大米谷蛋白的堿致變性和結構表征

袁江蘭，常 靜，李傳雯，康 旭

（湖北工業大學生物工程與食品學院，湖北 武漢 430068）

大米谷蛋白的堿致變性和結構表征

袁江蘭，常 靜，李傳雯，康 旭

（湖北工業大學生物工程與食品學院，湖北 武漢 430068）

為探究強堿處理大米谷蛋白結構和性質的變化規律，利用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE）、差示掃描量熱法、表面疏水性分析、掃描電子顯微鏡觀察、脫酰胺分析等方法表征堿處理大米谷蛋白的結構變化，以溶解性、乳化性、起泡性為指標表征其性質變化。SDS-PAGE和差示掃描量熱分析結果表明，當NaOH溶液濃度大于等于0.08 mol/L時，谷蛋白發生完全變性，亞基明顯降解，并且形成大分子聚集物；當pH≥12.0時，谷蛋白溶解度顯著提高，pH值為13.0時溶解度達到80%；NaOH溶液濃度大于等于0.1mol/L時造成大米谷蛋白脫酰胺，分子中谷氨酸含量明顯增加，并且溶解性、表面疏水性和脫酰胺度具有相關性；掃描電子顯微鏡觀察結果表明堿處理導致大米谷蛋白解聚，結構變松散；堿處理改善了大米谷蛋白乳化性和起泡性，以0.5 mol/L NaOH溶液處理120 min為最佳，過度堿處理會破壞谷蛋白乳化能力和起泡能力。堿處理改變了谷蛋白結構，從而改善了谷蛋白溶解性、乳化性和起泡性，使其有望在食品或相關領域中得到有效利用。

大米；谷蛋白；堿處理；結構；性質

大米中蛋白質含量為6.7%～8.3%，僅次于淀粉含量。大米蛋白主要包括清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白、谷蛋白，其中谷蛋白含量超過80%。大米蛋白是一種優質的植物蛋白，具有氨基酸組成合理、必需氨基酸含量高、過敏性低、消化率高等優點。大米蛋白中含量最高的谷蛋白是堿溶性蛋白質，只能溶解于濃度較高的堿溶液中，而不溶于水。另外，在大米的加工或存放過程中，其谷蛋白高級結構會發生進一步變化，導致難溶性增加[1]。因此使得大米蛋白的研究和應用受限。

食品加工中常用堿處理蛋白質，例如雞蛋蛋白質受堿作用形成皮蛋風味；大豆蛋白用pH 12.0的堿液熱處理，蛋白的溶解性、乳化性和彈性模量均顯著提高[2-3]；蛋白質堿熱處理降解產生的氨基酸之間會形成賴丙復合物[4]。蛋白質分子中的谷氨酰胺、天冬酰胺也可以在較強堿性條件下發生脫酰胺而變為谷氨酸和天冬氨酸，從而使蛋白質肽鏈趨于舒展[5]。堿處理大麥谷蛋白發生脫酰胺反應，蛋白結構展開并水解，同時由于二硫鍵交聯和疏水作用引起蛋白質發生可溶性聚集，而且乳化穩定性比較好[6]。所以合理利用堿處理蛋白質，可以使蛋白質的結構和性質發生改變，功能特性也發生相應改變。

大米谷蛋白由3 種亞基組成，分子質量分別約為20、34、43 kD[7]。其分子中谷氨酰胺、天冬酰胺含量較高，易通過氫鍵、疏水作用等形成致密的大分子蛋白聚合體，因此谷蛋白結構相當穩定[8]。實踐中常用較強的堿性條件溶解和處理大米谷蛋白，但關于強堿性條件下大米谷蛋白結構、性質和功能特性方面的變化卻鮮有報道。本實驗系統研究了堿處理對大米谷蛋白結構、性質和功能特性的影響，為谷蛋白的進一步研究和應用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

