梔子苷鼻用溫敏凝膠制劑的制備及藥代動力學研究

陳曉燕+姜雯雯

【中圖分類號】R944 【文獻標識碼】A 【文章編號】2095-6851（2017）10--01

梔子苷（Geniposide）為中藥梔子果實的主要指標成分之一，近期研究表明[1]，梔子苷對腦缺血級聯反應過程具有多個藥物靶點作用，能較好的改善腦缺血損傷。鼻腔給藥能有效使得鼻-腦傳遞藥物得以實現，故治療改善腦缺血損傷是一種優選的給藥方式。但一般的藥物溶液鼻腔給藥具有流失率大，滯留時間短，且容易刺激到氣管等缺點，一般臨床上很難接受。溫敏凝膠制劑具有鼻腔黏附性能延長其在鼻豁膜的滯留時間，大大減少藥液流失，故能提高生物利用率，減少藥液對咽部的刺激，提高患者的依從性。故本文將梔子苷為模型藥物制備成溫敏凝膠制劑，鼻腔給藥后對其體內的血藥濃度進行監測，考察其生物利用度。

1 儀器與材料

1.1 藥品、試劑梔子苷（四川雙子葉生物科技有限公司，含量≧95%）；梔子苷對照品：中國藥品生物制品檢定所（批號110749-201512）；乙腈（色譜純，德國默克集團公司）；泊洛沙姆407（BASF公司，NO.00860）；P188（德國BASF公司）；尼泊金酯（純度99%）；其余試劑（分析純，市售）；雙蒸水（自制）

1.2 儀器PHYSICAMCR101流變儀（奧地利安東帕有限公司）；Agilent1200高效液相色譜儀（包括G1322A脫氣器、G1310A四元泵、G1316A柱溫箱、G1321AFLD檢測器、Agilent–Chemistry工作站，安捷倫科技有限公司）；TSK-GEL，ODS-100S色譜柱（4.6mm×150mm，日本-株式會社）；SIGMA3-18K型高速冷凍離心機（廈門精藝興業科技有限公司）；BT–2000氮氣吹干儀（北京八方世紀科技有限公司）；XW-80A微型旋渦混合儀（上海滬西分析儀器廠）；生物利用度研究數據處理通用程序DAS2.0。

1.3 動物 雌性SD大鼠10只，體重（200±10）g，由江西中醫學院實驗動物中心提供，合格證號：SCXK（贛）2005-0001，實驗期間飼以固體飼料，自由飲水。實驗前禁食不禁水。

2 方法與結果

2.1 梔子苷溫敏凝膠的制備

將處方量的梔子苷、Nacl溶于蒸餾水中，用磁力攪拌器攪拌并加入適量的P407及P188，使其均勻分散，放置24小時，使凝膠充分溶脹，即得。

2.2 膠凝溫度的測定

鼻用熱敏凝膠是一種在室溫下液體，而接觸鼻腔膜后能產生膠凝變化的制劑。鼻腔內溫度為32-33℃，故制劑的膠凝溫度應選擇在33℃以下。

測定方法：取凝膠樣品溶液1mL置流變儀樣品臺上，平臺起始溫度設置為10℃，再以1℃·min-1的速率緩慢升溫至40℃，每半分鐘測量一次粘度。以粘度的改變來監測其膠凝及膠融溫度。

2.3 處方設計

2.3.1 處方中P407濃度對膠凝相變溫度的影響

有研究表明[2]當泊洛沙姆407的濃度高于16%時能可逆地形成形成澄明的水晶狀凝膠，其膠凝溫度隨P407濃度增大而降低。故實驗中設定14%、16%、18%、20%的P407，以相變溫度為指標，考察其對膠凝溫度影響。其結果見圖1：

由圖1可知P407為14%時基本成不了凝膠，16%時其膠凝溫度為（28.5±0.1）℃，16%以上時隨著P407濃度的增大其膠凝溫度依次減小，故選用P407濃度為16%時最優。

2.3.2 不同濃度梔子苷與膠凝溫度的關系

藥物的含量有可能會影響其膠凝溫度，故設定濃度為0%、1.6%、3.2%的梔子苷，以膠凝溫度為指標，考察其不同濃度對16%P407膠凝溫度影響。結果梔子苷的加入對制劑的膠凝溫度并無影響，見圖2。

2.3.2 P188對制劑膠凝溫度的影響

一定濃度的P188加入到P407溫敏凝膠中對膠凝溫度具有一定的調節作用，本研究考察了P188濃度對16%P407的影響，結果P188濃度為0%，2.5%，5%時，膠凝溫度分別為（25.3±0.2）℃ ，（30.7±0.1）℃，（35.5±0.3）℃ 。結果表明，P188可以使膠凝溫度升高，隨著P188濃度的增加同一濃度P407下膠凝溫度升高，最佳用量為2.5%。見圖3。

