護脈散不同給藥方式對長春瑞濱致靜脈炎小鼠療效觀察

邱 敏 李曉清 鄒文娟 孫 科

(重慶市中醫院，重慶，400021)

護脈散不同給藥方式對長春瑞濱致靜脈炎小鼠療效觀察

邱 敏 李曉清 鄒文娟 孫 科

(重慶市中醫院，重慶，400021)

目的：觀察預防性和治療性應用護脈散對長春瑞濱致化療性靜脈炎小鼠的療效，評價其有效性。方法：長春瑞濱尾靜脈注射致小鼠靜脈炎模型。分別采用預防和治療給藥2種方式，觀察護脈散對給藥小鼠鼠尾腫脹度、病理組織評分，并以多磺酸粘多糖乳膏為陽性對照。結果：與模型組和對照組比較，護脈散能明顯減輕長春瑞濱致靜脈炎小鼠鼠尾腫脹度(P<0.05)，改善靜脈炎鼠尾病理組織評分(P<0.01)。結論：護脈散能有效預防和治療長春瑞濱致化療性靜脈炎，療效優于多磺酸粘多糖乳膏。

靜脈炎；長春瑞濱；護脈散；病理組織評分

化療性靜脈炎是指惡性腫瘤患者接受外周靜脈輸注細胞毒藥物化療時導致的淺靜脈血管性炎性反應，尤以輸注長春瑞濱(Vinorelbine，VIN)最為突出[1]。護脈散是重慶市名中醫曾定倫主任中醫師的經驗方，重慶市中醫院腫瘤科從2010年起將其應用靜脈炎的防治，累計使用超過1 000例，取得了較好臨床療效，既往我們臨床觀察顯示該藥物預防和治療化療性靜脈炎，療效優于臨床常用藥物[2-3]。作為血管無菌性炎性反應，化療性靜脈炎發生涉及血管內皮的損傷，血管壁及周圍組織的炎性細胞浸潤，周圍組織的水腫甚至炎性反應血管血栓形成等病理改變[4-6]，而我們既往研究以臨床觀察為主，缺乏護脈散對靜脈炎組織病理影響的觀察。本研究擬通過病理組織觀察探討預防性使用和治療性應用護脈散防治VIN致小鼠靜脈炎的臨床療效。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物與分組 健康成年昆明種小鼠，80只，雌雄各半，6～8周齡，清潔級，體重(25±6)g(重慶醫科大學實驗教學中心提供)。按隨機數字表法隨機分為空白組、模型組各20只，預防組、預防對照組、觀察組和治療對照組，每組10只。

1.1.2 藥物與儀器 重酒石酸VIN注射液(江蘇連云港豪森藥業股份有限公司,10 mg/mL，批號：20150211),多磺酸粘多糖乳膏(德國路易坡大藥廠，14 g/支，進口藥品注冊號：H20110296)，0.9%氯化鈉注射液(西南藥業股份有限公司,10 mL/支，批號:20150621),護脈散(芒硝60 g、生大黃30 g、黃連15 g、黃芩15 g、白芷10 g。上五味藥物一起粉碎，過100目篩，按4∶6質量比分別稱取藥粉和藥用凡士林，凡士林水浴加熱融化后，加入藥粉，不斷攪拌混勻致冷卻),美國BSA公司生產的微量恒速注射泵。

表1 Kuwahar病理評分表

1.2 方法

1.2.1 模型制備 參照馬麗娟[7]方法制備VIN致靜脈炎模型，于小鼠尾靜脈近、中1/3處向近心端穿刺成功后，空白組按5 mL/kg(體重)予0.9%氯化鈉注射液注射，其余5組均予10 mg/mL VIN注射液靜脈注射，給藥量為56.25 mg/kg(體重)，給藥速度0.25 μL/s。

