康無病斑的花旗馬鈴薯洗凈后用30 mg·kg-1GA3浸種30 min，埋在消毒過的泥炭中，放入25 ℃培養箱中暗培養催芽，露芽后30 ℃熱處理7 d。剪取生長旺盛的莖尖5 cm，切去葉片，用75%的乙醇浸泡20～30 s后，用無菌水沖洗1遍，然后用0.1%的升汞消毒6 min，最后用無菌水沖洗4次備用[4]。

1.2.2 莖尖剝離與培養

在雙目解剖鏡下，將消毒后的莖尖置于載玻片上，用解剖針輕輕剝去葉片，并用解剖刀切去，僅留1～2個葉原基的莖尖，大小為0.2～0.3 mm。將留下的莖尖接種在含有不同濃度NAA和6- BA的MS培養基中。培養條件為溫度(28±2)℃，濕度50%，光照強度2 000～3 000 lx，光照時間12～16 h·d-1。

1.2.3 試管苗脫毒鑒定

用指示作物千日紅進行試管苗脫毒鑒定。

1.2.4 脫毒苗快速繁殖

以MS為基本培養基，附加不同濃度的NAA和6- BA，置于溫度25 ℃、光照強度2 000 lx和光照時間12 h·d-1的環境中培養，30 d后統計植株高度、葉片數、根數等生長情況。

1.2.5 脫毒苗大田種植試驗

脫毒苗的移植采用4個配方，蛭石、蛭石+泥炭(1∶1)、蛭石+河沙(1∶1)、雙層基質即底層鋪20 cm厚的營養土，上層鋪蛭石5 cm，脫毒苗移植后用塑料薄膜覆蓋，夏天高溫還需加黑膜，保持濕度90%以上，溫度在30 ℃左右，pH 6.5左右，基質就有良好的通氣性。

2 結果與分析

2.1不同培養基對莖尖成苗率的影響

設13組含有不同濃度激素的MS培養基，每組培養基接20個莖尖，50 d后觀察結果。表1表明，MS培養基中添加不同濃度的激素均可誘導莖尖成苗，對花旗馬鈴薯莖尖再生成苗率最好培養基配方是MS+6- BA 1.00 mg·L-1+NAA 0.10 mg·L-1，成苗率達到50%。

2.2指示植物病毒檢測結果

以千日紅對試管苗用嫁接法進行病毒檢測，脫毒率達到59%。對已脫毒苗進行快速繁殖，對未脫毒的苗進行淘汰[5]。

2.3不同培養基對脫毒苗快速繁殖的影響

表2表明，NAA能促進脫毒苗的生根，但隨著6- BA濃度的升高，NAA的生根作用被抑制。6- BA濃度高于0.50 mg·L-1時，莖段出現愈傷組織化，且苗生長緩慢，顏色變淺。由此可見，低濃度的NAA與低濃度的6- BA結合最適合組培苗的快速繁殖[6]。

表1 莖尖分生組織在不同培養基中成苗情況

表2 不同培養基對花旗馬鈴薯品種脫毒苗快速繁殖的影響

2.4脫毒苗的大田種植

將花旗馬鈴薯脫毒苗種在4個基質配方中，7 d后打開薄膜(表3)生長在蛭石配方中其成活率可達95%，脫毒苗移栽成活率最高的是生長在底層鋪一層20 cm厚的營養土，上層鋪蛭石5 cm雙層基質中其成活率可達到96%，在蛭石+泥炭配方中為85%，成活率最低的是生長在蛭石+河沙 配方中70%；生長50 d后統計每株微型薯數結果為，生長在蛭石配方中，每株平均微型薯數為3.1粒，接微型薯最好的是在底層鋪20 cm厚的營養土，上層鋪蛭石5 cm雙層基質，其每株平均微型薯數3.5粒，在蛭石+泥炭配方中每株平均微型薯數為2.0粒，每株微型薯最低的是生長在蛭石+河沙配方中，每株平均微型薯數1.5粒。

表3 花旗馬鈴薯脫毒苗對微型薯生產的影響

3 小結與討論

馬鈴薯莖尖分生組織可以獲得脫毒苗，為馬鈴薯病毒病的防治展示了廣闊的前景[7- 8]。但不同激素濃度的培養基對莖尖出苗率有很大的影響。6- BA是影響花旗馬鈴薯成苗的一個重要因子。NAA是影響甘薯莖尖成苗的一個次要因子，其濃度在0.1～0.2 mg·L-1最為合適。在馬鈴薯莖段快速繁殖過程中，低濃度的6- BA和NAA結合能促進腋芽的萌發，高濃度的6- BA使植株愈傷化嚴重，且NAA對植株的生根作用也會隨著6- BA濃度的升高而受到抑制。脫毒馬鈴薯原原種生產中，試管苗栽培基質的選用比較重要。生產上一般采用蛭石、珍珠巖、粗砂等作基質，也可用棉籽皮、鋸末、灰渣、森林土等，但必須進行高溫消毒。使用單一基質生產脫毒種薯存在營養供給不足的現象，雙層基質栽培試管苗生長快、長勢好，原原種產量高，成本低，比單一基質栽培具有明顯的優勢。

[1] 金黎平，屈冬玉，謝開云，等. 我國馬鈴薯育種資源和育種技術研究進展[J].種子，2003(5)：98- 100.

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[3] 王芳. 無土基質栽培生產脫毒馬鈴薯微型薯的關鍵技術[J].作物雜志，2008(5)：95- 99.

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[5] 梁秀芝. 脫毒馬鈴薯微型薯工廠化生產的關鍵技術[J]. 內蒙古農業科技，2001(1)：22- 23.

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[8] 金黎平，石瑛，李廣存，等. 馬鈴薯種質資源重要性狀的基因發掘及遺傳多樣性研究[C]//馬鈴薯產業與現代可持續農業，2015：139- 144.

(責任編輯：張瑞麟)

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：0528- 9017(2017)09- 1577- 02

2017- 06- 30

浙江省重大攻關項目(2012C12901- 2)；寧波市重大科技項目(2015C110013),浙江省農業新品種選育重大科技專項(2016C02050- 7- 6)

王 芳(1981—)，女，浙江寧波人，農藝師，主要從事良種選育推廣工作。

文獻著錄格式：王芳，黃堅，嚴成其，等. 花旗馬鈴薯品種莖尖脫毒與快繁技術[J].浙江農業科學，2017，58(9)：1577- 1578，1583.

10.16178/j.issn.0528- 9017.20170924