紅棗中克百威檢測方法研究

李雪晴，王璇，劉健

（銀川能源學院，寧夏銀川 750000）

紅棗中克百威檢測方法研究

李雪晴，王璇，劉健＊

（銀川能源學院，寧夏銀川 750000）

目的：以紅棗為研究對象，建立HPLC法測定3種不同品種紅棗中氨基甲酸酯類農藥克百威殘留量的檢測方法。方法：通過單因素實驗篩選提取純化實驗條件，確定紅棗樣品使用二氯甲烷提取、氨基固相萃取柱提純，最后使用HPLC法進行農藥殘留檢測方法。檢測使用色譜條件中以甲醇、水（45∶55）的溶液作為流動相，使用ODS-2,4.6的柱子為色譜柱進行分析。結果：3種紅棗樣品的加標回收率均符合國家對于農藥殘留的檢測標準。結論：所實驗方法能準確測定寧夏紅棗中克百威殘留量，有助于紅棗產品質量控制。

HPLC；紅棗；克百威；氨基甲酸酯類農藥

21世紀以來，居民人均生活水平穩步上升，所以逐漸對衣食住行等各個方面的要求也變得更高。比起過去吃藥進補，現在人們更喜歡食療從果蔬中獲取所需的營養，如人體不可缺少的維生素類物質。

研究發現，紅棗中維生素含量很高，因此在市場的供求關系與我國政策的扶持下紅棗的種植面積與產量都在逐年升高。寧夏紅棗產區大都分布在黃河兩岸，以靈武、中寧、中衛等縣委集中。中寧縣棗園堡一帶，棗樹茂密成林，綿延百里不絕。每年8，9月份，果實成熟的時候，棗園里，圓棗和長棗累累，棗香飄溢，格外招人喜愛。靈武、中寧等地產的圓棗，果實渾圓或橢圓形，顆粒碩大，顏色深紅，一粒果的重量平均達10克左右。果實肉質細密，甜中帶酸，含有豐富的維生素；干燥率高，可達45%。靈武長棗是寧夏培育的地方良種。

表1 實驗儀器與材料

表2 實驗試劑

但在高產量的背景下，存在著質量不合格農藥噴灑導致殘留的問題，過量的農藥殘留對人體的危害極大，所以現在國家對于農藥殘留的標準線也越降越低。因此本文主要目的是研究出一種可以快速、高效、簡便、準確檢測出紅棗中農藥殘留的辦法，通過收集資料得到現如今國內外對檢測氨基甲酸酯類農藥的方法主要有HPLC、GC、LC-MS、GC-MS、CE這五種方式[1-4]。

1 實驗部分

1.1 實驗樣品

實驗檢測樣品為3種不同品種寧夏紅棗。

將三種紅棗樣品去核在鼓風箱內用60℃烘干24h以上，取出后用粉碎機研磨成粉末，過80目篩后，置于干燥器中保存。

1.2 檢測儀器

實驗所用檢測儀器如表1所示。

1.3 主要試劑

實驗田所用主要試劑如表2所示。

1.4 提取方法

準確稱取1g處理好的紅棗粉末于具塞錐形瓶內，精確至0.01g。根據顏色深淺，加入1.0～1.6g活性炭進行脫色。向管加入15mL二氯甲烷以及5g無水硫酸鈉，置于超聲儀上超聲1h，完成后使用5 000r/min的離心機離心處理5min，然后將離心管中溶液轉移到10mL比色管中，用氮吹儀濃縮近干，最后用正己烷∶丙酮（1∶1）1mL溶液溶解殘渣，超聲30s，溶液待凈化。

1.5 試驗方法

確定高效液相色譜條件，吸取樣液10uL進行克百威殘留量的測定，以保留的時間定性，峰面積定量。根據標準曲線計算出所對應的克百威農藥的濃度。

按下式計算樣品中克百威的濃度。

式中：

X-樣品中克百威的殘留量，mg/mL；

C-樣品峰在標準曲線中或由線性回歸方程求得的相應濃度，ug/mL；

m-處理樣品的質量，g；

V-樣品最終定容溶劑，mL。

2 結果與討論

2.1 最大吸收波長確定

在200～800nm范圍內進行全波長掃描，掃描結果得到最大吸收波長為270nm，最大吸光度為1.729，如圖1所示。

圖1 克百威光譜掃描圖

2.2 色譜條件確定

表3 色譜條件

據實驗確定在上述條件下，克百威與其他物質可以得到較好的分離效果。

2.3 標準儲備液配制

準確吸取克百威標準品（100μg/mL）1mL于10mL容量瓶中用甲醇定容搖勻，由于對照品使用丙酮溶解所以色譜圖中的第一峰為丙酮峰。對照品溶液色譜分析圖如圖2所示。

