檢測血清腫瘤型丙酮酸激酶在子宮內膜癌中的臨床意義

鐘 倩，牛 剛，劉 芳，劉婉敏，張偉健，練曉勤，魏繼紅

(1.江門市中心醫院 婦科，廣東 江門529000；2.中山大學附屬第一醫院)

檢測血清腫瘤型丙酮酸激酶在子宮內膜癌中的臨床意義

鐘 倩1，牛 剛2，劉 芳1，劉婉敏1，張偉健1，練曉勤1，魏繼紅1

(1.江門市中心醫院 婦科，廣東 江門529000；2.中山大學附屬第一醫院)

目的檢測正常子宮內膜、子宮內膜增生癥(單純型增生、復雜型增生、不典型增生)和子宮內膜癌患者的血清腫瘤型丙酮酸激酶(Tu M2-PK)，探討其在子宮內膜癌發生發展中的作用，并初步分析其在子宮內膜癌中的臨床意義。方法選取2009年8月至2010年8月在江門市中心醫院婦科行子宮切除術或診斷性子宮內膜刮除術的患者140例，其中正常子宮內膜患者30例，子宮內膜增生癥55例(單純型增生15例，復雜型增生20例，不典型增生20例)，子宮內膜癌55例，采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA方法)檢查其血清中的Tu M2-PK的濃度水平。結果①正常子宮內膜、子宮內膜增生癥患者中的血清Tu M2-PK水平差異無統計學意義(P>0.05)，但與子宮內膜癌患者比較有顯著性差異(P<0.01)；②子宮內膜癌患者血清Tu M2-PK水平與手術分期及病理分級有相關性，即手術分期Ⅲ與分期Ⅰ-Ⅱ、病理分級G3與G1-G2之間差異有統計學意義(P<0.05；P<0.01)，但與患者年齡、術前血清CA125值、肌層浸潤深度、腹水細胞學無相關性(P>0.05)。結論子宮內膜良性病變的患者與子宮內膜癌患者的血清Tu M2-PK水平比較有顯著性差異(P<0.01)，子宮內膜癌患者血清Tu M2-PK水平與手術分期及病理分級密切相關，提示其有望成為子宮內膜癌臨床診斷的生物學標志之一，對臨床診斷治療有一定作用。

子宮內膜癌；腫瘤型丙酮酸激酶(Tu M2-PK)；血清

(ChinJLabDiagn,2017,21:1701)

在我國，根據區域的不完全統計，子宮內膜癌的發病率和死亡率呈現上升趨勢[1]。由于子宮內膜癌的確切病因不明，臨床上無法針對病因對子宮內膜癌進行早期診斷。本文采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA方法)檢查正常子宮內膜(NE)、子宮內膜增生癥內膜(EH)、子宮內膜癌(EC)患者血清中Tu M2-PK的濃度水平探討其在子宮內膜癌發生發展中的作用，并初步分析其與子宮內膜癌臨床、病理因素的關系，報道如下。

1 對象與方法

1.1研究對象選取2009年8月至2010年8月在江門市中心醫院婦科行子宮切除術或診斷性子宮內膜刮除術的患者140例，其中正常子宮內膜患者30例(增生期、分泌期各15例)。子宮內膜增生癥55例(單純型增生15例，復雜型增生20例，不典型增生20例)。子宮內膜癌55例(G110例，G224例，G321例)，其中內膜樣腺癌49例，其余類型6例(其中腺棘癌、腺鱗癌各3例)。病理分期按2009年FIGO標準：其中Ⅰ期25例(IA期14例，IB期11例)，Ⅱ期15例，Ⅲ期15例，其中III期患者包括只侵及盆腔淋巴結者11例、只侵及陰道者1例、侵及漿膜或輸卵管者3例。