2.4 溫敏凝膠的流變學評價

2.4.1 P407濃度的影響

P407濃度低于10%的稀溶液不能表現出豁度的明顯變化，呈現牛頓流體狀態，15%P407溶液在20℃以上黏度會發生輕微的增加[3]。本研究中發現P407濃度大于16%（w/w）時，在某溫度黏度會有明顯的增加，也就存在一個黏度突變的溫度，本文中定義為凝膠溶液的黏度突變點，加有0.9%的NaCl的P407濃度分別為16%、18%、20%黏度突變點分別為28℃、24℃、22℃。14%時，凝膠基本沒形成，故黏度也沒太大改變，見圖4。

2.4.2 藥物的影響

取0%、1.6%、3.2%的梔子苷，觀察其對0.9NaCl+16%P407凝膠突變溫度的影響，結果顯示，隨著梔子苷藥物濃度的增加，其對凝膠溶液的黏度突變點無影響，見圖5。

3 初步藥動學實驗

3.1 色譜條件的選擇

按2015年版《中國藥典》中梔子藥材的梔子苷含量測定方法[4]， 色譜柱：TSK-GEL，ODS-100S（4.6 mm×150mm，5μm），流動相：乙腈-水（15∶85），流速：1.0 mL·min-1，檢測波長：238 nm，柱溫：25℃，進樣量：20μL。

3.2 對照品溶液的制備

精密稱取梔子苷對照品1.29mg，用甲醇溶解并定容至50mL，制成25.8μg·mL-1的對照品貯備溶液，備用。endprint

3.3 血漿樣品的預處理

經眼眶取血0.5mL于肝素化的試管中，輕輕混勻，4000 r·min-1離心15min，分離血漿200?L，加入800?L的乙腈（溶液）沉淀蛋白，漩渦混勻，4000 r·min-1離心15min，吸取上清液，40℃水浴通氮氣吹干，殘渣用200μL甲醇溶解，18000r·min-1離心15min，吸取上清液進樣檢測。

3.4 給藥及采血方法

選擇200±10g♀大鼠10只，分兩組，禁食12h，分別鼻腔給予梔子苷溶液（8mg·kg-1）及溫敏凝膠制劑（2 mg·kg-1）。梔子苷溶液組給藥后于5，15，30，45，60，90，120，180，240，360，480，600min后取血；制劑組給藥后于5，15，30，45，60，90，120，180，240，360，480，600min后取血。余按上述血漿樣品預處理方法處理。檢測其藥物濃度。

3.5 藥物動力學數據分析

不同時間點的血藥濃度，經DAS統計擬合后，以AIC和R判斷房室模型和選擇參數，兩者都為二室模型，藥代動力學參數見下表1：

根據F制劑相對溶液=AUC制劑*8/AUC溶液*2= 5.231

由結果可得溫敏凝膠制劑具有明顯的緩釋作用，t1/2延長了186.45min，其相對生物利用度為5.231。

4 討論

對于鼻腔給藥方式預防或治療腦部疾病的研究越來越多，經鼻給藥后藥物吸收快，同時可以避免肝臟首過效應，故是一個新型的給藥方式。但由于鼻腔內部的結構，具體異物清除作用，一般藥液滴入鼻腔后滯留時間會很短，且藥物容易流失，從而藥物的吸收及療效會有很大的影響。溫敏凝膠是一種高度的三維網絡親水性結構，其組織相容性良好，與鼻粘膜親和力強、能吸附于鼻腔膜上，延長滯留時間，且在一定溫度下能實現溶液—凝膠的轉變，故在鼻腔給藥制劑上應用非常廣泛。

本文以泊洛沙姆407（P407）為基質，加入適量的防腐劑及P188，以凝膠溫度及凝膠的流變學評價為考察指標，篩選出最優處方為：梔子苷（主藥）2g；泊洛沙姆407（凝膠基質）16g；泊洛沙姆188（膠凝溫度調節）2.5g；尼泊金酯（抑菌劑）2g；氯化鈉（調等滲并促釋放）0.9g；加水至全量使成100g。同時對其藥代動力學進行評價，在藥代動力學劑量的選擇上，根據前期實驗摸索，藥液滴鼻給藥8mg·kg-1能夠達到藥效濃度而溫敏凝膠制劑滴鼻給藥2 mg·kg-1就也能夠達到藥效濃度，考慮到溫敏凝膠制劑可能有提高生物利用度，故先采取小劑量濃度進行制劑的制備，并對其藥代學與溶液的進行初步對比。從藥代動力學實驗證明，梔子苷溫敏凝膠劑型在體內具有明顯的緩釋作用，與梔子苷溶液體內吸收代謝相比其t1/2明顯延長，AUC值明顯升高，延長了體循環時間，說明凝膠制劑具有一定的緩釋作用，能夠延長其藥效。

參考文獻

孫媛，劉波，趙媛.婦黃寧溫敏凝膠的制備及體外釋放研究[J].《時珍國醫國藥》，2016 （2）：363-366.

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Smabhaji SP，Annat RP，Kaashaeb RM，et al. Pluronic gels for nasal delivery of Vitmain B12[J]. Int J Pharm.，2010，270（1）：37-45.

國家藥典委員會.中華人民共和國藥典一部[S]. 北京：化學工業出版社， 2015：173.endprint