四倍體刺槐組織培養研究

蘇立琢

摘要 選擇當年生長發育旺盛的幼嫩枝條帶腋芽莖段作為四倍體刺槐組織培養材料，研究組織培養的最佳條件。結果表明，最佳啟動培養基為MS+6-BA 0.5 mg/L+0.3 mg/L，最佳增殖培養基為MS+6-BA 0.8 mg/L+NAA 0.3 mg/L，最佳生根培養基為1/2 MS+IBA 0.5 mg/L+N AA 0.1 mg/L。在對試管苗移栽過程中應做好遮蔭并控制溫室內溫度和濕度條件，確保成活率在90%左右。

關鍵詞 四倍體刺槐；組織培養；快速繁殖

中圖分類號 S792.27 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2017）17-0140-01

四倍體刺槐根萌蘗性較強、根系發達，自身含有豐富的根瘤菌，可提升土壤內有機質含量、改良土壤、形成土壤團粒結構，還具有耐低溫、耐貧瘠、速生豐產特性，在治理沙漠化、防風固沙、水土保持和綠化上具有優勢，屬優質蜜源植物，有利于促進地方養蜂業發展，經濟效益和生態效益顯著。為確保優良四倍體刺槐品種快速繁殖，對四倍體刺槐組織培養加強研究具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

四倍體刺槐生長的季節在春季，此時應選取萌發的幼嫩帶芽莖段。

1.2 外植體滅菌

將葉片去除并用自來水清洗干凈，在超凈工作臺無菌條件下，使用70%酒精對四倍體刺槐消毒30 s，使用0.1%升汞消毒7 min，再利用無菌水清洗3～4遍，使用無菌濾紙將材料表面水分吸收干凈，在帶腋芽莖段切取1 cm并將其在啟動培養基上接種[1-3]。

1.3 啟動培養

啟動培養基主要是將MS作為基本培養基，在啟動培養基上分別添加不同濃度的6-BA和 NAA，每瓶接種1株，每處理完30瓶，在生長30 d后觀察啟動培養基上四倍體刺槐生長情況，做好誘導率統計。

1.4 培養基的篩選

1.4.1 增殖培養基的篩選。將誘導成功的試管苗，分別切割成為單個小苗，接種在附加6-BA 0.1～1.5 mg/L、NAA 0.1～0.5 mg/L幾種組合的MS培養基上。將5株小苗放置在1個小瓶上，每完成20瓶后重復1次，在生長30 d后，觀察小苗生長，計算平均增值系數和生長量，找出最佳組合。

1.4.2 生根培養基的篩選。將試管苗生長到2 cm的莖段切下，接種到生根培養基上，將IBA 0.1～0.5 mg/L、NAA 0.1～0.3 mg/L的幾種組合中分別附加到生根培養基1/2MS上，將5株小苗放置在小瓶上，每完成20瓶后重復1次，生長30 d后，觀察小苗生長，計算平均生根條數、根長、生根率，找出最佳生根條件。

1.5 培養條件

分別將白糖30 g/L、瓊脂0.6 g/L加入到增殖培養基和生根培養基內，pH值6.3，培養溫度為25 ℃左右，光照強度2 000 lx，光照時間12 h/d。

1.6 移栽

4月上旬將試管苗移栽到溫室內，選取根系生長較好的試管苗，洗凈根部培養基，移入72穴育苗盤，以珍珠巖為基質，使用0.2%高錳酸鉀溶液消毒，澆水后，放入備好的塑料小拱棚，棚內溫度25～30 ℃，相對濕度大于85%，將遮陽網放置在拱棚上方。持續1周后，降低拱棚相對濕度，28 d后撤去拱棚，移栽植入大田，澆水，蓋遮陽網，5 d后去除[4-6]。

2 結果與分析

2.1 激素對啟動培養的影響

在帶莖段接入啟動培養基后，若持續>10 d，腋芽處明顯萌動，后進入芽膨大期，產生葉片；30 d后，生成3 cm高叢芽，最佳培養基組合為MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L。

2.2 激素對試管苗增殖的影響

在將細胞分裂素6-BA加入增殖培養基后，出現增殖效果，增殖系數隨6-BA濃度增加而加大，增殖培養基內6-BA濃度達1.0 mg/L時，其增殖系數逐漸減少。這是由于6-BA濃度增加，易形成愈傷組織，有效苗數量減少，增殖系數降低。當NAA濃度達0.1 mg/L時，阻礙苗正常生長；當NAA濃度達0.3 mg/L時，苗生長較好。最佳增殖培養組合為MS+6-BA 0.8 mg/L+NAA 0.3 mg/L。

2.3 生長素對試管苗生根的影響

若將生長素IBA單一添加到培養基內，會促進試管苗生根，但莖部生長發育減緩，且根部側根數量少，若在培養基中添加生長素NAA時，會促進莖部生長，同時根部側根數量增加，提升移栽成活率。若將生長素IBA 0.5 mg/L和 NAA 0.1 mg/L配合使用，其效果達到最佳，生根率達95%，平均生根4條/株左右，且根生長發育較好。

2.4 苗木移栽及生長

珍珠巖內生長25 d的生根試管苗，移栽成活率達95%，移栽大田后，生長20 d后成活和移栽成活率均大于97%。試管苗移栽當年，四倍體刺槐平均高度為20 cm左右，葉片數量為15枚；單株高度在30 cm左右，葉片數量也達40枚。

3 結論

選擇當年生長發育旺盛的幼嫩枝條帶腋芽莖段作為四倍體刺槐組織培養材料。分化培養基種類為將MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L作為啟動培養基，將MS+6-BA 0.8 mg/L+NAA 0.3 mg/L作為增殖培養基，將1/2MS+IBA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L作為生根培養基。選擇4月上旬移栽，以珍珠巖為移栽基質，移栽大田成活率大于90%。

4 參考文獻

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