不同養殖模式鴨腸道大腸桿菌耐藥性分析

侯鳳香 金俊杰 李培德 金大春 錢錦銘（溫州科技職業學院動物科學學院（溫州市農業科學研究院）325006）

不同養殖模式鴨腸道大腸桿菌耐藥性分析

侯鳳香 金俊杰 李培德 金大春 錢錦銘*（溫州科技職業學院動物科學學院（溫州市農業科學研究院）325006）

為對比不同養殖模式下，鴨大腸桿菌的耐藥性，本文針對傳統平養與網床圈養2種不同養殖模式下的臨床健康鴨群，分離鑒定出47株大腸桿菌，選用20種抗生素對其進行耐藥性測定分析。結果顯示，傳統平養的鴨場其耐藥性、耐藥普均較網床圈養嚴重的多，在20種抗生素中，傳統平養對3種藥物敏感，網床圈養對7種藥物敏感；對其他藥物的耐藥率，除鏈霉素的耐藥率外，傳統平養的鴨場均高于網床圈養；多重耐藥方面，傳統平養的24株菌中有2株對所有20種受試抗菌藥物均敏感，網床圈養的23株菌中有6株對所有20種受試抗菌藥物均敏感，網床圈養有2R、4R、6R、8R；傳統平養的耐藥普較廣，2R-12R均存在，在兩種模式中，3R以上菌株網床圈養占34.78%，傳統平養的79.17%。結果表明：網床圈養養殖可以減緩耐藥性產生。

養殖模式；鴨；耐藥性

大腸埃希氏菌 (E.coli）通常被稱為大腸桿菌，是Escherich在1885年發現的，在相當長的一段時間內，一直被當作正常腸道菌群的組成部分，認為是非致病菌。直到20世紀中葉，才認識到大腸桿菌為條件下致病菌，非致病性大腸桿菌容易獲得致病性大腸桿菌的毒力因子而轉變為致病菌，引起動物和人的多種疾病[1]，尤其對嬰兒和幼畜 (禽），常引起嚴重腹瀉和敗血癥。20世紀50年代禽致病性大腸桿菌幾乎沒有耐藥性產生，而60年代的分離株對鏈霉素、四環素產生了耐藥性。

伴隨著畜牧業的規模化發展，在畜禽的養殖過程中，抗菌藥物被廣泛地用于疫病的治療與預防，導致細菌的耐藥性逐漸增強，特別是禽源性大腸桿菌，其耐藥菌株越來越多，多重耐藥菌株也在不斷增加，有的分離株對一些尚未推廣使用的新型抗生素也具有很強的耐藥性[2-3]，同時，也有文獻報道，細菌的耐藥性可以通過動物源、食物源傳染給人類[4-5]，而使許多抗生素在治療人的細菌性疾病時無效，從而嚴重威脅人類的健康。

鴨大腸桿菌病是由大腸桿菌引起的一種急性敗血性傳染病，各年齡均可感染，以2～6周齡的小鴨為主。特征是發病急、死亡快。剖檢變化以敗血癥為主，肝臟腫大，呈膽汁狀的銅綠色或是青銅色；脾臟腫大，呈紫黑色斑紋狀；肺有淤血或水腫；卵巢出血；肝被膜、心包膜和氣囊壁表面等附有黃白色纖維素性滲出物；全身漿膜呈急性滲出性炎癥，對養鴨業的危害很大。本文通過對傳統平養與網床圈養兩種不同養殖模式，采集臨床健康鴨泄殖腔拭子，分離出大腸桿菌，選取20種抗生素，進行耐藥性檢測，并進行對比分析，以降低對養殖業的危害，減少菌株耐藥性的傳播，保障公共衛生安全，為制定有效的用藥方案及控制大腸桿菌耐藥性發展提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗菌株

47株菌株分別采集自溫州3家傳統平養與3家網床圈養鴨場內的臨床健康鴨群；大腸埃希菌質控菌株ATCC25922購自溫州康泰生物科技有限公司。

1.1.2 培養基

Kary-Blair運送培養基購自青島海博生物技術有限公司；麥康凱、伊紅美藍、營養瓊脂、MH平皿培養基均購自溫州康泰生物科技有限公司。

1.1.3 細菌微量生化反應管與藥敏紙片

腸桿菌科微量生化反應管、鏈霉素 (S）、卡那霉素(K）、慶大霉素 (CN）、阿米卡星 (AK）、妥布霉素 (TOB）、大觀霉素 (SH）、復方新諾明 (SXT）、氨芐西林 (AMP）、頭孢唑林 (KZ）、頭孢曲松 (CRO）、頭孢噻肟 (CTX）、頭孢哌酮/舒巴坦 (SCF）、阿莫西林/棒酸 (AMC）、諾氟沙星(NOR）、氧氟沙星 (OFX）、環丙沙星 (CIP）、恩諾沙星(ENR）、四環素 (TE）、多西環素 (DO）、氟苯尼考 (FFC）藥敏紙片均購自杭州天和微生物試劑有限公司。

