建立凍干粉針劑車間微生物地圖

文/ 楊敏賢、黎敏婷、曹穗嫻

建立凍干粉針劑車間微生物地圖

文/ 楊敏賢、黎敏婷、曹穗嫻

建立凍干粉針劑車間潔凈區(qū)微生物數(shù)據(jù)庫，繪制出凍干粉針劑車間微生物地圖，其全面性、實用性、快捷性均符合公司要求——通過識別無菌潔凈區(qū)微生物分布，采用特定的微生物鑒定方法，將潔凈區(qū)環(huán)境監(jiān)測過程中收集的所有微生物進行鑒定，在菌種來源的引入、生長條件、特性等方面進行分析，建立微生物數(shù)據(jù)庫和凍干粉針劑車間潔凈區(qū)微生物地圖，并將分析結(jié)果用于指導消毒劑的選型。通過建立微生物地圖，控制微生物負荷，為企業(yè)在藥品生產(chǎn)過程中提供微生物污染溯源的分析方法及其有效的調(diào)查、監(jiān)管手段。凍

干粉針劑車間生產(chǎn)的產(chǎn)品為非最終滅菌的無菌注射劑，產(chǎn)品生產(chǎn)過程中的微生物控制至關(guān)重要。隨著國際藥品法規(guī)對無菌保障要求的不斷提升，同時2015年版《中國藥典》中建議對潔凈室和其他受控環(huán)境分離到的微生物進行鑒定，有助于污染調(diào)查，對無菌生產(chǎn)環(huán)境提供溯源依據(jù)[3]。國際上，建立微生物數(shù)據(jù)庫和微生物地圖是追溯產(chǎn)品微生物污染來源的有效方法，能夠為無菌藥品GMP 生產(chǎn)過程制定有效的控制措施提供依據(jù)。在質(zhì)量管理上，要引入國際上先進的管理技術(shù)，建立凍干粉針劑車間潔凈區(qū)微生物數(shù)據(jù)庫，繪制出凍干粉針劑車間微生物地圖，指導車間制定有效的微生物控制措施，降低微生物負荷，提高無菌保障水平。使企業(yè)的管理更加完善，更具國際化。現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

凍干粉針劑車間環(huán)境監(jiān)測點布點圖

材料與方法

儀器設備主要包括：SW-CJ-2FD凈化工作臺、BSC-1000ⅡA2生物安全柜、SPX-400-Ⅱ培養(yǎng)箱、XG1.GWX-0.36B脈動真空滅菌器、YC-968AIC(GSP)醫(yī)用冷藏箱、MAS-100NT浮游菌采樣器、API細菌數(shù)值鑒定系統(tǒng)。用具包括培養(yǎng)皿、刻度吸管（1.0 mL，2.0 mL）、接種環(huán)、試管、試管架。培養(yǎng)基使用胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基(3103726，廣東環(huán)凱）

凍干粉針劑車間微生物分布地圖

環(huán)境監(jiān)測微生物的鑒定和分析

環(huán)境監(jiān)測取樣點的確定——根據(jù)車間的面積、房間數(shù)，考慮到可能影響到產(chǎn)品質(zhì)量的關(guān)鍵區(qū)域及易于受到微生物污染的關(guān)鍵部位的分布，進行風險評估，設定了布點圖。

數(shù)據(jù)的采集統(tǒng)計——每月對凍干粉針劑車間潔凈區(qū)動、靜態(tài)環(huán)境監(jiān)測[1-2]及表面菌發(fā)現(xiàn)的微生物進行分離、鑒定并將數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計。

微生物的鑒定包括以下步驟：

步驟1：菌株分離、純化、培養(yǎng)。根據(jù)標準方法將環(huán)境中的菌株用平皿法分純培養(yǎng)出單個菌落。

步驟2：定向試驗。對細菌進行革蘭氏染色鏡檢觀察，根據(jù)革蘭氏染色結(jié)果，進行氧化酶實驗或觸酶實驗，再根據(jù)氧化酶實驗或觸酶實驗選擇對應型號的試劑條。例如：當鏡檢為革蘭氏陽性桿菌，其菌為厭氧芽孢菌時應選用API 20A。

步驟3：試劑條判斷。當試劑條培養(yǎng)基變?yōu)辄S色，反應結(jié)果記為陽性，培養(yǎng)基仍保持均勻的紫色，反應結(jié)果記為陰性。

步驟4：最終結(jié)果。將試劑條的反應結(jié)果輸入到軟件中，自動進行數(shù)據(jù)處理，出最終的結(jié)果。

結(jié)果

微生物數(shù)據(jù)統(tǒng)計

對2015年06月～2016年06月車間A級、B級、C級潔凈區(qū)環(huán)境及表面微生物監(jiān)測數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計與分析。

繪制出潔凈區(qū)微生物地圖

根據(jù)以上數(shù)據(jù)分析結(jié)果，按照菌屬分析結(jié)果，葡萄球菌分為：藤黃球菌、里拉微球菌、表面葡萄球菌、頭狀葡萄球菌。將葡萄球菌、陽性桿菌、陽性芽孢桿菌以不同顏色打點的標記繪制出潔凈區(qū)微生物地圖。

微生物地圖的全面性

統(tǒng)計2016年07月～2016年09月車間B級、C級潔凈區(qū)環(huán)境及表面微生物監(jiān)測鑒定數(shù)據(jù)，在已建立的凍干粉針劑微生物地圖中的菌種進行一一比對，均能涵蓋所有在車間潔凈區(qū)出現(xiàn)的菌落種類。

微生物地圖的實用性

從建立的凍干粉針劑車間微生物地圖得知，B級、C級的微生物菌種主要為葡萄球菌屬，潔凈區(qū)更衣間的微生物菌種較多，而且葡萄球菌為人員及環(huán)境常見菌。據(jù)此，車間增加人員更衣后更衣間的表面消毒以及人員手部的消毒頻次。

表1 潔凈區(qū)微生物檢定結(jié)果匯總表

表2 菌種來源分析表

表3 潔凈區(qū)微生物的菌落種類溯源時間對比表

車間根據(jù)凍干粉針劑車間微生物地圖的菌種類型和分布來源情況，擬選用0.02%次氯酸鈉替代現(xiàn)有消毒劑0.2%苯扎溴銨。

微生物地圖的快捷性

我們將建立凍干粉針劑車間微生物地圖前后，潔凈區(qū)微生物的菌落種類溯源時間進行對比，從表3可知，建立凍干粉針劑車間微生物地圖后，潔凈區(qū)微生物的菌落種類溯源時間從72.5 h縮短至24.5 h。

討論

建立凍干粉針劑車間微生物地圖能涵蓋所有在車間潔凈區(qū)出現(xiàn)的菌落種類，全面性達到目標；微生物地圖顯示的車間潔凈區(qū)微生物的分布、來源等信息，能夠為車間制定有效的控制措施提供依據(jù)，降低微生物負荷，實用性達到目標；可通過地圖快速查找潔凈區(qū)微生物的菌落種類，縮短微生物溯源時間，快捷性達到目標。

[1] 中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局，中國國家標準化管理委員會.GB/T 16293-2010，醫(yī)藥工業(yè)潔凈室( 區(qū)) 浮游菌的測試方法［S］．北京:中國標準出版社，2010．

[2] 中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局，中國國家標準化管理委員會.GB/T 16294-2010，醫(yī)藥工業(yè)潔凈室( 區(qū)) 沉降菌的測試方法［S］．北京:中國標準出版社，2010．

[3] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（2015版 四部）［S］．北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2015：通則9205

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