粳米（Oryza sativa L.） 市售。

8-苯胺-1-萘磺酸（8-anilino-1-naphthalenesulfonic acid，ANS）、四甲基乙二胺（N,N,N’,N’-tetramethylethylenediamine，TEMED）、三羥甲基氨基甲烷（tris(hydroxymethyl)metyl aminomethane，Tris）、考馬斯亮藍（G-250，R-250）、β-巰基乙醇 美國Sigma公司；N,N-甲叉雙丙烯酰胺（N,N’-methylenebisacrylamide，Bis）、十二烷基硫酸鈉（sodium dodecyl sulfate，SDS） 武漢市蓋云天生物技術有限公司；標準蛋白Marker、甘氨酸 日本Takara公司；氨基酸標準品（純度≥98%） 北京博倫凱鑫科技有限公司；茚三酮 上海三愛思試劑有限公司；其他試劑均為國產分析純。

1.2 儀器與設備

UV-2100紫外-可見分光光度計 尤尼柯（上海）儀器有限公司；FD-1真空冷凍干燥機 杭州匯爾儀器設備有限公司；K9860全自動凱氏定氮儀 濟南海能儀器股份有限公司；L8900氨基酸自動分析儀、F-7000熒光分光光度計、S-5500掃描電子顯微鏡 日本日立高新技術公司；Mini-PROTEAN電泳儀 美國伯樂公司；DSC1差示掃描量熱（differential scanning calorimetry，DSC）儀瑞士梅特勒-托利多公司。

1.3 方法

1.3.1 大米谷蛋白提取

采用堿溶酸沉法[9-10]。將大米粉和一定濃度的NaOH溶液按料液比1∶10（m/V）混合，攪拌4 h，然后5 000 r/min離心30 min，取上清液，再用0.05 mol/L的鹽酸調等電點至4.8，靜置12 h后將樣品調至pH 7.0。同樣條件離心取沉淀，再用去離子水洗沉淀3 次除去可溶性的物質。在將沉淀用質量濃度為5 g/100 mL的NaCl溶液按料液比1∶8（m/V）提取3.5 h后，除去少量的清蛋白和球蛋白，再以同樣條件離心取沉淀，沉淀采用75%乙醇按料液比1∶8（m/V）提取3.5 h后同樣條件離心除去醇溶蛋白。最后冷凍干燥得到谷蛋白凍干粉。

1.3.2 大米谷蛋白純度測定

通過凱氏定氮儀測定各谷蛋白凍干粉樣品中蛋白質含量，并通過式（1）計算大米谷蛋白純度。

1.3.3 大米谷蛋白電泳分析

參考Laemmli的方法[11]，采用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（polyacrylamide gel electrophoresis，PAGE）分析各谷蛋白凍干粉亞基組成及分子質量。將不同濃度堿液提取的大米谷蛋白凍干粉樣品和樣品緩沖液按1∶1（m/V）混合，然后加熱3 min，10 000r/min離心5min，取10 μL上樣。其中分離膠為12%，濃縮膠為4%。

1.3.4 DSC分析

稱取2 mg谷蛋白凍干粉置于密封的鋁制坩堝中，用DSC儀測定谷蛋白熱特性曲線，溫度掃描范圍為20～120 ℃，掃描速率為10 ℃/min，Al2O3石英管作參比。

1.3.5 蛋白脫酰胺度測定

大米谷蛋白凍干樣品分散于NaOH溶液中，制得5 g/100 mL谷蛋白分散液，室溫條件下攪拌30 min后于70 ℃恒溫水浴鍋中攪拌60 min使其發生脫酰胺反應。然后快速冷卻至室溫，用0.5 mol/L HCl溶液調整溶液至中性pH值，透析除鹽，凍干。然后稱取0.1 g凍干樣品，加入3 mol/L HCl溶液5 mL，密封于消化管中，120 ℃恒溫水解3 h。冷卻后用自動凱氏定氮儀測定水解后樣品的含氮量，按式（2）計算脫酰胺度。

式中：C0為未處理大米谷蛋白含氮量/%；CN為堿處理后大米谷蛋白含氮量/%。

1.3.6 大米谷蛋白溶解度測定

采用Bradford法[12]。稱取脫酰胺谷蛋白凍干粉7 mg，分散于10 mL蒸餾水中，室溫條件下攪拌30 min后10 000 r/min離心10 min取上清液，測定上清液蛋白質含量，以牛血清白蛋白為標準蛋白制作標準曲線。所有數據均為3 次測定的平均值。并按式（3）計算溶解度。