1.2 方法

1.2.1 菌株分離、鑒定

采集臨床健康鴨群泄殖腔拭子樣品，移入Kary-Blair運送培養基內，于12h內劃線接種至麥康凱平皿培養基中，37℃培養18h。挑取麥康凱平皿培養基上粉紅色單個菌落，劃線接種至伊紅美藍平皿培養基內，37℃培養18h。挑取伊紅美藍平皿培養基上深紫色、帶金屬光澤單個菌落，劃線接種至營養瓊脂平皿培養基內，37℃培養18h[6]。將待檢菌接種至腸桿菌科微量生化反應管中，37℃培養培養24～96h，觀察并記錄生化反應結果，按說明書予以判定。

1.2.2 藥敏試驗

按照臨床和實驗室標準協會 (Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）推薦的K-B藥敏紙片法進行藥敏試驗，每次測定均以質控菌株ATCC25922為參照。根據CLSI 2016標準判定結果[7]。

2 結果與分析

對52份鴨泄殖腔拭子樣品進行大腸桿菌分離培養，經菌落形態觀察、氫氧化鉀拉絲試驗、革蘭染色、生化鑒定得到47株大腸桿菌，分離率為90.4%。其中傳統平養鴨場26份樣品，分離鑒定得到24株大腸桿菌，網床圈養鴨場26份樣品，分離鑒定得到23株大腸桿菌。

2.1 藥物敏感性結果

傳統平養養鴨場分離到的24株大腸桿菌對阿米卡星、大觀霉素、頭孢哌酮/舒巴坦三種藥物敏感，耐藥率為0；對剩余的17種藥物均具有不同的耐藥率，對卡那霉素、鏈霉素、新諾明、氟苯尼考、多西環素、氨芐西林、阿莫西林/棒酸七種藥物具有較高的耐藥性 (41.67～79.17%）；對四環素對四環素的耐藥性最高，高達83.33%。相對比下，網床圈養養鴨場分離到的23株大腸桿菌對阿米卡星、大觀霉素、頭孢唑林、頭孢噻肟、頭孢哌酮/舒巴坦、氧氟沙星、環丙沙星七種藥物敏感，耐藥率為0；對剩余的13種藥物均具有不同的耐藥率，對其中的新諾明、多西環素、四環素、鏈霉素、氨芐西林具有較高的耐藥率72.73%，為最高；對新諾明、鏈霉素、氟苯尼考、氨芐西林、諾氟沙星、阿莫西林/棒酸、多西環素7種藥物具有較高的耐藥性 (43.24%～75.68%）。藥敏試驗結果見附表。

2.2 多重耐藥性結果

在47株鴨腸道大腸桿菌分離株中，傳統平養的24株菌中有2株對所有20種受試抗菌藥物均敏感，網床圈養的23株菌中有6株對所有20種受試抗菌藥物均敏感；兩種養殖模式均是0株對1種抗菌藥物耐藥；網床圈養的6株對2種抗菌藥物耐藥 (2R），傳統平養的3株對2種抗菌藥物耐藥(2R）；網床圈養0株對3，5，7，9-20種抗菌藥物耐藥，傳統平養的22株均存在不同程度的多重耐藥，耐藥性最為嚴重的1株對12種抗菌藥物耐藥 (12R）；在分離菌株中，3R以上菌株網床圈養占34.78%，傳統平養的79.17%。多種耐藥結果見附圖。

3 討論

本研究顯示，傳統平養的鴨場其耐藥性、耐藥普均較網床圈養嚴重的多，在20種抗生素中，傳統平養對3種藥物敏感，網床圈養對7種藥物敏感；對其他藥物的耐藥率，網床圈養除鏈霉素的耐藥率高于傳統平養的鴨場外，其他耐藥率均低于傳統平養的鴨場；在多重耐藥方面，傳統平養的24株菌中有2株對所有20種受試抗菌藥物均敏感，網床圈養的23株菌中有6株對所有20種受試抗菌藥物均敏感，網床圈養有2R、4R、6R、8R；傳統平養的耐藥普較廣，2R-12R均存在，在兩種模式中，3R以上菌株網床圈養占34.78%，傳統平養的79.17%，由此可見，網床圈養養殖可以減緩耐藥性產生。