1．2臨床特點(1)臨床表現：正常內膜患者中月經異常20例(66.7%)，不孕10例(33.3%)；子宮內膜增生癥患者中月經紊亂者34例(61.3%)，經期延長、經量增多者19例(34.5%)，絕經后陰道流血2例(3.6%)；子宮內膜癌患者中月經紊亂25例 (45.4%)，絕經后陰道流血29例(52.7%)，陰道排液1例(1.8%)。(2)年齡：正常子宮內膜患者為24歲-54歲，平均年齡為38歲；子宮內膜增生癥患者年齡為38歲-62歲，平均年齡為45歲；子宮內膜癌患者年齡為32-73歲，平均年齡為50歲；(3)生育史：正常內膜患者未孕10例，生育1胎6例，生育二胎及以上14例；子宮內膜增生癥患者中3例未孕，僅生育1胎20例，生育二胎或以上32例；內膜癌患者中未孕5例，生育1胎4例，生育二胎或以上46例；(4)高血壓、糖尿病病史：正常子宮內膜患者合并高血壓病2例，糖尿病1例，無合并癥27例；子宮內膜增生癥患者合并高血壓病3例，糖尿病2例，同時合并高血壓病和糖尿病2例，無合并癥48例；內膜癌患者同時合并高血壓、糖尿病有4例，單純合并高血壓者為9例、合并糖尿病者7例，無糖尿病或高血壓病合并癥35例。

1.3方法所有病例均早晨空腹抽取外周靜脈血2 ml,靜置待血液凝固后，1-2 h內3 500 r/min離心10 min，分離血清后于-70℃冰箱保存，所有標本同批測定完畢。檢測過程按操作說明書進行。

1.4結果判斷30分鐘內在波長450 nm的酶標儀上讀取個孔的OD值，根據標準品OD值描標準曲線，用樣本OD值直接代入標準曲線得出樣本濃度。

1.5統計學方法采用Prisom4統計軟件及簡明統計分析軟件10.32分析統計，計數資料采用χ2檢驗，計量資料采用t檢驗，非正態分布的數據采用秩和檢驗，P<0.05有統計學意義。ROC曲線采用SPSS11.5軟件分析處理。

2 結果

2.1血清TuM2-PK值相對于良惡性的診斷界點(cut-offpoint)

ROC曲線下面積0.844，標準誤0.035，漸進顯著性水平0.000，P<0.01,漸進95%置信區間(0.775,0.913)，cut-off值7.175，靈敏度74.5%，特異度80%。見圖1。

圖1 血清Tu M2-PK的ROC曲線

2.2血清TuM2-PK在正常子宮內膜、子宮內膜增生癥、子宮內膜癌患者中比較

通過統計學分析，血清Tu M2-PK在正常子宮內膜、子宮內膜增生癥、子宮內膜癌患者中水平比較具有顯著性差異(P<0.01)(見表1)。四組間兩兩比較，正常子宮內膜、子宮內膜增生癥患者中的血清Tu M2-PK水平差異無統計學意義(P>0.05)，但與子宮內膜癌患者比較有顯著性差異(P<0.01)(見表2)。

表1 各組患者血清Tu M2-PK值比較

Hc=47.176,P<0.01

表2 各組患者血清Tu M2-PK值兩兩比較

2.3子宮內膜癌患者術前術后血清TuM2-PK比較

子宮內膜癌患者術前與術后第二天血清Tu M2-PK比較無統計學意義(P>0.05)(見表3)。

表3 子宮內膜癌患者術前術后血清Tu M2-PK值比較

2.4血清TuM2-PK水平與子宮內膜癌患者臨床病理特征的關系

子宮內膜癌患者血清Tu M2-PK水平與臨床分期、病理分級密切相關(P<0.01)，即臨床分期Ⅲ與分期Ⅰ-Ⅱ有顯著性差異(P<0.01)，病理分級G3與G1-G2差異有統計學意義(P<0.01)。Tu M2-PK與患者年齡、術前血清CA125水平、肌層浸潤深度、腹水細胞學無相關性(P>0.05)。見表4，5。

表4 子宮內膜癌患者血清Tu M2-PK與病理特征的關系

表5 子宮內膜癌患者血清Tu M2-PK與臨床指標的關系

3 討論

丙酮酸激酶(PK)是糖酵解途徑的一個關鍵酶，它有四種同工酶(L-PK、R-PK、M1-PK、M2-PK)，通常以酶的活性四聚體形式存在,分布表達具有組織特異性。M2-PK主要分布于腸、肺、胚胎以及增殖或未分化的組織中。在腫瘤細胞中，四聚體的M2-PK亞型裂解，主要為二聚體形式，而二聚體形式的M2-PK對磷酸烯醇式丙酮的親和力較弱，在腫瘤細胞中這些二聚體形式M2-PK的濃度明顯升高，呈現出過度表達狀態，導致大量糖酵解磷酸代謝物的積聚，以保證腫瘤細胞內能量的供給[2]。