式中：m0為上清液中谷蛋白的總質量/mg；m1為凍干樣品中谷蛋白的總質量/mg。

1.3.7 大米谷蛋白表面疏水性測定

表面疏水性采用ANS熒光探針法[13]。稱取一定量大米谷蛋白分散于0.5 mol/L NaOH溶液中制成5 g/100 mL的蛋白分散液，室溫條件下攪拌30 min后于70 ℃恒溫攪拌不同時間（40、80、120、160、240 min）取樣，然后快速冷卻至室溫，用0.5 mol/L HCl溶液調整pH值至中性，透析除鹽，凍干。

將上述不同時間取樣的凍干樣品溶于pH 7.0的磷酸鹽緩沖液中，分別制成0.02、0.04、0.06、0.08、0.10 mg/mL的溶液，取4 mL，加入8 mmol/L ANS儲備液20 μL，振蕩均勻后用熒光分光光度計測定其熒光強度。激發和發射波長分別為390 nm和470 nm，激發和發射狹縫寬均為5 nm。以熒光強度對蛋白質量濃度做標準曲線，標準曲線的斜率作為蛋白質的表面疏水性指數。

1.3.8 大米谷蛋白谷氨酸含量測定

將1.3.7節制得的不同時間取樣的凍干樣品加入6 mol/L HCl溶液中，然后置于110 ℃馬弗爐中水解24 h，再用0.02 mol/L鹽酸稀釋至204 μg/mL，通過0.22 μm濾膜過濾后用氨基酸自動分析儀測定谷氨酸含量。分離柱為離子交換柱（4.6 mm×60 mm），進樣量10 μL。泵1流速為0.40 mL/min；泵2流速為0.35 mL/min。分離柱溫57 ℃，反應柱溫135 ℃。通道一檢測波長570 nm；通道二檢測波長440 nm。最后用外標峰面積法計算樣品谷氨酸含量。

1.3.9 大米谷蛋白乳化性測定

采用分光光度法。將色拉油與1.3.7節攪拌不同時間制得的大米谷蛋白凍干樣品溶液按照體積比1∶3混合后，經過均質機10 000 r/min處理后制成乳濁液。然后再將100 μL的乳濁液置于50 mL的燒杯中，用0.1% SDS稀釋到10 mL，測定500 nm波長處吸光度（A1），表征乳化能力；10 min后再次測定記為（A2），按公式（4）計算乳化穩定性。

1.3.10 大米谷蛋白起泡性測定

將1.3.7節攪拌不同時間制得的大米谷蛋白凍干樣品制成2 g/100 mL的分散液，置于500 mL的量筒中，10 000 r/min、40 s均質3 次。記下此時液面的體積V1/mL，靜置30 min后再次讀取液面的體積V2/mL。起泡能力及起泡穩定性按式（5）、（6）計算。

1.3.11 掃描電子顯微鏡觀察

將1.3.7節攪拌不同時間制得的大米谷蛋白凍干樣品進行噴金處理，然后采用掃描電子顯微鏡觀察其微觀結構。

1.4 數據統計分析

每個樣品均做3 個平行，每個平行測定重復3 次，取平均值，結果用表示。采用Origin 8.0軟件處理和分析數據。

2 結果與分析

2.1 堿法提取大米谷蛋白的純度

圖1 堿法提取的大米谷蛋白純度Fig. 1 Purity of alkali extractable rice glutelin

由圖1可知，NaOH濃度為0.02～0.08 mol/L時，提取物中谷蛋白純度隨NaOH濃度增加而增加，當NaOH濃度為0.10 mol/L時，提取物谷蛋白純度明顯下降，可能是因為NaOH濃度過高導致大米淀粉糊化[14]，同時部分淀粉及其他成分也溶于強堿溶液，雜質增加，從而使谷蛋白純度明顯下降。0.05、0.08 mol/L NaOH溶液提取物的谷蛋白純度差別不明顯，同時考慮到較高濃度堿對谷蛋白結構產生的影響，綜合分析，采用0.05 mol/L NaOH溶液提取大米谷蛋白較為宜。

