中草藥浸出液體外驅殺兩種水產致病性盾纖蟲的研究

林能鋒 鄭晨艷 王侯杰 曾 紅＊

（1.福建省農業科學院生物技術研究所 福州 350003；2.福建師范大學生命科學學院 福州 350108）

中草藥浸出液體外驅殺兩種水產致病性盾纖蟲的研究

林能鋒1鄭晨艷2王侯杰2曾 紅2＊

（1.福建省農業科學院生物技術研究所 福州 350003；2.福建師范大學生命科學學院 福州 350108）

水滴偽康纖蟲和海洋尾絲蟲是嚴重危害海水養殖魚類的兼性寄生纖毛蟲，中草藥在水產寄生蟲病的防治中有著廣泛的應用，具有無藥物殘留，無污染等優點。應用10種常見中草藥浸出液對兩種盾纖蟲的體外驅殺效果的研究表明，水滴偽康纖蟲對首烏藤、大黃和辣椒的敏感度較高，在藥物濃度為0.5 g/L時，驅蟲率分別為0.85、0.59和0.59，與空白對照組對比差異極顯著（P＜0.01）；而海洋尾絲蟲則對石榴皮、貫眾、首烏藤和辣椒表現出了較高的敏感度，在藥物濃度為0.5 g/L時，驅蟲率分別為0.55、0.51、0.43和0.37，與空白對照組相比差異極顯著（P＜0.01）。馬鞭草、檳榔、虎杖、連翹、地榆等幾味藥物對兩種盾纖蟲的驅殺效果則不明顯。試驗結果提示，首烏藤和辣椒兩種中草藥浸出液在體外均表現出了對兩種盾纖蟲較好的驅蟲效果，同時不同藥物的驅殺效果差異也表明兩種盾纖蟲對藥物的反應機制可能存在著一定的差異。

水滴偽康纖蟲 海洋尾絲蟲 中草藥浸出液 驅蟲率

AbstractPseudocohnilembus persalinus and Uronema marinum could cause severe mortalities in cultured marine fishes.They had been recognized as facultative parasites.Chinese medicinal herb has been widely used in the prevention of aquatic parasitic disease in China.The present study screened 10 candidate chinese herbal medicines for repellent effect to these pathogens in vitro.Leachate of caulis polygoni multiflori,rhubarb and pepper(concentration 0.5 g/L,within a 30 min assay period)had significant repellent effect to P.persalinus compared with the blank control group(P<0.01).The anthelmintic rates were 0.85,0.59 and 0.59,respectively.U.marinum shows high sensitivity to pomegranate peel,Cyrtomium fortunei,caulis polygoni multiflori and pepper compared with the blank control group (P<0.01),the anthelmintic rates were 0.55,0.51,0.43 and 0.37,respectively.But some herbs such as verbena,areca,polygonum,forsythia,Radix sanguisorbae showed less effectiveness to these two kinds of scuticociliates in vitro.Leach liquor of caulis polygoni multiflori and pepper had direct influence to the scuticociliates in vitro,while other candidate herbs also had repellent effect to the parasites and had other indirect effect to the fish.In view of these findings,we discuss the potential utility of chinese medicinal herbs as a strategy for the control of scuticociliatosis in marine fish farms.

Key wordsPseudocohnilembus persalinus Uronema marinum Chinese medicinal herb Anthelmintic rate

規模化網箱和工廠化養殖方式已逐漸成為我國海洋魚類養殖的主要模式，但由于養殖技術和管理水平還不夠成熟，也帶來很多病害問題。其中纖毛類寄生蟲是造成海水養殖魚類損失的一類重要寄生性病害生物。在牙鲆、大菱鲆、紅鰭東方鲀等海水養殖魚類中，盾纖類纖毛蟲病帶來的危害越來越嚴重[1-2]。

