let-7 miRNA 基因標志物在甲狀腺癌中的表達分析

馮 琨

let-7 miRNA 基因標志物在甲狀腺癌中的表達分析

馮 琨

目的 探討let-7 miRNA 基因標志物在甲狀腺癌組織中的表達及診斷意義。方法 選取臨床確診的26例甲狀腺癌患者, 提取患者的甲狀腺癌組織和甲狀腺癌旁組織, 并采用Real-time PCR檢測技術檢測患者的甲狀腺癌組織和甲狀腺癌旁組織中let-7 miRNA基因標志物的含量, 并進行比較。結果 應用Real-time PCR檢測技術發現, 甲狀腺癌組織中的平均let-7 miRNA表達為(0.71±0.19), 顯著低于甲狀腺癌旁組織的(1.35±0.32), 比較差異具有統計學意義(t=8.769, P＜0.05)。結論 let-7 miRNA在甲狀腺癌發生中具有重要意義, 可成為甲狀腺癌新的基因診斷標記物以及基因治療靶點。

let-7 miRNA；基因標志物；甲狀腺癌

甲狀腺癌作為內分泌系統最為常見的惡性腫瘤臨床上多表現為甲狀腺結節, 占甲狀腺結節的5%~15%［1］。在臨床中,甲狀腺癌患者首選手術治療, 鑒于甲狀腺結節的高發病率,而甲狀腺惡性腫瘤僅占其中極小部分, 又難以在術前進行明確的診斷, 這往往導致兩種不良后果：①手術適應證和手術范圍被擴大, 甲狀腺被無辜切除；②這種診斷性手術的目的性不明確, 不能等同于惡性腫瘤的根治術, 留下復發隱患。因此, 在手術前甲狀腺結節的病理性質明確診斷, 減少不良反應的發生具有重要意義。本文通過對比分析甲狀腺癌組織以及癌旁組織中let-7 miRNA基因標志物的含量, 探討let-7 miRNA 基因標志物在甲狀腺癌組織中的表達及診斷意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年8月~2017年5月在本院內分泌科臨床確診的26例甲狀腺癌患者中的癌組織以及癌旁組織作為研究資料, 其中男12例, 女14例, 年齡25~69歲, 平均年齡(49.36±9.83)歲。

1.2 組織中let-7 miRNA基因的檢測 取26例甲狀腺癌患者的蠟塊標本, 將標本進行純化, 并通過聚合酶鏈反應進行擴增后, 對其序列進行直接測量, 所得出的結果與BRAF基因組DNA正常序進行比對分析, 確定是否存在有點突變的情況發生。通過Real-time PCR檢測技術, 檢測上述患者的癌組織以及癌旁組織中let-7 miRNA基因標志物的含量。在實驗中, 為明確PCR產物中是否存在有本研究的目標DNA片段, 研究者選取5.0 μl PCR產物與1.0 μl DNA加樣緩沖液進行混合后, 通過加樣處理, 將1.0 μl DNA標記物作為研究的分子對照, 在濃度為6%的聚丙烯酞胺凝膠采用電泳處理,并進行染色。將通過電泳最終確定的PCR產物通過純化并進行測序, 而后測定癌組織以及癌旁組織中let-7 miRNA基因標志物的含量。

1.3 統計學方法 采用SPSS19.0統計學軟件對數據進行處理。計量資料以均數±標準差s)表示, 采用t檢驗。P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

應用Real-time PCR檢測技術發現, 甲狀腺癌組織中的平均let-7 miRNA表達為(0.71±0.19), 顯著低于甲狀腺癌旁組織的(1.35±0.32), 差異具有統計學意義(t=8.769, P＜0.05)。見表1。

表1 let-7 miRNA基因標志物在甲狀腺癌中的表達情況比較s)

表1 let-7 miRNA基因標志物在甲狀腺癌中的表達情況比較s)

注：與甲狀腺癌組織比較,aP＜0.05

?