本文結果發現，血清TuM2-PK水平子宮內膜癌患者與正常子宮內膜、子宮內膜增生癥患者差異有統計學意義，但正常子宮內膜、子宮內膜增生癥患者之間無統計學意義(P>0.05)，而且Tu M2-PK蛋白表達水平與血清Tu M2-PK濃度水平相關系數為0.551，有中等正相關關系。這提示Tu M2-PK可能在診斷子宮內膜癌有重要的臨床意義。Schneider 等[3]的研究亦證實，肺癌患者癌組織及血漿中的M2-PK表達水平均顯著高于正常人；周娟等[4]認為Tu M2-PK在胰腺癌診斷方面檢測價值與CA199 相仿；KoigasJ等[5]認為Tu M2-PK對腎細胞癌診斷有意義。本研究結果表明：Tu M2-PK與子宮內膜癌的手術分期及病理分級有密切相關性，即手術分期Ⅲ期與Ⅰ-Ⅱ期、病理分級G3與G1-G2差異有統計學意義。

本研究中，子宮內膜癌Ⅲ期患者主要表現為淋巴結轉移，這間接提示Tu M2-PK與淋巴結是否有轉移有關。患者發生子宮內膜癌時，促進糖異生的關鍵酶活性可能下降，而促進糖酵解的PK等酶的表達及活性則升高，使ATP失去對糖酵解的調節作用，從而使糖酵解易于進行，有利于腫瘤組織的生長，隨著腫瘤的發展，腫瘤逐漸增大，腫瘤細胞增多，合成的Tu M2-PK也隨逐漸增多，出現了Tu M2-PK的表達增加。當子宮內膜癌的腫瘤細胞分化程度越低，其增殖越快，腫瘤細胞代謝越旺盛，Tu M2-PK陽性表達率越高，這反映了腫瘤細胞的生物學代謝特征[6]。因此檢測子宮內膜癌患者血清Tu M2-PK水平和組織中Tu M2-PK蛋白對其診斷和判斷預后可能具有非常重要的臨床意義。腫瘤組織學類型、分化程度、肌層浸潤深度、FIGO分期是公認影響早期子宮內膜癌預后的獨立因素[7]，術后一般應行輔助治療，這說明Tu M2-PK檢測對患者病情的評估及治療可能有較大的臨床作用。

血清CA125水平是子宮內膜癌最有用的腫瘤標志物[8]。Nobuhiro[9]等認為在子宮內膜癌中，CA125隨手術分期增加而上升，郭夢凡等[10]研究顯示CA125蛋白表達隨著組織分級的增加而升高，但本研究中，Tu M2-PK與CA125無相關性?？赡芤驗闃颖纠龜瞪伲蛘呓y計學方法比較單一，未能顯現兩者之間的關系，或者還需要大樣本研究確定兩者是否有相關性。

本文結果發現，子宮內膜癌患者術前與術后第二天血清Tu M2-PK值無統計學意義(P>0.05)，這可能與術后血細胞反應性的增加有關，淋巴細胞和粒細胞釋放Tu M2-PK所導致的[11，12]。Wechsel 等[13]報道發現外科手術后,大部分手術成功的腎細胞癌患者的M2-PK水平在六周內恢復正常，這啟示我們，最好不要在術后幾天內復查Tu M2-PK值，以免錯誤判斷預后，造成過度治療。

本研究中，血清Tu M2-PK的cut-off值為7.175 ng/ml，低于一般診斷值15 U/ml，可能與實驗方法不同有關，本研究采用競爭ELISA方法,標本為血清，不同于夾心ELISA方法和標本為血漿，至于子宮內膜癌的Tu M2-PK陽性界值是否為7.18 ng/ml,應該還需要大樣本的研究。

[1]王春芳,張 果,魏麗慧.子宮內膜癌與代謝性疾病的關系[J].中華婦產科雜志,2010,45(12):946.

[2]Mazurek S.Pyruvate kinase type M2 :a key regulator within the tumour metabolome and a tool for metabolic profiling of tumours[J].Ernst Schering Found Symp Proc,2007,4:99.