2.2 堿法提取大米谷蛋白亞基和分子質量

天然的大米谷蛋白由亞基聚合而形成，每一個亞基又由一條α肽鏈和一條β肽鏈通過一個二硫鍵共價連接組成[15]，由圖2可知，不同濃度堿液提取的大米谷蛋白3 條亞基有明顯區別，在NaOH濃度為0.02、0.05 mol/L時，3 條亞基條帶較清晰，當NaOH濃度增大到0.08 mol/L時，大米谷蛋白亞基條帶顏色變淺，各亞基均有彌散，特別是分子質量約為44.3 kD的亞基基本消失，同時在分離膠的頂部有1 條較清晰的沉積帶，很可能與谷蛋白的變性聚集有關。大米谷蛋白經過多次酸堿處理會使蛋白質部分分子發生變性聚集[16]，稀堿處理使雞蛋蛋清蛋白也產生了同樣的聚集結構[17]。當NaOH濃度增大到0.10 mol/L時，3 條亞基條帶進一步變淺，分子質量約為44.3 kD的亞基消失，同時在分離膠的頂部有一條更加清晰的沉積帶。經過強堿作用的大米谷蛋白，很可能變性聚集和降解同時存在，堿性越強，聚集程度越高，同時降解也越明顯。顯然，低于0.05 mol/L的NaOH溶液對谷蛋白結構和性質影響較小，堿液濃度升高則谷蛋白結構發生明顯變化，大麥谷蛋白也具有相似情況，當用0.1、0.5mol/L NaOH溶液處理大麥谷蛋白時，起始階段即發生迅速而廣泛的水解作用，并且隨堿濃度增大水解程度加深，但是隨著處理時間延長，水解產物濃度降低同時出現了新的聚集物，說明水解物有聚集成大分子的趨勢[6]。

圖2 大米谷蛋白亞基和分子質量Fig. 2 Subunit composition and molecular mass of rice glutelin

2.3 堿法提取大米谷蛋白DSC的變化

圖3 堿液提取的大米谷蛋白DSC變化Fig. 3 DSC curves of alkali extractable rice glutelin

當蛋白質發生變性時，其結構一般表現為從有序到無序，從折疊到展開，高級結構展開時會吸收熱量，通過DSC測定可以反應大米谷蛋白是否發生變性。由圖3可知，0.02 mol/L NaOH溶液提取的大米谷蛋白有明顯的變性峰，變性溫度為72.5 ℃，而0.05 mol/L NaOH溶液提取的大米谷蛋白也有明顯的變性峰，但變性溫度降低至71.8 ℃，變性溫度逐漸降低，這是因為隨著堿濃度的增大，堿導致的變性作用越來越明顯，結構逐漸展開，因此變性溫度隨之降低[18]。當NaOH濃度大于等于0.08 mol/L時，變性峰消失，幾乎呈一條直線，說明大米谷蛋白已經在堿的作用下完全變性。當堿液濃度低于0.05 mol/L時，隨著NaOH濃度的升高，維系高級結構的作用力趨向于被部分打破，谷蛋白分子逐漸趨于變性，但高級結構尚能維系。當NaOH濃度達到0.08 mol/L時，谷蛋白分子內原有的非化學鍵作用力被破壞，谷蛋白去折疊，發生變性，也因此可能導致聚集和降解的發生[19]。DSC結果與SDS-PAGE結果一致。

2.4 堿法提取大米谷蛋白對溶解度和脫酰胺度的影響

圖4 堿濃度對大米谷蛋白脫酰胺度和溶解度的影響Fig. 4 Effect of alkali concentration on deamidation degree and solubility of rice glutelin

由圖4可知，當NaOH濃度低于0.1 mol/L時，谷蛋白未發生明顯的脫酰胺，當NaOH濃度超過0.1 mol/L時，脫酰胺度和溶解度均隨著NaOH濃度的增加而增加。NaOH濃度為0.0～0.5 mol/L時，溶解性增加趨勢明顯，但是當NaOH濃度大于0.5 mol/mL時，溶解度增加趨勢變緩。溶解度的變化和脫酰胺度的變化并未呈現明顯的正比關系，說明脫酰胺只是影響谷蛋白溶解度的因素之一。較高濃度堿液導致谷蛋白不可逆變性，當pH值恢復至中性時，變性谷蛋白發生聚集，反而會降低谷蛋白溶解度[20]。在實驗濃度范圍內，谷蛋白去折疊并進一步水解，這種結構上的改變會導致更多電荷和極性基團暴露于水中，從而促進了蛋白質-水相互作用，使溶解度增加[21]。因此谷蛋白溶解度的變化是多因素綜合作用的結果。

