延齡草種子內(nèi)源抑制物質(zhì)活性研究

霍妍　趙春莉　李怡瑩

摘要：為研究延齡草（Trillium tschonoskii Maxim.）種子的休眠機(jī)理，加速萌發(fā)速度，試驗(yàn)比較了不同濃度水浸提液與不同溶劑浸提液對(duì)白菜（Brassica rapa L. var. glabra Regel）種子萌發(fā)及幼苗生長(zhǎng)的影響。結(jié)果表明，延齡草種子中存在較強(qiáng)生理活性的內(nèi)源抑制物質(zhì)，并且隨著水浸提液濃度的增加，其抑制白菜種子萌發(fā)的活性也隨之增加；不同溶劑浸提液的內(nèi)源抑制物質(zhì)活性也不同，其中丙酮浸提液的抑制效果最強(qiáng)，其次是甲醇，水浸提液的抑制作用較弱。

關(guān)鍵詞：延齡草（Trillium tschonoskii Maxim.）；種子；浸提液；抑制物質(zhì)；生理

中圖分類號(hào)：S567.23+9.34 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2017）18-3506-02

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.18.028

Abstract： In order to study the dormancy mechanism and accelerate the germination rate of Trillium tschonoskii Maxim. salsa seeds，the effects of different concentrations of water extracts and different solvent extracts on seed germination and seedling growth of Brassica rapa L. var. glabra Regel were studied. The results showed that there was endogenous inhibitory substance with strong physiological activity in the seeds of T. tschonoskii. And the inhibiting activity of the germination of cabbage seeds increased with the increase of water concentration. The activity of endogenous inhibitory substances in the extracts of different solvents was different. The methanol extracts had the strongest inhibitory effect， followed by acetone and water extracts had weak inhibitory effects.

Key words： Trillium tschonoskii Maxim.； seed； leaching solution； inhibitory substances； physiological

延齡草（Trillium tschonoskii Maxim.）為百合科（Liliaceae）延齡草屬（Trillium L.）植物[1]，主產(chǎn)于中國云南、西藏、四川等省（自治區(qū)），在不丹、印度等國也有分布[1]。主要生長(zhǎng)于海拔1 600～3 200 m的林下、山谷陰濕處，或山坡路旁巖石下等富含有機(jī)質(zhì)的肥沃土壤里[2]。延齡草主要以干燥根莖及成熟果實(shí)入藥，味甘、性平、有小毒，主要藥效成分是甾體皂苷，有降壓、鎮(zhèn)痛、溶血的作用，對(duì)鎮(zhèn)靜安神、祛風(fēng)活血有良效；主治頭暈?zāi)垦！⑹摺⒌驌p傷、外傷出血等癥，是土家族著名的民族藥之一[3，4]。延齡草以其獨(dú)特的療效吸引了大批科研院所、企業(yè)和商家的青睞，越來越多的人開始認(rèn)識(shí)到這味埋藏深山多年的“奇草”價(jià)值[5-8]，已有詹亞華等[9]、彭強(qiáng)[10]、楊永康等[11]對(duì)其生藥學(xué)作了較詳細(xì)的研究。在生產(chǎn)上，延齡草以種子進(jìn)行繁殖，但在自然條件下，種子休眠性強(qiáng)、萌發(fā)率低等因素限制了延齡草的繁殖與雜交工作。目前，還未見關(guān)于延齡草內(nèi)源抑制物的研究報(bào)道。為此，試驗(yàn)對(duì)延齡草種子的內(nèi)源抑制物質(zhì)活性進(jìn)行了探討，以期為提高延齡草出苗率提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

2016年10月在野外采集延齡草種子，自然干燥，人工脫粒，常溫放置。白菜（Brassica rapa L. var. glabra Regel）種子為商店購買。

1.2 方法

1.2.1 種子透水性測(cè)定 取飽滿的延齡草種子1 g，置于小燒杯中，加入3倍種子體積的去離子水，在25 ℃條件下浸泡，每隔1 h取出種子，用吸水紙吸干種子表面水分后稱重，然后再放回小燒杯中，繼續(xù)吸水，隔1 h再重復(fù)上述操作，直至趨于恒重為止，重復(fù)3次，取均值。計(jì)算延齡草種子吸水率，計(jì)算公式：

吸水率=（吸水后重量-吸水前重量）/吸水前重量×100%。

依據(jù)試驗(yàn)得到的延齡草種子吸水率動(dòng)態(tài)數(shù)據(jù)，繪制延齡草種子吸水曲線。

1.2.2 不同濃度的水浸提液對(duì)白菜種子發(fā)芽及幼苗生長(zhǎng)的影響 取20 g延齡草種子，放入研缽中研碎，移入150 mL三角瓶中，加入80 mL去離子水，封口后置于25 ℃下浸提48 h；過濾后，4 000 r/min離心10 min，之后定容至100 mL，使浸提液濃度為0.2 g/mL。分別取0.2 g/mL的延齡草種子去離子水浸提液，稀釋后使其濃度分別為0.04、0.08、0.12、0.16、0.20 g/mL，以清水為對(duì)照。用白菜種子做生物測(cè)定，每個(gè)處理30粒白菜種子，3次重復(fù)，48 h后測(cè)發(fā)芽率，72 h后測(cè)胚根及胚軸長(zhǎng)度。

