地膚子總黃酮含量測定及其抗氧化活性

李培源　盧汝梅　蘇煒　滕明敏　郭娜娜　吳采穎

摘要：研究地膚子不同溶劑提取物的總黃酮含量及其抗氧化活性。用冷浸法得到地膚子乙醇、丙酮和乙酸乙酯提取物。測定了三種提取物的總黃酮含量，并通過測定其對DPPH自由基的清除能力和還原能力來研究其抗氧化能力。地膚子不同溶劑提取物均表現出很強的抗氧化性能，其抗氧化能力隨提取物濃度增大而增強。地膚子提取物具有作為天然抗氧化劑的潛力。

關鍵詞：地膚子；DPPH；還原能力；抗氧化；總黃酮含量

地膚（Kochia scoparia）是藜科一年生草本植物，高50-100 am。地膚子為地膚的果實，扁球狀五角星形，直徑1～3 mm，具有清熱利濕、祛風止癢等功效，主治小便澀痛、陰癢帶下、風疹、濕疹、皮膚瘙癢等疾病。地膚子在民間使用廣泛，但其抗氧化方面的研究鮮見報道。抗氧劑可以清除人體內過量的自由基，預防動脈硬化、關節炎、糖尿病、肌肉萎縮和老年癡呆等多種疾病。目前，使用較多的合成抗氧化劑如2.6-二叔丁基4-甲基苯酚等具有較多副作用，因此近年來科研工作者致力于尋找來源于植物的天然抗氧化劑。本試驗通過測定地膚子3種溶劑提取物（乙醇提取物、丙酮提取物和乙酸乙酯提取物）對DPPH自由基的清除能力和還原能力來對其抗氧化能力進行研究，為地膚子作為一種天然高效抗氧化物的推廣利用提供理論依據。

1.材料與方法

1.1材料、試劑和儀器

地膚子來源于廣西玉林。蘆丁標準品購于百靈威試劑公司（北京）。所有試劑均為分析純。UV1901型紫外可見分光光度計（北京普析電子科技有限公司）。

1.2方法

1.2.1地膚子不同溶劑提取物制備 稱取20 g地膚子粉末，加入200 mL乙醇（95%），冷浸72 h。重復上述操作3次，合并提取液。旋轉蒸發回收溶劑，得到地膚子乙醇提取物（EE）0.8 g，得率為4.0%。采用相同方法，用丙酮及乙酸乙酯提取，得到丙酮提取物（AE）0.6 g和乙酸乙酯提取物（EAE）0.8 g，得率分別為3.0%和4.0%。

1.2.2地膚子總黃酮含量的測定

1）標準曲線的繪制。精確吸取蘆丁對照品溶液（1 mg/mL）于10 mL量瓶中，分別加入5%亞硝酸鈉0.4 mL，靜置6 min，加入5%硝酸鋁0.4 mL，靜置6 min。再加入5%氫氧化鈉試液4.0 mL，用95%乙醇稀釋至刻度，搖勻，靜置15 min，在510nm處測定其吸光度。以吸光度對溶液濃度進行回歸分析，繪制標準曲線，求出回歸方程。

2）地膚子提取物總黃酮含量測定。將蘆丁標準溶液換為固定濃度提取物溶液，同上操作測定其吸光度，多次測量求平均值。根據標準曲線計算總黃酮的蘆丁當量，總黃酮含量以每克干物質的蘆丁當量（mg）表示，并計算提取得率。

1.2.3地膚子提取物對DPPH 自由基的清除能力測定取不同濃度地膚子提取物溶液（0.5、0.8、1.0、1.2、1.5、1.8、2.0 mg/mL）加入8 mL DPPH（0.004%）溶液中。在最大波長處（517 nm）測定其吸光度，直到平衡為止。清除率計算公式為s=（1-A樣品）/A空白×100%。其中，A空白為未加藥液的DPPH溶液的吸光度，A樣品為加入藥液的DPPH溶液的吸光度。