2.5 堿法提取對大米谷蛋白表面疏水性的影響

圖5 堿熱處理對大米谷蛋白的表面疏水性影響Fig. 5 Effect of heating time on surface hydrohobicity of rice glutelin

由于脯氨酸、亮氨酸、丙氨酸、纈氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸等非極性氨基酸含量較高，谷蛋白具有很強的疏水性[22]，與其他分子相互作用的主要驅動力也是疏水作用力[23]。谷蛋白中谷氨酰胺和天冬酰胺含量較高，使其極性進一步降低，因而溶解性很差。堿處理導致谷蛋白脫酰胺，極性增加，疏水性降低，溶解度隨之增加，結果如圖5所示。0.5 mol/L NaOH溶液處理的大米谷蛋白，隨著堿熱處理時間的延長，表面疏水性呈現下降趨勢。當處理時間超過120 min時，表面疏水性指數趨于穩定。大麥谷蛋白用0.1 mol/L NaOH溶液處理時，80 min內表面疏水性顯著上升，脫酰胺度也增加至5.6%，用0.5 mol/L NaOH溶液處理超過90 min，脫酰胺度持續增加，但表面疏水性趨于穩定，同時還發現水解度持續增加[6]。說明堿處理時蛋白質的疏水性變化與脫酰胺、水解具有相關性。實驗濃度處理的谷蛋白分子發生3 種主要的變化：一是分子變性，空間結構趨于舒展，部分內部基團暴露；二是脫酰胺；三是分子部分降解。這3 種變化均會導致谷蛋白表面疏水性發生變化。

2.6 堿法提取對大米谷蛋白谷氨酸含量的影響

圖6 堿處理大米谷蛋白谷氨酸含量Fig. 6 Glutamic acid content of rice glutelin after different heating times

由圖6可知，0.5 mol/L NaOH溶液處理的大米谷蛋白隨著處理時間的延長，谷氨酸含量逐漸增加。這一變化與脫酰胺度隨時間增加有關。谷氨酸含量增加使大米谷蛋白極性增大，疏水性降低。蛋白質脫酰胺使谷氨酰胺和天冬酰胺中的酰胺基轉變為羧基，最終成為谷氨酸和天冬氨酸[24]。因此在對大米谷蛋白堿熱處理的過程中，谷氨酸含量的增加也說明谷蛋白發生了脫酰胺。

2.7 堿法提取對大米谷蛋白乳化性和起泡性的影響

圖7 堿熱處理對大米谷蛋白乳化性（a）和起泡性（b）的影響Fig. 7 Effect of alkali and heating treatment on emulsifying properties (a)and foamability (b) of rice glutelin

如圖7a所示，與未處理的大米谷蛋白相比，經堿處理后乳化性總體上有提高的趨勢，當熱堿處理時間為0～120 min時，乳化能力明顯增加，由0.578增大到0.896。隨后乳化能力又逐漸降低，乳化穩定性的變化趨勢與乳化能力變化趨勢保持一致，但乳化能力變化規律與大麥谷蛋白有很大區別，而與很多其他蛋白如大豆蛋白、玉米蛋白等規律一致，即適度的脫酰胺改善了蛋白質的乳化能力，而過度脫酰胺則破壞了蛋白質的乳化能力，從而減少蛋白質的可利用性[25]。溶解性可以作為決定蛋白質功能特性的重要因素，溶解性良好的蛋白一般都具有良好的功能性質[26]。溶解性的改善有利于功能特性的改善，從而拓寬蛋白質的應用范圍[5]。所以經過堿處理的大米谷蛋白乳化性提高可歸因于溶解性增加，可溶性蛋白具有表面活性，易于吸附于油-水界面，但是乳化性也受溶解蛋白結構影響[27]，堿處理時間延長導致蛋白結構持續變化，一定程度的降解和高級結構的展開等結構變化均會直接影響大米谷蛋白的乳化性[28]。適度降解導致難溶蛋白乳化性顯著提高[29]。