發(fā)芽率=（正常發(fā)芽種子數(shù)/供試種子數(shù)）×100%，endprint

延齡草種子內(nèi)源抑制物對(duì)白菜種子萌發(fā)的抑制活性=（1-處理種子發(fā)芽率/對(duì)照種子發(fā)芽率）×100%。

1.2.3 不同溶劑的延齡草種子浸提液對(duì)白菜種子發(fā)芽及幼苗生長(zhǎng)的影響 取3份各5.0 g延齡草種子，放入研缽中研碎，移入150 mL三角瓶中，分別放入40 mL的去離子水、甲醇、丙酮，過濾后，4 000 r/min離心10 min，之后都定容至50 mL，使浸提液的濃度為0.1 g/mL。用白菜種子做生物測(cè)定，每個(gè)處理30粒白菜種子，3次重復(fù)，48 h后測(cè)發(fā)芽率，72 h后測(cè)胚根及胚軸長(zhǎng)度。

1.3 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)采用Microsoft Office Excel 2007程序處理，并用其作圖、制表；運(yùn)用DPS 7.05統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行綜合分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 種皮透水性測(cè)試

試驗(yàn)得到的延齡草種子吸水曲線見圖1。從圖1可以看出，延齡草種子前30 h的吸水較快，在30 h時(shí)吸水率已接近100%，而后吸水速度放慢，40 h后吸水率趨于平穩(wěn)，穩(wěn)定在110%左右。由此可知，延齡草種子吸水性較強(qiáng)，種皮透水性良好，不存在種皮抑制。

2.2 不同濃度去離子水的延齡草種子浸提液對(duì)白菜種子發(fā)芽及幼苗生長(zhǎng)的影響

延齡草種子去離子水浸提液對(duì)白菜種子發(fā)芽及幼苗生長(zhǎng)的影響情況見表1。從表1可見，延齡草種子抑制白菜種子發(fā)芽的活性隨著去離子水浸提液濃度的增加而增強(qiáng)，當(dāng)浸提液濃度為0.08 g/mL時(shí)，白菜種子萌發(fā)率與對(duì)照差異不顯著（P>0.05），而胚根長(zhǎng)、胚軸長(zhǎng)與對(duì)照差異顯著（P<0.05）；當(dāng)浸提液濃度為0.12 g/mL時(shí)，白菜種子萌發(fā)率、胚根長(zhǎng)及胚軸長(zhǎng)均與對(duì)照差異顯著（P<0.05）；當(dāng)浸提液濃度為0.20 g/mL時(shí)，對(duì)白菜種子的抑制活性達(dá)到了100%。由此可見，去離子水浸提液對(duì)白菜種子的抑制作用隨著浸提液濃度的增加而增強(qiáng)。

2.3 不同溶劑的延齡草種子浸提液對(duì)白菜種子發(fā)芽及幼苗生長(zhǎng)的影響

去離子水、甲醇、丙酮3種溶劑的延齡草種子浸提液對(duì)白菜種子發(fā)芽及幼苗生長(zhǎng)的影響情況見表2。由表2可以看出，不同溶劑的延齡草種子浸提液對(duì)白菜種子發(fā)芽及生長(zhǎng)均有顯著的抑制作用，說明延齡草種子中存在活性較強(qiáng)的抑制物質(zhì)。3種不同溶劑的延齡草種子浸提液對(duì)白菜種子發(fā)芽的抑制作用均較強(qiáng)，并且不同浸提液的抑制物質(zhì)活性不同，以丙酮浸提液的抑制活性最強(qiáng)，之后是甲醇浸提液，抑制活性較弱的為去離子水浸提液。

3 小結(jié)與討論

試驗(yàn)結(jié)果顯示，延齡草種子中含有抑制性強(qiáng)的內(nèi)源物質(zhì)，這可能是導(dǎo)致延齡草出苗率低的直接原因；并且延齡草種子浸提液的抑制作用隨著浸提液濃度的提高而增強(qiáng)。不同溶劑對(duì)抑制物質(zhì)的溶解度不同，試驗(yàn)里因丙酮、甲醇、去離子水而遞減，說明其在極性溶劑中的溶解性較大，因此此類抑制物質(zhì)可能為極性有機(jī)化合物，這有待于下一步分離、純化和鑒定來確認(rèn)。

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