IGRA檢測在結核病診斷中的價值探討

陳 瑋

(武警四川總隊醫院 檢驗科,四川 樂山614000)

IGRA檢測在結核病診斷中的價值探討

陳 瑋

(武警四川總隊醫院 檢驗科,四川 樂山614000)

目的評價IGRA試劑A.TB在結核診斷中的應用價值。方法收集2014年7月至2016年8月在我院住院的284例患者的臨床資料，分為結核病組162例(肺結核112例，肺外結核50例)，非結核病組122例。分別進行A.TB、結核抗體TB-Ab、痰涂片和結核菌素TST等試驗檢查。結果結核病組A.TB陽性率90.12%，明顯高于結核抗體TB-Ab(59.88%)、痰涂片(19.14%)、TST(64.20%)，差異顯著有統計學意義(P<0.01)；非結核組A.TB的陽性率17.21%， TB-Ab陽性率36.89%，痰涂片為0， TST為33.61%。A.TB敏感性顯著高于其它檢測方法，特異性顯著高于結核抗體試驗和結核菌素試驗。A.TB的陽性預測值87.43%，陰性預測值86.31%。結論A.TB在結核病快速高準確率診斷中具有較高的實用價值，有利于提高各級醫院的診斷水平。

結核病;IGRA;A.TB

(ChinJLabDiagn,2017,21:1736)

據世界衛生組織報告，我國結核病發病率居全球第二位。結核病特別是肺結核的快速診斷是結核病防控的關鍵，但是目前臨床上采用的痰涂片檢出率特別低，而結核菌素實驗雖然相對快速，但假陽性和假陰性特別多。痰培養雖然是結核病診斷的金標準，但是痰培養的2-8周時間，不利于快速診斷和防控結核病。干擾素釋放分析實驗(IGRA)是一種結核感染檢測的新方法，該方法利用卡介苗里不存在的結核分枝桿菌特有的RD1基因序列編碼的ESAT-6和CFP-10作為刺激抗原，用于刺激患者對結核菌有記憶的T淋巴細胞產生γ-干擾素。根據干擾素量的變化確定其有無感染結核。因此檢測結果不受卡介苗影響。非結核分枝桿菌堪薩斯分枝桿菌、海分枝桿菌、蘇爾加分枝桿菌、轉黃分枝桿菌和胃分枝桿菌中存ESAT-6或CFP-10相同抗原[1,2]。本研究探討全血IGRA在結核快速診斷中的應用價值。

1 對象和方法

1.1研究對象

收集2014年7月至2016年8月在我院住院的284例患者的臨床資料，分為兩組：結核病組，抗結核治療不超過1個月的初治病人162例，其中男性92例，女性70例，年齡在20-82歲，主要根據臨床癥狀、IGRA檢測(A.TB)、影像學檢測、痰涂片和結核抗體等，其中肺結核112例，肺外結核50例。非結核病組122例：包括肺炎、肺癌、慢性阻塞性肺病、支氣管炎等，其中男性87例，女性35例，年齡21-78歲，通過臨床檢查及其他方法確診，無結核病史和接觸史。

1.2方法

1.2.1IGRA檢測 采用海口維瑅璦生物研究所研發的結核分枝桿菌特異性細胞免疫反應檢測試劑盒A.TB，按照說明書操作。采集4 ml肝素鈉抗凝全血混勻， 在N(陰性刺激劑)、P(陽性刺激劑)、T(ESAT- 6 和 CFP- 10) 3個反應管中分別加入1 ml全血， 將N、 P、 T 管震蕩混勻后37℃水浴箱培養22-24 h， 取上清50 μl分別加入已加好50 μl稀釋液的酶標孔中， 37℃ 孵育1 h洗板5次，拍干，分別加入100 μl檢測抗體工作液，37℃孵育30 min洗板5次，分別加入 100 μl親和素-辣根過氧化物酶，37℃孵育30 min洗板5次，加入混合好的底物A與底物B 100 μl， 37℃避光孵育10 min后，加入100 μl的終止液。15 min內用酶標儀讀取450 nm處的OD值，然后代入標準曲線方程得到N、P和T 3個濃度值，再計算(T-N) /(P-N)值，當N<0.5IU/ml時，(T-N)/(P-N)≥0.60時判為陽性；當N≥0.5IU/ml時，(T-N)/(P-N)≥0.85時判為陽性。所有患者均行結核抗體和結核菌素檢測。

1.2.2TST、血清抗體檢測及痰涂片檢測 均按照實驗室常規結核分枝桿菌檢測方法進行。

1.3統計學處理采用SPSS 13.0 統計學軟件進行數據處理。計數資料以率(%) 表示，A.TB 與傳統數據比較采用χ2檢驗，P<0.05 (雙側檢驗，α= 0.05)作為具有顯著性統計學差異的判斷標準。

2 結果

2.1A.TB試驗檢測和傳統方法檢測結果

結核病組A.TB陽性率90.12%，明顯高于結核抗體TB-Ab(59.88%)、痰涂片(19.14%)、TST(64.20%)，差異顯著有統計學意義(P<0.01)；非結核組A.TB的陽性率17.21%， TB-Ab陽性率36.89%，痰涂片為0， TST為33.61%。見表1。