1.2.2 給藥方法 1)注射給藥的同時預防組小鼠于穿刺點近心端上方予護脈散均勻涂擦(涂滿鼠尾全周)；預防對照組小鼠采用同樣方法予多磺酸粘多糖乳膏涂擦，每次1 h，間隔4 h后再次涂擦藥物1次。2)注射給藥24 h后觀察組小鼠據上述方法給予護脈散涂擦，每次間隔6 h，共計給藥3次，治療對照組采用同樣方法予多磺酸粘多糖乳膏涂擦，模型組小鼠不作任何處理。

1.2.3 檢測指標與方法 1)鼠尾腫脹度 給藥前、給藥6 h、給藥24 h，給藥48 h后，均于穿刺點近心端上方3 cm處用用電子數顯卡尺測量鼠尾直徑，計算腫脹程度。腫脹度=[(注射后鼠尾直徑-注射前鼠尾直徑)/注射前鼠尾直徑]×100%。2)病理學觀察 a靜脈給藥6 h后，脫頸處死預防組、預防對照組小鼠及空白組、模型組各10只小鼠；b靜脈給藥后48 h后，處死觀察組、治療對照組小鼠及空白組、模型組剩下的10只小鼠。取各組小鼠尾部從靜脈穿刺點至以上5 cm尾部組織，迅速置于10%福爾馬林溶液中固定4 h以上，以20%EDTA進行脫鈣處理后1周，再制作成石蠟切片、H-E染色并進一步分析。病理切片鏡下觀察內皮細胞脫落、炎性細胞浸潤、組織水腫及血栓形成情況。參照Kuwahar病理評分方法[8]進行等級評分。

2 結果

2.1 各組鼠尾腫脹度比較 見表2。與空白組比較，各組小鼠給藥后6 h,24 h，48 h鼠尾腫脹度明顯增加，差異有統計學意義(P<0.05或P<0.01)，證明造模方法成功；給藥6 h后，預防組及預防對照組小鼠鼠尾腫脹度雖較模型組小，但差異無統計學意義(P>0.05)；給藥48 h后，觀察組和治療對照組小鼠鼠尾腫脹度與模型組比較，明顯減輕，差異有統計學意義(P<0.01)。而預防組與預防對照組，觀察組與治療對照組組間比較，差異無統計學意義(P>0.05)。

表2 各組鼠尾腫脹度比較

注：與空白組比較，*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較，△P<0.01

2.2 各組小鼠鼠尾病理學評分比較 見表3。病理圖片見圖1。光鏡下觀察各組鼠尾HE染色切片，對照組給藥6 h及48 h后鼠尾靜脈內皮光整，無內皮細胞脫落，血管壁周圍見少量炎性細胞浸潤，血管周圍組織稍水腫，血管內無血栓；模型組給藥6 h后鼠尾靜脈內皮粗糙，血管內皮細胞脫落，血管周圍組織見炎性細胞浸潤，血管周圍組織水腫，血管內可見血栓；給藥48 h后上述情況進一步加重，大量血管內皮細胞脫落，周圍組織見大量炎性細胞浸潤、堆積，血管周圍組織水腫，血栓充滿整個靜脈管腔，病理評分明顯增加，與空白組比較，差異有統計學意義(P<0.01)。預防組和預防對照組鼠尾靜脈病理評分明顯低于模型組給藥6 h后，差異有統計學意義(P<0.05)，但2組間比較無統計學意義(P>0.05)；觀察組和治療對照組鼠尾靜脈病理評分明顯低于模型組給藥48 h后，差異有統計學意義(P<0.05)，觀察組病理評分低于治療對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。

表3 各組小鼠鼠尾病理學評分比較分)

注：與空白組比較，*P<0.01；與模型組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01；與治療對照組比較，△P<0.05

圖1 各組小鼠鼠尾HE染色(×200)

