荷葉總酚提取工藝研究

潘 熠

（四川大學(xué)華西藥學(xué)院6班，四川 成都 610041）

荷葉總酚提取工藝研究

潘 熠

（四川大學(xué)華西藥學(xué)院6班，四川 成都 610041）

目的建立荷葉總酚最佳提取工藝。方法 首先建立荷葉中總酚含量測(cè)定方法，然后采用L9（34）正交試驗(yàn)法，以提取溶劑、提取時(shí)間、提取次數(shù)及溶劑倍量為考察因素，每個(gè)因素考察三個(gè)水平，以荷葉中總酚提取率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，優(yōu)化荷葉總酚提取方法。結(jié)果 谷荷葉總酚最佳提取工藝為：8倍量50%乙醇提取3次，每次1小時(shí)。結(jié)論 建立的提取工藝簡(jiǎn)便易行，穩(wěn)定可靠，可為其進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供參考依據(jù)。

荷葉；總酚；正交試驗(yàn)；提取工藝

荷葉為睡蓮科植物蓮Nelumbo nucifera Gaertn.的干燥葉，具有清暑化濕，升發(fā)清陽(yáng)，涼血止血，用于暑熱煩渴，署濕泄瀉，脾虛泄瀉，便血崩漏。荷葉碳收澀化淤止血，用于產(chǎn)后出血和暈血。荷葉主要含生物堿、黃酮類(lèi)、揮發(fā)油類(lèi)等成分，其中生物堿類(lèi)、黃酮類(lèi)為其主要化學(xué)成分[1]。目前對(duì)荷葉的研究主要集中在生物堿類(lèi)、黃酮類(lèi)成分，而對(duì)其酚酸類(lèi)物質(zhì)研究還較少，研究表明，酚類(lèi)成分具有顯著的抗氧化活性，抑制高血壓，抗腫瘤，還可改善血脂水平，降低脂肪酶活性[2-3]，本文對(duì)荷葉酚類(lèi)成分最佳提取工藝進(jìn)行研究，為其進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

TU-1810 型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限公司）；Sartorius-BT25S型1/100000電子分析天平；KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

槲皮素（批號(hào)：YA0806YB13，純度≥98%），購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司；

甲醇（AR，購(gòu)自北京化學(xué)試劑公司）；三氯化鐵（AR，天津市申泰化學(xué)試劑有限公司）；鐵氰化鉀（AR，廣東汕頭市西隴化工廠）；鹽酸（AR，北京化工廠）；其余試劑均為分析純。荷葉飲片購(gòu)自北京同仁堂，經(jīng)鑒定為睡蓮科植物蓮nelumbo nucifera Gaertn.的干燥葉。

2 方法與結(jié)果

2.1 荷葉總酚含量測(cè)定方法研究

2.1.1 供試品溶液的制備

取荷葉提取物適量，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入100 mL70%甲醇，密塞，稱(chēng)定重量，超聲（功率500W，頻率40KHz）處理1 h，放冷，再稱(chēng)定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，精密量取續(xù)濾液400 μL置10 mL棕色量瓶中，加70%甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.1.2 對(duì)照品溶液的制備

取槲皮素對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加70%甲醇制成每1 mL含12.6 μg的溶液，即得。

2.1.3 測(cè)定方法

精密量取供試品溶液0.6 mL，置25 mL棕色量瓶中，加70%甲醇至5 mL，加入0.3%十二烷基硫酸鈉溶液2.6 mL，搖勻，加入新配制的0.6%三氯化鐵-0.9%鐵氰化鉀（1:1）混合液2.0 mL，在暗處放置7min，用0.1%的鹽酸稀釋至25 mL，搖勻后于暗處?kù)o置40min，以相應(yīng)的試劑為空白，照紫外-可見(jiàn)分光光度法（《中國(guó)藥典》四部通則0401）在780nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度[4]。

2.2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

2.2.1 因素水平設(shè)計(jì)

結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)并查閱相關(guān)文獻(xiàn)，采用L9（34）正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，以總酚轉(zhuǎn)移率為考察指標(biāo)，考察提取次數(shù)、提取溶劑、提取次數(shù)及溶劑倍量，因素水平設(shè)計(jì)見(jiàn)表1。

表1 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)因素水平表（n）

2.2.2 樣品制備

稱(chēng)取荷葉飲片適量，共9組，每組平行2份，共18份樣品，按照正交設(shè)計(jì)表進(jìn)行加熱回流提取，濃縮干燥，稱(chēng)定重量，計(jì)算出膏率。

2.2.3 轉(zhuǎn)移率測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

由表3分析可知，當(dāng)以總酚為考察指標(biāo)時(shí)，因素M水平2最佳，因素N水平3最佳，因素P水平3最佳，因素Q水平2最佳，結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)，考慮節(jié)約成本，優(yōu)選最佳提取工藝為M2N3P2Q2，即10倍量50%乙醇提取3次，每次1小時(shí)。

2.3 荷葉總酚提取工藝驗(yàn)證

2.3.1 荷葉總酚提取工藝流程

荷葉飲片

↓十倍量50%乙醇提取3次，每次一小時(shí)。

50%乙醇提取液

↓60℃減壓濃縮，干燥。提取物

2.3.2 樣品制備及含量測(cè)定

以最佳提取工藝制備三批提取物樣品，計(jì)算出膏率，按照所建立的含量測(cè)定方法，測(cè)定提取總酚含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 提取工藝驗(yàn)證結(jié)果（n，%）

3 討 論

荷葉總酚最佳提取工藝為：8倍量50%乙醇提取3次，每次1小時(shí)。三批驗(yàn)證結(jié)果表明建立的提取工藝簡(jiǎn)便易行，穩(wěn)定可靠，可為其進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供參考依據(jù)。

[1] 劉慧娟,鄭云展,陳燕霞,等.微波真空干制加工對(duì)荷葉茶酚類(lèi)物質(zhì)含量及其抗氧化活性的影響[J].食品科學(xué)技術(shù)學(xué)報(bào),2016,34(3):40-45.

[2] 蔡為榮,周慧超.荷葉多酚提取優(yōu)化及其清除DPPH·自由基的研究[J].食品工業(yè)科技,2009(12):186-189.

[3] 陳 曦,戚 進(jìn).荷葉中黃酮和生物堿的研究進(jìn)展[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2015(18):211-214.

[4] 潘 婷,黃亞婷,韓珂卿,等.基于藥物體系質(zhì)量評(píng)價(jià)模式的柴胡質(zhì)量表征關(guān)聯(lián)分析研究[J].世界中醫(yī)藥,2015(4):577-582.

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ISSN.2095-8242.2017.041.7936.02

本文編輯：王雨辰