小柴胡顆粒制劑的多波長指紋圖譜及藥材-制劑譜峰匹配分析

2017-11-07 05:19:43李興東鞏偉

中國衛生產業 2017年28期

李興東，鞏偉

原濟南軍區聯勤部藥品儀器檢驗所，山東濟南 250022

李興東，鞏偉

原濟南軍區聯勤部藥品儀器檢驗所，山東濟南 250022

目的分析小柴胡顆粒制劑的多波長指紋圖譜及藥材-制劑譜峰匹配。方法運用反相高效液相色譜法（RP-HPLC法）對3個廠家及實驗室自制12批小柴胡顆粒評價多波長指紋圖譜相似性，并匹配實驗室自制小柴胡顆粒相同色譜條件下所用的原藥材指紋圖譜譜峰；運用RP-HPLC法對不同來源的小柴胡顆粒中的指標成分的量進行測定。結果210 nm、254 nm、323 nm 波長下，A 廠和實驗室自制小柴胡顆粒的 r1、r2均＞0.9，B、C 兩廠的 r1、r2均＜0.9，280 nm 波長下12批小柴胡顆粒的r1、r2均＞0.9，210 nm、254 nm、280 nm、323 nm波長下來自同一廠家3個批次的小柴胡顆粒均具有極小的相似度差異；A廠和實驗室自制制劑和柴胡藥材的匹配相似度≥0.900，B廠和C廠＜0.900。結論小柴胡顆粒制劑的多波長指紋圖譜及藥材-制劑譜峰匹配能夠將有效參考提供給臨床對中藥制劑質量進行較為全面的評價，值得在臨床推廣。

小柴胡顆粒制劑；多波長指紋圖譜；藥材-制劑譜峰；匹配

中藥具有廣泛的成分和復雜的作用機制，局限性較大，這是因為其質量控制的標準僅僅是某種活性組分的量[1-2]。該實驗對12批小柴胡顆粒的RP-HPLC指紋圖譜進行了研究，將4個波長下的指紋圖譜分別選取了出來，選取過程中嚴格依據制劑用藥材特性，同時匹配了制劑及其原藥材指紋圖譜的譜峰，并考察了樣品化學組成的總體波動情況，將匹配結合制劑用藥材和制劑指紋圖譜多指標成分定量測定的方法提了出來，現報道如下。

1 儀器和材料

儀器采用美國Waters生產的M32色譜管理站、2996型二極管陣列檢測器、2695型高效液相色譜儀，材料采用北京化工廠生產的磷酸、冰醋酸分析純，山東禹王實業有限公司禹城化工廠生產的甲醇、乙腈色譜純，蘭州醫學院第一附屬醫院藥劑科提供的超純水，蘭州黃河藥材市場提供的100201傘形科柴胡屬植物南柴胡的干燥根柴胡，蘇州華葆藥業有限公司(A廠)生產的小柴胡顆粒 1、2、3，批號分別為 20070204、20061006、20061205，甘肅岷海制藥有限責任公司（B廠）生產的小柴胡顆粒4、5、6，批號分別為 20070502、20070810、20061101，云南白藥集團股份有限公司（C廠）生產的小柴胡顆粒7、8、9，批號分別為 20070507、20070913、20061219，實驗室自制制劑小柴胡顆粒 10、11、12，批號分別為 20071011、20071121、20071229 及柴胡皂苷 a、d，批號分別為 110777-200507、110778-200506，中國藥品生物制品檢定所提供的對照品。

2 方法和結果

2.1 色譜條件

Kromasil ODS保護柱、大連依利特C18色譜柱的規格分別為 10 mm×4.6 mm，5 μm、250 mm×4.6 mm，5 μm，進行梯度洗脫時將流動相設定為乙腈-0.5%磷酸水溶解，梯度程度：0～10 min、10～30 min、30～45 min、45～60 min、60～70 min乙腈濃度分別為 10%～25%、25%～45%、45%～55%、55%～80%、80%～100%，體積流量、柱溫、色譜圖光譜采集范圍分別為 0.8 mL/min、25℃、210～410 nm[3-4]。

2.2 小柴胡顆粒樣品溶液的制備

在100 mL具塞三角瓶中放置稱取出來的10.0 g小柴胡顆粒精密，將50 mL甲醇精密加入其中，對質量進行精密成定，進行30 min的超聲處理，放置到室溫，將質量稱定并對減失的質量進行補足，補足過程中用甲醇，搖勻，用微孔濾膜濾過，微孔濾膜直徑為0.45 μm，將續濾液取出來備用，將每個小柴胡顆粒樣品溶液樣品分為3份，然后對其進行平行處理。

2.3 色譜柱相似性分析

將上述12批小柴胡顆粒樣品溶液取出來進樣，容量為10 μL，依據上述色譜條件將小柴胡顆粒制劑的指紋圖譜建立起來。具體見表1。210 nm、254 nm、323 nm波長下，A廠和實驗室自制小柴胡顆粒的r1、r2均＞0.9，B、C兩廠的r1、r2均＜0.9，280 nm波長下12批小柴胡顆粒的 r1、r2 均＞0.9，210 nm、254 nm、280 nm、323 nm 波長下來自同一廠家3個批次的小柴胡顆粒均具有極小的相似度差異。

表1 不同波長下各制劑的全譜平均數及中位數相似度

2.4 制劑和藥材譜峰匹配

將10 μL柴胡藥材樣品溶液、10 μL柴胡皂苷a和10 μLd對照品溶液取出來進樣，將柴胡藥材色譜圖獲取過來，獲取過程中依據上述色譜條件，將210 nm色譜圖提取出來。對小柴胡顆粒模式進行匹配，匹配過程中依據譜峰匹配方法，參照峰為1號峰，匹配峰的相對保留時間及峰面積具體見表2，共有匹配峰5個，柴胡皂苷a、d的匹配峰不存在，發生這一現象的原因是水提柴胡過程中水解了柴胡皂苷a、d。如果小柴胡顆粒的制備工藝為水提取，那么其也不含柴胡皂苷a、d，和相關醫學學者[5-6]研究結果一致。A廠和柴胡藥材的匹配相似度為0.900，B廠為0.844，C廠為0.555，實驗室自制制劑為0.930，A廠和實驗室自制制劑和柴胡藥材的匹配相似度≥0.900，B 廠和 C 廠＜0.900。