注：典型病理圖片：光鏡下觀察各組鼠尾HE染色切片，空白組給藥6 h及48 h后鼠尾靜脈內皮光整，無內皮細胞脫落，血管壁周圍見少量炎性細胞浸潤，血管周圍組織稍水腫，血管內無血栓；模型組給藥6 h后鼠尾靜脈內皮粗糙，血管內皮細胞脫落，血管周圍組織見炎性細胞浸潤，血管周圍組織水腫，血管內可見血栓；模型組給藥48 h后上述情況進一步加重，大量血管內皮細胞脫落，周圍組織見大量炎性細胞浸潤、堆積，血管周圍組織水腫，血栓充滿整個靜脈管腔，具有化療性靜脈炎基本特征，說明該方法造模成功。預防組鼠尾靜脈內皮粗糙，周圍見炎性細胞浸潤，周圍組織水腫，血管腔內未見血栓；觀察組炎性細胞浸潤進一步增加，靜脈管腔內可見占1/2管腔血栓形成。預防對照組鼠尾靜脈內皮粗糙，周圍見炎性細胞浸潤，周圍組織水腫，血管腔內可見少量血栓形成；治療對照組炎性細胞浸潤明顯，血管內皮細胞壞死，脫落，靜脈管腔內可見占2/3管腔血栓形成

3 討論

外周淺靜脈輸注化療藥物，尤其是VIN這類發泡劑類細胞毒藥物所導致的靜脈炎臨床非常常見[9-10]，雖然目前其發病機制尚未完全清楚[11-13],但作為局部無菌性血管炎性反應，化療性靜脈炎所導致的以血管內皮損傷為主的周圍血管炎性反應的病理組織改變業已十分明確：血管內皮細胞因凋亡、壞死、脫落導致血管內皮損傷，大量炎性細胞及血小板對損傷的血管內皮的黏附、浸潤，導致血管及周圍組織的水腫及血管內血栓形成[14-15]。“護脈散”是重慶市名中醫曾定倫主任醫師創制的臨床驗方，我們將其外敷用于防治化療性靜脈炎，臨床觀察顯示化療給藥前應用該藥，能有效預防局部用藥血管發紅，周周組織腫痛等靜脈炎表現[3]，而如果患者化療后出現輸液部位疼痛，輸液靜脈紅腫，條索樣改變，周圍組織水腫等情況，應用護脈散后亦能迅速改善該癥狀[2]，但臨床觀察無法探討“護脈散”對化療性靜脈炎病理組織改變的臨床療效，本研究擬進行動物實驗，來探討預防性用藥及治療性該藥2種給藥方式，對小鼠靜脈炎病理組織學改變情況，為下一步進行靜脈炎發病機制及“護脈散”療效機制研究提供指導。

本研究結果顯示模型組小鼠尾靜脈給予VIN注射液后6 h即出現血管內皮細胞脫落，靜脈內皮粗糙，血管周圍組織見炎性細胞浸潤，血管周圍組織水腫，血管內已可見有血栓形成；而“護脈散”預防組靜脈血管內皮細胞未見脫落，血管內亦未見血栓形成，僅見血管周圍組織炎性細胞浸潤，組織水腫，病理評分明顯低于模型組(P<0.05)；預防對照組采用多磺酸粘多糖乳膏外敷，病理組織評分亦明顯低于模型組(P<0.05)，雖可見少量血栓形成，但與預防組病理評分差異無統計學意義(P<0.05)，說明中藥“護脈散”和西藥多磺酸粘多糖乳膏都有預防VIN致化療性靜脈炎發生的療效，中醫素來講究“上工治未病”，如果能提前用藥，減少化療性靜脈炎的發生率，會明顯提高腫瘤患者治療的依從性和生命質量。

本研究給藥48 h后模型組小鼠尾靜脈出現典型的血栓性靜脈炎組織病理表現，尾靜脈腫脹度明顯增加(P<0.01)，大量血管內皮細胞脫落，周圍組織見大量炎性細胞浸潤、堆積，血管周圍組織水腫，血栓充滿整個靜脈管腔，病理組織評分較給藥前明顯增加(P<0.01)；而治療對照組小鼠應用多磺酸粘多糖乳膏外敷治療后，鼠尾腫脹度及病理評分均較模型組顯著改善(P<0.05)，觀察組小鼠應用“護脈散”治療后尾靜脈腫脹度雖較治療對照組差異無統計學意義(P>0.05),但其病理組織學評分較治療對照組改善更加明顯(P<0.05)，提示“護脈散”對于治療VIN引起的化療性靜脈炎療效優于多磺酸粘多糖乳膏，與我們臨床觀察結果一致[2]。