表1 A.TB與傳統方法的比較

與其他檢測方法相比較：*P<0.01

2.2不同方法敏感性、特異性、陽性和陰性預測值比較

A.TB診斷結核病的敏感性顯著高于TB-Ab、痰涂片和TST(P<0.01),見表2。

表2 不同方法敏感性、特異性、陽性預測值、陰性預測值(%)

與A.TB相比：*P<0.01

3 討論

我國是結核病高負擔國家，結核病患者人數居全球第二，也是結核耐藥最嚴重的國家之一。在我國多次的結核病流行病學調查中，由于方法的局限和卡介苗接種的影響，得到結核感染率高達44.5%的結果。因此尋找新的可靠性更高的結核感染診斷方法迫在眉睫。目前用于臨床檢測結核的方法比較有限，主要是痰涂片、痰培養、結核抗體和結核菌素實驗，這些方法有些準確性不高，有些耗時太長，無法滿足結核病快速準確的診斷。由于痰涂片和痰培養的檢出率極低，因此臨床上結核病的誤診和漏診非常普遍[3,4]，在基層醫院誤診和漏診更嚴重。IGRA檢測在國外使用了近十五年，近年來才在國內成為結核病的診斷熱點[3]。 在美國和歐洲多個國家IGRA可以替代結核菌素實驗PPD，也獲得了多國的批準認證[5]。但是歐美國家作為結核低負擔國家，感染患者數量極少。而我國結核感染者和結核病患者眾多，IGRA能否和在歐美國家具有相同的表現，值得我們深入研究。IGRA技術根據其采用全血或PBMC培養的不同分為基于外周血淋巴細胞培養的酶聯免疫斑點檢測技術(ELISPOT)和基于全血細胞培養的酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。在國內外的研究中都表明這兩種方法在結核感染檢測中都有良好的表現[5]。A.TB是基于全血細胞培養的酶聯免疫吸附試驗，有研究表明該方法與ELISPOT方法的檢測結果相似，但是A.TB的檢測對設備和操作人員的要求遠低于ELISPOT的要求。

本研究在結核病組和非結核病組對A.TB與結核檢測傳統方法進行了比較。在結核病組A.TB敏感性90.12%顯著高于結核抗體的59.88%，痰涂片的19.14%，結核菌素實驗的64.20%。特異性上顯著高于結核抗體和結核菌素實驗。陽性預測值除了低于痰涂片以外，均高于其它方法，陰性預測值明顯高于其它方法。該方法當天采血，第二天就可以出結果。因此在結核檢測方面是一個準確率高檢測時效性強的一個產品。有報道顯示，該方法與影像學結合能大幅度提高結核診斷的準確率，避免誤診和漏檢[6]。

[1]Mahairas GG,Sabo PJ,Hickey MJ,et al.Molecular analysis of genetic differences between Mycobacterium bovis BCG and virulent M.bovis[J].J Bacteriol,1996,178:1274.

[2]Harboe M,Oettinger T,Wiker HG,et al.Evidence for occourrence of the ESAT-6 protein in Mycobaterium tuberculosis and virulent Mycobacterium bovis and for its absence in Mycobacterium bovis BCG[J].Infect Immun,1996,64:16.

[3]楊倩婷,朱秀云,單萬水,等.結核酶聯免疫斑點試驗與抗結核抗體平行檢測比較[J].中華檢驗醫學雜志,2009,8:895.

[4]王 紡.酶聯免疫斑點試驗與結核抗體平行檢測菌陰性結核比較[D].吉林大學,2013.

[5]高孟秋,劉 菲,紀濱英,等.兩種γ-干擾素釋放分析在結核病臨床診斷中的比較研究[J].中華結核和呼吸雜志,2012,10: 762.

[6]高孟秋.結核T細胞檢測結果的臨床意義解讀[J].中華結核和呼吸雜志,2014,10:1.

Applicationofinterferongammareleaseassayfortuberculosisdiagnosis

CHENWei.

(TheLaboratoryMedicineoftheSichuanArmedPoliceHospital,Leshan614000,China)

ObjectiveTo evaluate the clinical practice of an interferon-gamma release assay,named A.TB,in the diagnosis of tuberculosis infection.MethodsCollected 284 individuals in July 2014 to August 2016,divided into TB patients (n=162) (112 intrapulmonary cases vs 50 extrapulmonary cases),non-TB patients (n=122),were tested by antibody detection (TB-Ab),acid-fast stain,TST and A.TB.Taking the clinical diagnosis as criteria,the application value of A.TB was evaluated by comparison with other tests.ResultsThe positive rates of A.TB in the TB patients groups were 90.12%,which was significant difference between TB-Ab(59.88%),acid-fast stain(19.14%)、TST(64.20%)(P<0.01).The positive rate of A.TB in the non-TB patients groups were 17.21%,the TB-Ab (36.89%),acid-fast stain(0%)、TST(33.61%).A.T B sensitivity is significantly higher than other test methods,specificity is significantly higher than tuberculosis antibody test and tuberculin test.A.TB showed a positive predictive value of 87.43%,negative predictive value of 86.31%.ConclusionAs an interferon-gamma release assay,A.TB was a rapid and sensitive method of tuberculosis infection.A.TB will improve the diagnosis level of hospitals.

tuberculosis;interferon-gamma release assay; A.TB

R52

A

2016-10-30)

1007-4287(2017)10-1736-03