重樓同屬植物長柱重樓與藥用重樓的藥效學(xué)對(duì)比研究

李洪梅 孫建輝 康利平 霍海如 李小芹 黃圓圓 陳敏 黃璐琦

[摘要]重樓為多種中成藥的原料，由于市場(chǎng)需求量大幅增長，野生重樓資源日益減少，人工栽培生長緩慢，導(dǎo)致重樓資源緊缺。該研究比較了重樓同屬植物長柱重樓和藥典收載的云南重樓、七葉一枝花在鎮(zhèn)痛、抗炎、止血方面的藥理活性，以其擴(kuò)大重樓藥用資源范圍，保護(hù)重樓野生資源，滿足市場(chǎng)需求。該實(shí)驗(yàn)研究表明長柱重樓和云南重樓、七葉一枝花均具有鎮(zhèn)痛、抗炎、止血作用，可明顯降低醋酸致小鼠扭體次數(shù)，抑制角叉菜膠致大鼠足腫脹和醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高，縮短出血時(shí)間和凝血時(shí)間，且長柱重樓與云南重樓、七葉一枝花的鎮(zhèn)痛、抗炎、止血作用相當(dāng)。

[關(guān)鍵詞]長柱重樓； 鎮(zhèn)痛； 抗炎； 止血

Comparative pharmacodynamics study on Paris forrestii and

pharmacopoeial Paridis Rhizoma

LI Hongmei1， SUN Jianhui1， KANG Liping2， HUO Hairu1， LI Xiaoqin1，

HUANG Yuanyuan2， CHEN Min2*， HUANG Luqi2*

（1. Institute of Chinese Materia Medica， China Academy of Chinese Medical Sciences， Beijing 100700；

2. State Key Laboratory of Daodi Herbs，National Resource Center for Materia Medica， China Academy of

Chinese Medical Sciences， Beijing 100700， China）

[Abstract]Paris is a raw material of a variety of Chinese medicines， which has become deficient in resource due to market demand substantial growth and wild Paris resources reducing increasingly and the artificial cultivation slow growth This study compared pharmacological activity in analgesia and antiinflammatory and hemostasis effects of P forrestii with pharmacopoeial Paridis Rhizoma to expand its range of Paris medicinal resources and protect wild resources of Paris and meet market demand The experimental study showed that P forrestii and P polyphylla var yunnanensis and P polyphylla var chinensis had analgesic， antiinflammatory and hemostatic effects They can significantly reduce the number of writhing and inhibit rat foot swelling induced by carrageenan and mice capillary permeability induced by acetic acid and short the bleeding time and clotting time Their function is equivalent

[Key words]Paris forrestii； analgesia； antiinflammatory； hemostatic effect

重樓作為一種重要的中成藥原料，是云南白藥、宮血寧膠囊、季德勝蛇藥片、抗病毒顆粒等產(chǎn)品的主要原料。近年來，市場(chǎng)需求量大幅增長，巨大的需求缺口導(dǎo)致藥材價(jià)格飛漲，大量的采挖使得野生重樓資源日益減少，而人工馴化栽培存在生長緩慢、繁殖率低等困難。為了保護(hù)重樓野生資源，滿足市場(chǎng)需求，目前對(duì)重樓同屬植物的化學(xué)成分、藥理作用、臨床應(yīng)用、資源調(diào)查、人工栽培等多方面的研究已廣泛開展[1]。

《中國藥典》[2]2015年版收載的重樓Paridis Rhizoma為百合科植物云南重樓Paris polyphylla Smith var yunnanensis （Franch） Hand Mazz 或七葉一枝花P polyphylla Smith var chinensis（Franch） Hara的干燥根莖。我國重樓屬植物眾多，按照李恒老師分類系統(tǒng)，我國有19 種重樓屬植物[3]，包括長柱重樓P forrestii（Takht） H Li、南重樓P vietnamensis （Takht） H Li等。本研究在前期文獻(xiàn)調(diào)研、資源調(diào)查、化學(xué)成分研究基礎(chǔ)上，比較了重樓同屬植物長柱重樓和藥典收載的云南重樓、七葉一枝花在鎮(zhèn)痛、抗炎、止血方面的藥理活性，以其擴(kuò)大藥用重樓資源范圍，保護(hù)重樓野生資源，滿足市場(chǎng)需求。

1材料

11受試藥物云南重樓水提物，含生藥083 g·mL-1；七葉一枝花水提物，含生藥047 g·mL-1；長柱重樓水提物，含生藥050 g·mL-1；長柱重樓醇提物，含生藥067 g·mL-1，由中國中醫(yī)科學(xué)院中藥資源中心提供。

12動(dòng)物ICR小鼠，SPF級(jí)，體質(zhì)量18～22 g；SD大鼠，SPF級(jí)，體質(zhì)量180～200 g，雌雄各半，均由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供[動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào) SCXK（京）20120001]。小鼠和大鼠飼育在屏障環(huán)境下[實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào) SYXK（京）20130035]。endprint