化療性靜脈炎臨床表現為局部給藥靜脈及周圍組織紅腫，疼痛，靜脈顏色加深，條索樣改變，根據其臨床表現曾定倫主任中醫師提出該病“熱壅血瘀”的中醫病機：靜脈穿刺及藥物毒性等原因導致脈絡創傷，濕熱毒邪外侵，脈道不利，阻塞不通，氣血瘀滯；瘀血阻滯，血行不暢，不通則痛；氣血運行不暢，津液輸布受阻則腫脹；瘀血內蘊，蘊久化熱，則局部發熱、發紅。針對其中醫病機，曾老師以“清熱解毒，消腫軟堅、活血化瘀”立法創制“護脈散”。本方據古方《蘭室秘藏·瘡瘍門》“保生救苦散”為基礎，原方由：寒水石、大黃、黃柏三味藥物組成，曾老師易寒水石為芒硝，取黃芩、黃連代黃柏，加白芷，制成“護脈散”局部外敷治療本病。本方中生大黃外用能涼血消腫，逐瘀通經，黃連、黃芩清熱解毒，涼血消腫，芒硝外用取其清熱消腫之功，更重要的是芒硝有軟堅散結之效，對于靜脈炎發生過程中組織充血，腫脹及脈管壁條索狀改變療效顯著，曾老師將寒水石改為石膏，并在該方中重用，加辛散通絡止痛之白芷，迅速緩解靜脈炎“腫，痛”癥狀，體現出老中醫獨特的臨床思辨能力。

本研究結果顯示“護脈散”能有效阻斷和改善化療性靜脈炎血管內皮細胞損傷、炎性細胞浸潤，減輕血管周圍組織水腫和血管內血栓形成，從而有效預防和治療化療性靜脈炎，療效優于多磺酸粘多糖乳膏，具有臨床應用價值。

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EfficacyObservation：DifferentAdministrationofHumaiPowderonVinorelbineInducedPhlebitisMice

Qiu Min, Li XIaoqing, Zou Wenjuan,Sun KE

(ChongqingHospitalofTraditionalChineseMedicine,Chongqing400021,China)

Objective:To Observe efficacy of prophylactic and therapeutic applications of Humai powder on vinorelbine induced phlebitis mice, evaluating of its effectiveness.MethodsVinorelbine was injected intravenously on models of phlebitis. Prevention and treatment of administration were respectively used, and tails swelling condition and pathological score were observed after Humai Powder administered mouse, MPS cream as a positive control.ResultsComparing the model group and the control group, Humai powder can significantly reduce tails swelling in vinorelbine induced phlebitis mice(P<0.05), and improve tail vein inflammation pathological score (P<0.01).ConclusionHumai powder is effective on prevention and treatment of vinorelbine induced phlebitis, stronger than MPS cream.

Phlebitis; Vinorelbine; Humai Powder; Histopathological score

重慶市衛計委中醫藥科技項目(ZY201402041)；國家中醫藥管理局全國名老中醫傳承工作室建設項目[國中醫藥人教發〔2013〕47號]

邱敏(1975.08—)，男，醫學博士，副主任中醫師，研究方向：惡性腫瘤的中西醫結合治療和研究，E-mail:13983922797@163.com

李曉清(1981.11—)，女，醫學碩士，副主任中醫師，研究方向：惡性腫瘤的中西醫結合治療和研究，E-mail:1140641979@qq.com

R285.5

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2017.10.040

(2016-07-15收稿 責任編輯：洪志強)