傳統的平養模式即設置水池或是提供水槽，供鴨洗浴嬉戲，糞污直接排泄于地面、水中，污染環境、水體、鴨體，增加鴨與各種病原體接觸的機率，導致發病。鴨大腸桿菌病的發生與鴨的飼養環境與飼養方式密切相關，帶菌的鴨在其活動范圍內也可通過排泄的糞便污染當地的食物、草場、水源或其他水體及場所，造成交叉污染和感染，危害極大。網床圈養模式

鴨在網床上面自由活動，網下糞便被直接收集，該模式提高了鴨養殖的衛生水平，減少疫病的傳播，李花柚等[8]研究報道，蛋鴨生態網床圈養技術可以使蛋鴨大腸桿菌病發病率下降90%左右，獸藥使用亦下降90%，大大降低飼養成本。

大腸桿菌病的發病率和死亡率較高，每年給世界養禽業帶來嚴重損失。同時，禽類是人源腸外致病性大腸桿菌的一個傳播媒介，加強中國禽致病性大腸桿菌的防制和監控，對養禽業發展及公共衛生安全具有重要意義[9]。伴隨著禽致病性大腸桿菌耐藥性的加劇，使禽大腸桿菌病上升為危害養禽業最棘手的疾病之一。減緩耐藥性的產生或是消除耐藥性已成為當前重要課題，有研究表明，中草藥對大腸桿菌的防治具有很好的作用，不僅可以抑菌治病，還可以消除耐藥性，同時安全無毒副作用[10]。改變傳統養殖模式，走生態化養殖之路，也可以減緩耐藥性產生，對促進畜牧業的轉型升級具有重要作用。本文為制定有效的用藥方案及控制大腸桿菌耐藥性問題提供參考及理論依據。

附表 兩種養殖模式鴨腸道大腸桿菌分離株藥敏試驗結果

附圖 兩種養殖模式鴨腸道大腸桿菌對20種抗菌藥物的多重耐藥性分布

[1]何敏,易本馳,陳敏.豬大腸桿菌對杭生素耐藥性的研究進展[J].黑龍江畜牧獸醫,2011(3):27-30.

[2]岳秀英,葛榮,吳曉嵐,等.四川省豬、雞源大腸桿菌對抗生素耐藥性研究[J].中國獸醫雜志,2017,53(1):93-94.

[3]宿志民,孫燕.泰安地區雞源致病性大腸桿菌流行病學調查與耐藥性分析[J].山東畜牧獸醫,2016,37:36-37.

[4]Guerra B,Junkar E,Schroeter A,et al.Phenotypic and genotypic characterization of antimicrobial resisitance in German Escherichia coli isolates from cattle.swine and poultry[J].Journa of Antimicrobial Chemotherapy,2003,52:489-492.

[5]Wite W.Ecological impact of antibiotic use in animals on different complex microflora:environment[J].Intemational Journal of Antimicrobial Agents,l 2000,14:321-325.

[6]陳東科,孫長貴.實用臨床微生物學檢驗與圖譜[M].北京:人民衛生出版社,2011:314-319.

[7]Committee for Clinical Laboratory Standard.Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing；26th edition[S].Wayne,PA:CLSI,2016.

[8]李花柚,陳培賽.蛋鴨生態網床圈養技術推廣效果調查[J].養殖與飼料,2015(4):19-20.

[9]鄧伯雄,劉情,鄧安元,等.鴨致病性大腸桿菌分離鑒定及其相關致病性分析[J].中國畜牧獸醫,2016,43(1):235-241.

[10]胡宇莉.中草藥防治禽大腸桿菌病的研究進展[J].山東家禽,2003(4):36-38.

溫州市公益性科技計劃項目 （N20140038）；溫州市2015年農業豐收計劃項目。

侯鳳香 （1982-），女，山東省鄆城縣人，碩士，講師，主要從事動物傳染病學研究工作。

*通訊作者：錢錦銘 （1961-），男，浙江省溫州市人，副教授，主要從事生態畜牧業研究工作。