水滴偽康纖蟲 （Pseudocohnilemus persalinus）、海洋尾絲蟲（Uronema marinum）同屬盾纖目（Scuticociliatida）。可自由生活于各種養殖和育苗水體中，一旦入侵魚體就會快速繁殖，刺激魚類表皮產生黏液，受感染魚體表顏色變暗，攝食量減少，鰓蓋內側發紅、潰爛，皮膚和皮下肌肉出現壞死性潰瘍，腸道松弛、擴張，病情嚴重的魚肝臟還有出血現象[3-5]。盾纖毛蟲喜好聚集在細菌菌群豐富的部位，因此，常常表現出細菌感染并發的癥狀[3]。魚群患病后，死亡率高，危害嚴重。有報道稱，嚴重時，網箱養殖紅鰭東方鲀暴發海洋尾絲蟲病時，死亡率可高達60%～80%[5]。

在水產寄生性纖毛蟲病防治中，化學合成藥物和中草藥的使用是最常見的手段。化學合成藥物作用直接、快速，Iglesias R等[6]篩選了52種抗原蟲類的化學藥物，發現有13種對離體的盾纖蟲Philasterides dicentrarchi有效，但有一些化學合成藥物在水產中禁止使用，且可能存在藥物殘留和藥物毒害等問題卻未加以探討。國內在生產上對盾纖類纖毛蟲病主要使用如過氧化氫、福爾馬林等外用消毒劑進行藥浴處理[7]。中草藥具有毒副作用小、不易產生耐藥、無藥物殘留超標、成本低等優勢，在水產病害防治中得到廣泛應用。一些研究者發現，辣椒、生姜、檳榔、苦楝等中草藥對防治幾種常見的水產病害纖毛蟲等有著較好的殺滅效果[8-11]。

本文用10種常見的中草藥浸出液對水滴偽康纖蟲和海洋尾絲蟲的體外驅蟲效果進行了探討，為水產養殖業者在臨床防治盾纖蟲病提供參考。

1 材料與方法

1.1 水滴偽康纖蟲和海洋尾絲蟲 兩種盾纖蟲由中國海洋大學原生動物試驗室惠贈，利用蝦肉發酵培養基進行保種和傳代培養。進行趨化性測試的蟲體培養密度大于5 000 ind/mL。

1.2 中草藥浸出液樣品制備 馬鞭草、地榆、連翹、馬齒莧、石榴皮、貫眾、大黃、檳榔、虎杖、首烏藤、辣椒等中草藥購自福州回春藥店。

中草藥測試液：依據閆茂倉（2010）方法[12]，將藥材稱2 g（藥草體積較大的先用研缽研碎）在純水中浸泡2 h，然后進行煮沸，沸騰持續10 min后用四層紗布把藥草渣濾出，藥液保存備用；在藥草渣中加入純水再進行與上一步煮沸相同過程，混合兩次藥液進行濃縮，濃縮至40 mL原液，使生藥含量為50 g/L，4℃保存備用。使用時，取中藥原液100 μL用經過濾煮沸海水稀釋至5 mL。

1.3 驅蟲率測試方法 將10 μL蟲體培養液和10 μL中草藥液混合后滴在有計數方格的干凈載玻片一端，載玻片另一端滴加20 μL海水液滴，液滴間距2 cm。用干凈的牙簽從海水液滴端向加入蟲體的液滴端輕輕劃出一條細的通道，使兩端液滴連通，趨化反應進行30 min，重復試驗4次。對照組以海水替換中草藥測試液。驅蟲率（Anthelmintic rate）計算方法如下：A.R.=游向另一端的蟲體數/蟲體總數。

1.4 數據處理 試驗數據用Microsoft Excel軟件進行統計學差異顯著性分析 （成對雙樣本T檢驗）處理，分別用 P＞0.05、0.01＜P＜0.05、P＜0.01 來表示差異不顯著、差異顯著和差異極顯著。

2 結 果

2.1 11種中草藥浸出液對水滴偽康纖蟲的驅蟲效果 測試結果表明（見圖1），首烏藤、大黃、辣椒的浸出液（0.5 g/L）對水滴偽康纖蟲具有明顯的驅蟲效果，其驅蟲率分別為0.85、0.59和0.59，且與以海水測試液的對照組比較，驅蟲效果差異極顯著 （P＜0.01）。而馬鞭草、地榆、檳榔等對水滴偽康纖蟲的驅蟲效果并不明顯。