[3]Schneider J,Peltri G,Bitterlich N,et al.Fuzzy logic—based tumor marker profiles including a new marker tumor M2-PK imp roved sensitivity to the detection of progression in lung cancer patients[J].Anticancer Res,2003,23(2A):899.

[4]周 娟,王 東,陳連周,等.腫瘤型M2丙酮酸激酶與癌類抗原199聯合檢測在胰腺癌診斷中的應用[J].實用醫學雜志,2005,21 (20):2252.

[5]Koigas J.Tumor M2pyruvate Kinase in plasma of patients with urological tumor [J].Tumour Biol,2001,22 (5):282.

[6]Mazurek S,Boschek C B,Hugo F.Pyruvate kinase type M2and its role in tumor growth and spreeding [J].Semin Cancer Biol,2005,15(4):300.

[7]王 剛,董 霞.早期子宮內膜癌術后補充治療及晚期患者非手術治療[J].中國實用婦科與產科雜志,2010,26(3):179.

[8]譙興強,董顏顏.CA125、CA153聯合檢測對診斷子宮內膜癌的意義[J].國際檢驗醫學雜志,2006,27(3):222.

[9]Takeshima N,Shimizu Y,Umezawa S,et al.Combined assay of serum levels of CA125 and CA199 in endometrial cancinoma[J].GynecolOncol,1994,54(3):321.

[10]郭夢凡,王 抒,孟慶媛， 等.CA125在子宮內膜癌的表達及臨床意義[J].黑龍江醫藥科學,2008,31(1):83.

[11]Hugo F,Fischer G,Eigenbrodt E.Quantitative detection of tumor M2-PK in serum and plasma[J].Anticancer Res,1999,19:2753.

[12]Oehler R,Weingartmann G,Manhart N,et al.Polytrauma induces increased expression of pyruvate kinase in neutrophils[J].Blood,2000,95:1086.

[13]Wechsel HW.Marker for Renal Cell Carcinoma (RCC):The Dimeric Form of Pyruvate Kinase Type M2(Tu M2-PK)[J].Anticancer Research,1999,19:2583.

PreliminaryinvestigationoftheclinicalsignificanceserumleveloftumorM2-pyruvatekinaseinendometrialcarcinoma

ZHONGQian,NIUGang,LIUFang,etal.

(JiangmenCenterHospital,Jiangmen529000,China)

ObjectiveThe expression of serum level of tumor M 2 -pyruvate kinase(Tu M2-PK) in patients of normal endometrial,endometrial hyperplasia (simple hyperplasia,complex hyperplasia,atypical hyperplasia) and endometrial carcinoma will be tested in this paper.Thereby we can analyze the effect of development of Tu M2-PK on endometrial carcinoma and discuss its clinical significance in endometrial cancer.MethodsWe selected 140 patients who accepted the hysterectomy or endometrial biopsy from August 2009 to August 2010 in the Gynecology at Jiangmen Central Hospital.In our sample,there are 30 cases of normal endometrial tissues,55 endometrial hyperplasia (15 simple hyperplasia,20 complex hyperplasia,20 atypical hyperplasia) and 55 endometrial carcinoma.the patients’ serum level of Tu M2-PK was examined by ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay).Results①There was no significant difference between the patients’ serum level of Tu M2-PK in normal endometrial group and endometrial hyperplasia group (P>0.05),except endometrial carcinoma group (P<0.01).②The serum level of Tu M2-PK were positive related to clinical FIGO staging and histological grade of endometrial carcinoma.That is the differences between FIGO stage III and stage I-II,histological grade 3 and grade 1-2 were significant (P<0.05;P<0.01).But Tu M2-PK had no relationship with the patients’ age,the serum level of CA125 before operation,the depth of invasion and peritoneal cytology(P>0.05).3The diagnostic cutoff value for Tu M2-PK was 7.175.The expression of Tu M2-PK in tissues and the serum level of Tu M2-PK had a moderate positive correlation that the correlation coefficient is 0.551.ConclusionThe serum level of Tu M2-PK have close relationship with clinical FIGO staging and histological grade of endometrial carcinoma.Tu M2-PK may be a useful biomarker to detect the early carcinogenesis of endometrial carcinoma,and play a certain role in the diagnosis and treatment of endometrial carcinoma.

endometrial carcinoma;tumor M2-pyruvate kinase;serum

R737.33

A

2016-03-03)

1007-4287(2017)10-1701-04