如圖7b所示，在0～120 min期間，起泡性逐漸增大，這與大米谷蛋白的溶解性存在相關性，在強堿溶液中，隨著處理時間的延長，谷蛋白溶解性逐漸增加，從而更易在空氣泡表面形成剛性膜狀結構并且產生更多空氣泡，增加了起泡性[30]。當處理時間超過120 min后，起泡性又呈明顯下降趨勢，說明起泡性還與蛋白質結構具有相關性，長時間堿性條件下加熱使谷蛋白降解，空間結構也發生明顯改變，對起泡能力影響顯著。起泡穩定性和起泡性的變化趨勢基本一致。

圖8 大米谷蛋白超微結構（×2 500）Fig. 8 Ultrastructure of rice glutelin (× 2 500)

由圖8可知，未經堿處理的大米谷蛋白聚集成團，結構十分緊湊，沒有明顯孔隙。堿處理40 min時，結構變得松散，大米谷蛋白聚集體開始解體。堿處理超過120 min，聚集體進一步解體，形成細小狀碎片，且隨著處理時間延長，形成的碎片越來越小。說明經過堿處理，大米谷蛋白逐漸解聚，結構變松散，蛋白質發生明顯降解。

3 結 論

大米谷蛋白是堿溶性蛋白質，在強堿條件下溶解性較好，并且相對穩定，但是其溶解性、穩定性和結構等和強堿溶液的濃度相關。當強堿液濃度低于0.05 mol/L時，大米谷蛋白結構和性質未發生明顯變化，而溶解度大幅度提高。更高濃度的堿液導致大米谷蛋白明顯變性和降解，谷蛋白發生明顯的脫酰胺反應，谷氨酸含量增加，表面疏水性逐漸減弱，起泡性和乳化性也發生變化，但起泡性和乳化性的變化與水解程度非正相關，適度的水解有利于提高其起泡性和乳化性。關于強堿性條件下大米谷蛋白結構變化尚有待進一步深入研究。

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Alkali Denaturation and Structural Characterizations of Rice Glutelin

YUAN Jianglan, CHANG Jing, LI Chuanwen, KANG Xu
(School of Food and Biological Engineering, Hubei University of Technology, Wuhan 430068, China)

The changes in the structure and properties of rice glutelin after alkali treatment were explored. Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), automatic amino acid analyzer, differential scanning calorimetry(DSC), surface hydrophobicity analysis, scanning electron microscopy (SEM) and deamidization analysis were applied to elucidate the structure of rice glutelin, and solubility, emulsifying properties and foamability were determined to clarify the change of its properties. The results from SDS-PAGE and DSC showed that rice glutelin was denaturated completely,when the concentration of sodium hydride was 0.08 mol/L or higher, causing considerable degradation of subunits and the formation of macromolecular aggregates. When pH was 12.0 or higher, glutelin solubility increased significantly and reached 80% at pH 13.0. Alkali at high concentration above 0.1 mol/L caused deamidization, leading to a significant increase of glutamate content in the glutelin molecule, and the degree of deamidization was correlated with solubility and surface hydrophobicity. Results from SEM showed that alkali treatment led to the degradation and more loose structure of rice glutelin. Appropriate alkali treatment improved the emulsifying properties and foamability of rice glutelin, and the optimum condition was treatment of rice glutelin for 120 min with 0.5 mol/L NaOH solution, but excessive alkali treatment could destroy its emulsification properties and foamability. Proper alkali treatment changed the structure of rice glutelin and accordingly improved its solubility, emulsifying properties and foamability, which is expected to be effectively utilized in food or related fields.

rice; glutelin; alkali treatment; structure; properties

10.7506/spkx1002-6630-201721007

Q518.4

A

1002-6630（2017）21-0043-06

袁江蘭, 常靜, 李傳雯, 等. 大米谷蛋白的堿致變性和結構表征[J]. 食品科學, 2017, 38(21): 43-48.

10.7506/spkx1002-6630-201721007. http://www.spkx.net.cn

YUAN Jianglan, CHANG Jing, LI Chuanwen, et al. Alkali denaturation and structural characterizations of rice glutelin[J].Food Science, 2017, 38(21): 43-48. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-201721007.http://www.spkx.net.cn

2016-07-10

國家自然科學基金面上項目（31371741）

袁江蘭（1970—），女，副教授，博士，研究方向為食品蛋白質。E-mail：jlyuan1229@163.com