13試劑角叉菜膠，Sigma公司產(chǎn)品（批號(hào) 021M0038V）；伊文思蘭，Solarbio公司產(chǎn)品（批號(hào)50813022）；冰醋酸，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品（批號(hào)20150704）。

14儀器PV200足趾容積測(cè)量儀，成都泰盟科技有限公司產(chǎn)品；AVE型半自動(dòng)生化分析儀，愛威科技實(shí)業(yè)有限公司產(chǎn)品。

2方法

21對(duì)醋酸所致小鼠疼痛反應(yīng)的影響[4]分組：取健康ICR小鼠，SPF級(jí)，體質(zhì)量18～20 g，將小鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分組，分別為模型對(duì)照組、云南重樓水提物、七葉一枝花水提物、長柱重樓水提物、長柱重樓醇提物各高、中劑量組（660，330 g·kg-1），每組10只，雌雄各半。

給藥：各組分別灌胃給予相應(yīng)藥物，模型對(duì)照組給予相同體積的蒸餾水（20 mL·kg-1），每日1次，連續(xù)給藥3 d。

指標(biāo)觀察：末次藥后1 h后腹腔注射08%醋酸溶液10 mL·kg-1，觀察記錄各小鼠5 min后15 min內(nèi)扭體次數(shù)，計(jì)算其抑制率。

22對(duì)角叉菜膠致大鼠足腫脹的影響[4]分組：選取健康SD大鼠，SPF級(jí)，雄性，體質(zhì)量180～200 g，將大鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分組，分別為模型對(duì)照組、云南重樓水提物、七葉一枝花水提物、長柱重樓水提物、長柱重樓醇提物各高、中劑量組（162，081 g·kg-1），每組10只。

給藥：各組分別灌胃給予相應(yīng)藥物，模型對(duì)照組給予相同體積的蒸餾水（10 mL·kg-1），每天1次，連續(xù)給藥3 d。

指標(biāo)觀察：試驗(yàn)當(dāng)天先用足趾容積測(cè)定儀測(cè)定大鼠右后足跖容積為基礎(chǔ)值，末次藥后于大鼠右后足跖中央皮內(nèi)注射1%角叉菜膠溶液致炎01 mL，測(cè)定致炎后1，2，4，6 h的腫脹值（致炎后與致炎前足趾容積之差）。

23對(duì)醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高的影響[5]分組、給藥同21。指標(biāo)觀察：末次藥后1 h，尾靜脈注射05%依文思蘭液（10 mL·kg-1），10 min后腹腔注射08%醋酸（10 mL·kg-1），再10 min后腹腔注射5 mL生理鹽水注射液，處死小鼠，輕揉腹部50次，剪開皮膚，用吸管吸取腹腔液，離心，取上清在波長590 nm下測(cè)吸光度。

24對(duì)出血時(shí)間的影響[6]分組：取健康ICR小鼠，SPF級(jí)，體質(zhì)量18～20 g，將小鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分組，分別為模型對(duì)照組、云南重樓水提物、七葉一枝花水提物、長柱重樓水提物各高、中劑量組（330，165 g·kg-1），每組10只，雌雄各半。

給藥：各組分別灌胃給予相應(yīng)藥物，模型對(duì)照組給予相同體積的蒸餾水（20 mL·kg-1），每日1次，連續(xù)給藥3 d。

指標(biāo)觀察：末次藥后1 h，采用剪尾法，將小鼠固定，以利剪將小鼠尾尖3 mm處剪斷，待血液自行流出開始計(jì)時(shí)，此后每隔30 s用濾紙吸去血滴1次，至血液自然停止為止，即為出血時(shí)間。

25對(duì)凝血時(shí)間的影響[6]分組、給藥同24。指標(biāo)觀察：末次藥后1 h，采用玻片法，摘去一側(cè)眼球即有血液流出，于載玻片兩端各滴1滴血，血滴直徑約5～10 mm，立即開始記時(shí)，此后每隔30 s用干燥針頭自血滴邊緣向里輕輕挑動(dòng)1次，至針頭能挑起纖維蛋白絲為止，即為凝血時(shí)間，以t檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較。

26統(tǒng)計(jì)分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以±s表示，應(yīng)用SPSS 170統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，t檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較，P<005時(shí)為顯著差異。

3結(jié)果

31對(duì)醋酸所致小鼠疼痛反應(yīng)的影響云南重樓、七葉一枝花、長柱重樓水提物和長柱重樓醇提物對(duì)醋酸致小鼠疼痛反應(yīng)具有抑制作用，可不同程度地降低扭體次數(shù)，云南重樓水提物（330 g·kg-1）、七葉一枝花水提物（660 g·kg-1）、長柱重樓水提物（660 g·kg-1）、長柱重樓醇提物（660，330 g·kg-1）與模型組相比有顯著性差異，表明云南重樓、七葉一枝花、長柱重樓水提物和長柱重樓醇提物均具有鎮(zhèn)痛作用，且長柱重樓與云南重樓、七葉一枝花水提物的鎮(zhèn)痛作用相比未見明顯差異（表1）。