3 討論

甲狀腺細針穿刺細胞學檢查(FNA)在我國也正在逐步開展, 然而遠未普及, 國內多數醫院仍未將FNA 采納為一種常規的術前檢查項目。目前文獻報道許多基因表達產物可作為FNA良、惡性結節診斷及鑒別診斷的標志物。甲狀腺癌最常見的標志物包括BRAF突變和ras基因及RET/ PTC。這些基因表達產物被發現超70%乳頭和濾泡甲狀腺癌中存在［2］, 國內外研究顯示, 這些分子標志物已用于甲狀腺癌的FNA的分子診斷技術。甲狀腺癌的激活編碼通常位于細胞內膜表面G相關蛋白質, 傳導細胞膜受體酪氨酸激酶和G偶聯蛋白產生的信號, 參與MAPK、PI3K/AKT和其他受體信號通路激活［3］。

近幾年, 大量研究顯示, 幾種miRNA在BRAF與RAS陽性的腫瘤和甲狀腺乳頭狀癌中高表達, 而miRNA在RAS基因突變的腫瘤中也有表達。同樣在甲狀腺濾泡狀癌中也有幾種miRNA呈陽性表達。有關let-7 miRNA功能的新近研究顯示［4］：在肺腫瘤以及甲狀腺乳頭狀癌細胞增殖中, let-7 miRNA的作用與RAS蛋白表達水平下降有關。研究者發現將let-7 miRNA轉入RET基因突變的甲狀腺癌細胞系TPC-1后該細胞的增殖收到抑制, 并且MAPK蛋白活性也被下調［5］。另一重要發現是let-7 miRNA能夠增加甲狀腺細胞的分化標志物的表達, 說明let-7 miRNA在甲狀腺細胞的成熟和分化中起關鍵作用, RET基因突變后let-7 miRNA表達的降低是細胞轉變為癌細胞的重要環節［6］。本研究結果顯示, 甲狀腺癌組織中的平均let-7 miRNA表達為(0.71±0.19), 顯著低于甲狀腺癌旁組織的(1.35±0.32), 差異具有統計學意義(t=8.769, P＜0.05)。表明let-7 miRNA 在甲狀腺癌發生中具有重要意義, let-7 miRNA可成為甲狀腺癌新的基因診斷標記物以及基因治療靶點［7］。換言之, let-7 miRNA是存在于甲狀腺細胞中的重要的抑癌基因, 在正常甲狀腺組織中表達,在甲狀腺癌組織中表達下降［8］。目前為止有關let-7 miRNA在甲狀腺癌乃至于其他腫瘤中作用的研究仍然處于基礎研究層面, 鑒于miRNA相對于以往的腫瘤標志物有上述諸多優勢, 并且出于對let-7 miRNA在甲狀腺癌的診斷以及治療方面有巨大潛力的認識, 作者認為let-7 miRNA很可能成為新的甲狀腺癌標志物和新的治療靶點。

［1］ 閆慧嫻, 谷偉軍, 呂朝暉, 等.結節大小與甲狀腺癌風險的臨床研究.中華內分泌代謝雜志, 2015, 31(1):10-13.

［2］ 胡早秀, 趙永和, 陳亞娟.乳腺癌再發甲狀腺癌與單發甲狀腺癌ER表達的研究.診斷病理學雜志, 2016, 23(2):124-126.

［3］ 霍美蓉, 劉欣.甲狀腺癌分子診斷標志物的研究進展.醫學與哲學, 2017, 38(12):67-71.

［4］ 劉文靜.以PGC為靶標的leT-7miRNA血清表達與胃癌及其癌前疾病的關系.中國醫科大學, 2014.

［5］ 陳烈鉗, 邱明寧, 譚國斌,等.MicroRNA let-7家族與腫瘤的研究進展.現代腫瘤醫學, 2015, 23(4):571-575.

［6］ 葉蕾, 苗立云.MicroRNA let-7與肺癌的研究進展及展望.中華肺部疾病雜志:電子版, 2015, 8(2):92-94.

［7］ 陳方園, 陳清勇.MicroRNA let-7與腫瘤關系的研究進展.醫學綜述, 2011, 17(12):1797-1800.

［8］ 顧超.MiRNALet-7在氡致大鼠肺損傷中的表達改變.蘇州大學, 2014.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2017.19.020

2017-08-09］

150030 黑龍江省醫院內分泌科