圖1 11種中草藥對水滴偽康纖蟲的驅蟲效果

2.2 10種中草藥浸出液對海洋尾絲蟲的驅蟲效果試驗結果表明（見圖2），海洋尾絲蟲對所測試的中草藥浸出液反應的敏感性有較大的差異，在10種濃度為0.5 g/L的中草藥測試液中，石榴皮、貫眾、首烏藤、辣椒測試液對海洋尾絲蟲有較好的驅蟲效果，而海洋尾絲蟲對馬鞭草、大黃、檳榔等測試液的敏感性較低。在顯著性分析中，石榴皮、貫眾、辣椒浸出液組的驅蟲效果極顯著（P＜0.01）高于空白對照組，連翹、馬齒莧、虎杖、首烏藤浸出液組表現為顯著（0.01＜P＜0.05）。

圖2 10種中藥材料對海洋尾絲蟲的驅蟲率

3 討 論

中草藥具有價格便宜、來源廣泛、副作用相較化學試劑小、不易產生抗性等優點，已被廣泛應用于水產養殖的病害預防治療中，宿斌等[13]應用復方中草藥蒿芩驅蟲散（由檳榔、青蒿、川楝子等組成）拌料口服防治大菱鲆盾纖蟲病取得較好的效果，但對中草藥體外驅殺盾纖蟲效果的研究并未見報道。

本研究參考有關中草藥防治魚類病害及中草藥浸出液制備方法的資料，選擇常見、易得的中草藥物設計實施本試驗。

通過本次試驗，發現大黃、首烏藤、辣椒等對水滴偽康纖蟲的驅蟲效果極顯著高于海水對照組。而海洋尾絲蟲則對石榴皮、貫眾、首烏藤、辣椒等浸出液表現極為敏感。鄒峰等[14]對刺激隱核蟲幼蟲的趨化性研究中發現，刺激隱核蟲幼蟲對五倍子、貫眾、檳榔、大黃、虎杖、苦楝等6種中草藥的趨化率極顯著（P＜0.01）低于海水對照組。國內研究者在用中草藥浸出液殺滅刺激隱核蟲的試驗中發現，辣椒和檳榔的殺蟲效果最好，同時對其包囊也有一定的殺滅效果[15-16]。比較發現，不同種類的纖毛蟲對于藥物的敏感性有較大的區別，但辣椒則顯示出對幾種病害纖毛蟲都有較好的驅殺效果，可能與辣椒中含有能夠對蟲體產生強烈刺激的辣椒素這種驅蟲有效成分有關，其對纖毛蟲的驅殺機理還有待進一步研究。

在對兩種盾纖類纖毛蟲的驅殺試驗結果中，一些藥物如首烏藤、連翹都富含黃酮類的抑菌成分，虎杖富含蒽醌類抑菌成分，石榴皮含有鞣質、生物堿等驅蟲、抑菌的有效成分，上述這些中草藥也在本試驗中得到較顯著的驅蟲效果。而魚類感染盾纖蟲病例大多伴隨著細菌感染，因此，將上述中草藥與其它藥物進行配伍，對抑制繼發性細菌感染、防治魚類盾纖蟲病有可能獲得更好的效果。

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Repellent effect of chinese herbal leachate to two species of scuticociliate in vitro

Lin Nengfeng1Zheng Chenyan2Wang Houjie2Zeng Hong2*
(1.Institute of Biotechnology,Fujian Academy of Agriculture Science,Fuzhou 350003;2.College of Life Science,Fujian Normal University,Fuzhou 350108)

A

1003-4331（2017）05-0013-03

國家青年自然科學基金資助項目(31201698)、福建省自然科學基金資助項目(2013J01120)、福建省科技計劃項目-省屬公益類科研院所基本科研專項（2015R1019-11）資助。

林能鋒（1972-），男，博士，副研究員。主要從事海洋動物遺傳育種與水產動物病害防治研究，E-mail:lnfeng@hotmail.com。

＊通信作者：曾紅（1972-），女，博士，副教授。主要從事動物細胞分子生物學研究，E-mail:zhbio@fjnu.edu.cn。