圖2 對照品溶液色譜圖

結果顯示，克百威的出峰時間在10.728min。

2.4 標準曲線的繪制

分別吸取1、1.5、2、2.5mL克百威標準儲備液于10mL容量瓶內定容后進行色譜檢測，結果如圖3所示。

線性方程為：Y=13 228.4X-1208，克百威標準品在1.0～10.0μg/mL呈現良好的線性關系。

2.5 提取溶劑對檢測的影響

在樣品中加入1μg/mL克百威，分別選乙腈、二氯甲烷、丙酮、甲醇為提取溶劑加入15mL，及5g無水硫酸鈉，放置在超聲儀上超聲1h，完成后使用5 000r/min的離心機離心處理5min，然后將離心管中溶液轉移到10mL比色管中，用氮吹儀濃縮近干，最后用正己烷∶丙酮（1∶1）1mL溶液溶解殘渣，超聲30s，溶液待凈化。

一般情況下使用液相色譜儀檢測農藥時使用的提取劑有乙腈、二氯甲烷、甲醇、丙酮，通過回收率比較發現二氯甲烷相較于其他提取劑來說對農藥的提取效果較好，見表4。因此，本課題選擇以二氯甲烷作為提取劑。

表4 提取溶劑選擇表

在實驗溫度、儀器等都相同的情況下分別向加標樣品中加入不同量的提取劑3、5、7、9mL和15mL的二氯甲烷進行比較，見表5。結果顯示，當向樣品中加入7mL二氯甲烷溶液后可以達到較為理想的提取效果。

表5 提取劑用量比較表

2.6 鹽析劑對檢測的影響

選取不同類型的鹽作為鹽析試劑，如氯化鈉、無水硫酸鎂、無水硫酸鈉、硫酸銨，比較四種鹽的鹽析效果，結果見表6。通過比較發現，無水硫酸鈉的鹽析效果略高于其他三種。因此選用無水硫酸鈉作為鹽析試劑。

表6 鹽析試劑比較表

提取劑用量確定且實驗室溫度、儀器等剩余條件一致的情況下加入無水硫酸鈉為1、2、3、4g和5g進行比較，見表7。發現使用1g無水硫酸鈉的效果比較理想且不浪費藥品。

表7 鹽析試劑用量比較表

2.7 提取時間對檢測的影響

提取劑用量確定加入1g無水硫酸鈉且實驗室溫度、儀器等剩余條件一致的情況下對不同提取時間進行比較，提取時間分為10、20、30、40、50min和60min結果見表8。經過對比回收率，得出最佳提取時間為30min。如果超聲時間過長，會導致二氯甲烷揮發過快，也會導致回收率降低。

表8 不同提取時間結果比較表

2.8 提取凈化方法對檢測的影響

準確稱取1g處理好的紅棗粉末于離心管內，向管內各加入7mL二氯甲烷以及1g無水硫酸鈉，放置在超聲儀上超聲30min，完成后使用5 000r/min的離心機離心處理5min，然后將離心管中溶液轉移到10mL比色管中，用氮吹儀濃縮近干，最后用正己烷∶丙酮（1∶1）1mL溶液溶解殘渣，超聲30s，溶液待凈化。

用丙酮∶正己烷（5∶95）的混合液5 mL預淋洗氨基柱，當混合液到達柱吸附層表面時（柱子不能干），立即加入上述樣品待測溶液，當樣品溶液層達到吸附層表面時，用3mL丙酮∶正己烷（5∶95）的混合液進行洗脫，用10mL比色管收集洗脫液，用3mL丙酮∶正己烷（5∶95）的混合液洗滌燒杯后過柱，并重復1次。將收集到的洗脫液置于氮吹儀上，水浴溫度50℃，氮吹蒸發至近干。最后用丙酮準確定容至1mL。利用混合器將溶液充分搖勻最后去上層清液用0.45um的濾膜過濾，濾液待測。