1.2.4還原能力測定 取上述不同濃度地膚子提取物溶液0.2 mL，加入2.5 mL PBS溶液（pH 7.4），2.5 mL KFe（CN）4（1%）。于50℃恒溫20 min后，加入2.5 mL三氯乙酸溶液（10%），離心10 min。取上清液2.5 mL，加入2.5 mL蒸餾水、0.5 mL FeCl3（1%），混勻。在700 nm處測定其吸光度，以蒸餾水為參比。

2.結果與分析

2.1地膚子提取物總黃酮含量

以吸光度對溶液濃度進行回歸分析，繪制標準曲線，得到回歸方程y=9.677 8x+0.016 7（R=0.9992）。根據線性方程得出地膚子乙醇提取物（EE）、丙酮取物（AE）和乙酸乙酯提取物（EAE）的總黃酮含量測定結果。結果表明，3種提取物的總黃酮含量在29.5～43.5 mg/g之間，均具有較高的黃酮含量，具有作為自由基清除劑應用的潛力。

2.2地膚子提取物對DPPH自由基的清除能力

地膚子3種溶劑提取物對DPPH自由基清除能力的測定結果如圖1所示。3種提取物對DPPH自由基的清除能力均隨其濃度的升高而增強。對于AE，濃度為0.5和0.8 mg/mL時，清除率分別為27.8%和37.7%，濃度增加到1.2、1.5 mg/mL時，清除率增大為47.9%和57.6%。當AE濃度增加到1.8、2.0 mg/mL時，清除率增大到64.8%和70.2%。對于EAE，當濃度從0.5 mg/mL增加到2.0 mg/mL，清除率從23.9%增加到72.4%。

當提取物濃度較低時（0.5和0.8 mg/mL），AE和EE表現出相近的DPPH自由基清除能力。而在較高提取物濃度（1.8和2.0 mg/mL）時，EE表現出最強的清除能力，在1.8 mg/mL時清除率為73.6%，在最高濃度2.0 mg_/mL時清除率為85.8%。結果表明，地膚子的3種提取物對于DPPH自由基均具有很強的清除能力。

2.3不同溶劑提取物EC50值

EG50代表抗氧化劑對自由基達到半抑制時的質量濃度。EG50的數值越大，則表明抗氧化劑對自由基的清除能力越強。地膚子3種提取物EE、AE和EAE對DPPH自由基的EC值分別為1.13、1.28、1.15 mg/mL。因此，3種提取物的EGo值大小順序為AE、EAE、EE。即，地膚子不同溶劑提取物對DPPH自由基的清除能力順序為EE>EAE>AE。

2.4地膚子提取物的還原能力

地膚子不同溶劑提取物的還原能力如圖2所示。抗氧化劑通過自身的還原作用給出電子從而達到清除自由基的效果，還原能力越強，則抗氧化性越強。測定結果以吸光度表示，吸光度越高表示還原能力越強。地膚子3種提取物的還原能力均與提取物濃度呈正相關，即提取物濃度越高，其還原能力越強。對于AE，濃度為0.5和0.8mg/mL時吸光度分別為0.29和0.33，濃度為1.0和1.2mg/mL時吸光度分別為0.46和0.53，當濃度增大為1.8和2.0mg/mL時，吸光度分別為0.73和0.89。對于EE，按濃度由低至高其吸光度分別為0.21、0.41、0.51、0.61、0.63、0.80和0.86，其還原能力隨濃度增大而增強。在較高濃度時（2.0 mg/mL），3種提取物的還原能力接近，AE、EE和EAE的吸光度分別為0.89、0.86和0.88。

3.小結

本試驗測定了常用中藥地膚子不同溶劑提取物的總黃酮含量，并通過DPPH自由基體系和還原能力來研究其抗氧化性能。結果表明，地膚子不同溶劑提取物對DPPH自由基均顯現出較強的清除能力，濃度為2.0 mg/mL時EE的清除率為85.8%。EC值分析結果表明，不同溶劑提取物對DPPH自由基的清除能力順序為EE>EAE>AE。不同地膚子提取物均具有很強的還原能力，且還原能力隨提取物濃度增大而增強。研究結果表明，地膚子不同溶劑提取物，特別是EAE，具有優良的清除自由基能力和抗氧化能力，有望作為天然抗氧化劑在工業上應用。