32對(duì)角叉菜膠致大鼠足腫脹的影響云南重樓、七葉一枝花、長柱重樓水提物和長柱重樓醇提物所試劑量在致炎后1～6 h可明顯抑制角叉菜膠致大鼠足腫脹，與模型組相比有顯著性差異，表明云南重樓、七葉一枝花、長柱重樓水提物和長柱重樓醇提物均具有抗炎作用，且長柱重樓與云南重樓、七葉一枝花水提物的抗炎作用相比未見明顯差異（表2）。

33對(duì)醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高的影響云南重樓水提物、七葉一枝花水提物和長柱重樓醇提物所試劑量均可明顯抑制小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的增高，其平均吸光度值明顯低于模型對(duì)照組，與模型對(duì)照組相比具有顯著性差異，表明云南重樓、七葉一枝花水提物和長柱重樓醇提物所試劑量均具有抗炎作用，且長柱重樓醇提物與云南重樓、七葉一枝花水提物的抗炎作用相比未見明顯差異（表3）。

34對(duì)出血時(shí)間和凝血時(shí)間的影響云南重樓、七葉一枝花、長柱重樓水提物所試劑量均可明顯縮短小鼠出血時(shí)間，云南重樓水提物高劑量、七葉一枝花水提物高、中劑量組、長柱重樓水提物高、中劑量組可明顯縮短小鼠凝血時(shí)間，與模型對(duì)照組相比具有顯著性差異。表明云南重樓、七葉一枝花、長柱重樓水提物具有止血作用，且長柱重樓與云南重樓、七葉一枝花水提物的止血作用相比未見明顯差異（表4）。

4討論

重樓應(yīng)用歷史悠久，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，名為蚤休，列為下品。《滇南本草》始以重樓作為其正式藥名，記載重樓為：“消諸瘡，無名腫痛，利小便。” 《中國藥典》2015年版記載重樓具有清熱解毒，消腫止痛，涼肝定驚的功能，用于疔瘡癰腫，咽喉腫痛，蛇蟲咬傷，跌撲傷痛，驚風(fēng)抽搐。

重樓屬植物全世界共有26 個(gè)品種，以橫斷山脈南段為核心的川、滇兩省是重樓屬植物在歐亞大陸的地理分布中心，也是重樓藥材的傳統(tǒng)產(chǎn)區(qū)。云南重樓P polyphylla var yunnanensis和七葉一枝花P polyphylla var chinensis為藥典收載。重樓同屬植物長柱重樓Pforrestii于1968年被Takhtajan[7]將騰沖采集到的重樓標(biāo)本定種為P forrestii Takhtspnov，1983年李恒等[8]結(jié)合采自保山和騰沖的標(biāo)本，通過查閱愛丁堡植物園所藏騰沖標(biāo)本G forrest，比較其形態(tài)特征和采集地點(diǎn)，認(rèn)為它們?yōu)橥蛔匀环N，并最終命名為P forrestii （Takht） HLi。長柱重樓雖然沒有被國家藥典收載，但目前重樓野生資源如此匱乏，長柱重樓作為重樓藥材廣泛使用，在模式產(chǎn)地分布廣、易栽培、產(chǎn)量高。endprint

現(xiàn)代藥理研究表明重樓具有抗腫瘤、消炎、抑菌、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、止血等作用等多種藥理作用[9]，其臨床應(yīng)用廣泛，含重樓的中成藥云南紅藥膠囊和宮血寧膠囊臨床應(yīng)用有顯著的止血和止痛療效[1011]；七葉一枝花軟膏[12]具有抗炎止痛效果。故本實(shí)驗(yàn)中采用鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)、抗炎實(shí)驗(yàn)、止血實(shí)驗(yàn)比較了重樓同屬植物長柱重樓和藥典收載重樓的藥理活性差異。研究表明長柱重樓和云南重樓、七葉一枝花均具有鎮(zhèn)痛、抗炎、止血作用，可明顯降低醋酸致小鼠扭體次數(shù)，抑制角叉菜膠致大鼠足腫脹和醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高，縮短出血時(shí)間和凝血時(shí)間，且長柱重樓與云南重樓、七葉一枝花的鎮(zhèn)痛、抗炎、止血作用相比未見差異。因此，在進(jìn)一步化學(xué)成分、臨床研究基礎(chǔ)上，長柱重樓有望被收載作為正品重樓使用。

[參考文獻(xiàn)]

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[責(zé)任編輯呂冬梅]endprint