2.9 精密度實驗

準確吸取克百威標準品溶液（10.0μg/mL）20μL進行5次色譜分析實驗，結果見表9。實驗結果顯示5次測定克百威標準品溶液的RSD值為1.17%。說明此方法精密度良好。

表9 精密度試驗

2.10 重復性實驗

配制6份克百威濃度為1.0μg/mL供試品溶液，在同一條件下進行6次色譜實驗，結果見表10。由表10可知，該測定方法重現性良好，RSD為1.40%。

表10 重復性試驗

2.11 溶液穩定性實驗

吸取10μg/mL克百威標準儲備液20μL進行色譜分析實驗測定峰面積，然后將10ug/mL標準儲備液避光放置于冰箱冷藏室中（4℃），分別于1天、2天、3天、5天、7天分別進行色譜分析實驗，結果見表11。克百威樣品溶液在前兩天內穩定性良好，但溶液性質仍會隨著時間的延長而有所變化，因此檢測時最好溶液現配現用。

表11 溶液穩定性

由以上方法學考察結果看出，采用振蕩法提取，HPLC測定紅棗中克百威取得了較好的實驗效果,證明此方法可行，因此，本實驗最終選擇采用振蕩法提取、HPLC法測定紅棗中是否存在克百威殘留量，為這種農藥的質量控制提供一定的參考價值。

3 結論

本文選取寧夏靈武、中寧以及新疆的紅棗作為檢測對象，建立以二氯甲烷為提取劑，通過高速離心震蕩提取及氮吹儀高度濃縮，氨基固相萃取柱凈化，采用高效液相色譜法檢測三中紅棗樣品中是否含有殘留克百威。篩選提取凈化條件，對三種紅棗樣品采取超聲波提取，選擇丙酮∶正己烷為1∶1的混合溶液進行洗脫，并單獨使用空白樣品加標以提高實驗準確度降低其他干擾。最終實驗結果顯示此次建立的克百威農藥殘留檢測法實用性高穩定性好，并且能夠快速、靈敏的檢測出紅棗中的農藥殘留。

[1]王海新，張學軍，靳偉，等.國內紅棗干燥技術的研究現狀及發展趨勢[J].農機化研究，2015，8：249-253.

[2]GB 2763-2014.食品安全國家標準.食品中農藥最大殘留限量[S].

[3]李東昊，張曉明，孫英，等.氨基甲酸酯類農藥殘留分析方法的比較[J].農藥與環境安全國際會議論文集.270-276.

[4]李萍.氨基甲酸酯農藥殘留分析方法.國外醫學衛生學分冊.1999，26(6)： 366-371.

[5]郭立，張清敏.氨基甲酸酯類農藥殘留分析方法的研究進展[J].天津農學院報，2001，8(4)：15-21.

Study on Detection Method of Carbofuran in Red Dates

Li Xue-qing,Wang Xuan,Liu Jian*
(Yinchuan Energy Institute,Ningxia Yinchuan 750000)

Objective:To establish a HPLC method for the determination of carbamate pesticide residues of Carbofuran in 3 different varieties of red dates.Methods:By single factor experiment to optimize the extraction purification process conditions,determine the red dates sample using dichloromethane extraction,amino solid phase extraction column.Finally HPLC for detection of pesticide residues and the method was studied using the method.The liquid phase of methanol and water (45∶55) was used as the mobile phase in the chromatographic conditions.The column of ODS-2,4.6 was used as a chromatographic column for analysis.Results:the recoveries of 3 kinds of red dates samples were in line with the national standards for pesticide residues.Conclusion:the experimental method used in this study can provide a reference for the quality control of Ningxia red dates.

HPLC;Red dates;Carbofuran;Carbamate pesticides

O657.63

A

2096-0387（2017）05-0037-04

銀川能源學院科研項目（2015-KY-Y-03）。

李雪晴（1986—），女，寧夏中衛人，本科，助教，研究方向：分析化學。

劉健（1962—），女，黑龍江望奎人，本科，高級工程師，研究方向：分析化學